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《第一军医大学》 2000年
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人胰岛素样生长因子1基因的克隆、表达及产物纯化与检定

吴岚晓  
【摘要】: 胰岛素样生长因子1(IGF-1)是一种多功能细胞调控因子,大量 实验表明,IGF-1生物学作用广泛,对多种组织器官有生物学作用。目 前,人IGF-1(hIGF-1)制剂在临床上已用于治疗糖尿病、胰岛素抵抗 综合症、侏儒症及神经系统疾病等多种顽疾,取得较好的临床效果,显 示出良好的应用前景。 为获得大量纯度高的、具有生物学活性的hIGF-1以满足基础研究 与临床应用的需要,本文应用基因工程方法,将hIGF-1基因与原核表 达载体pRSET B进行重组,在大肠杆菌中进行了表达,并对其分离纯 化及性质检定方法进行了探讨。 首先,根据已知天然hIGF-1编码基因序列,在不改变氨基酸序列 的条件下,人工设计合成了适合于在大肠杆菌中表达的hIGF-1基因并 克隆于pUC19中,构建了pUCIGF克隆载体。设计引物,导入合适的 酶切位点,以pUCIGF为模板,PCR扩增目的基因,经适当酶切后,克 隆于原核表达载体pRSET B中,构建了pRSET-IGF表达重组质粒,经 PCR筛选、酶切鉴定和核苷酸序列测定,确定重组质粒pRSET-IGF构 建完全正确。将重组质粒pRSET-IGF转化宿主菌BL21,工程菌发酵经 IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳分析表明,可表达分子量约为7.8kDa的 重组蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的10-20%。 发酵后,菌体采用超声破菌,目的蛋白以可溶性形式存在于裂解液 上清中,上清经阴离子交换,疏水层析及分子筛纯化后,经SDS-PAGE 电泳检测,纯度达98%以上,HPLC分子筛测定纯度为91.4%。蛋白印 迹分析显示,此纯化蛋白能与抗hIGF-1抗体发生特异性反应,表明此 表达产物具有hIGF-1抗原活性,重组蛋白良好的促NIH3T_3细胞增殖效 应,显示重组hIGFI(rhIGFI)具有一定的生物学活性。 上述结果表明,人工合成hIGF-l基因能在大肠杆菌中以可溶性形 式获得高效表达,经纯化后获得有生物学活性的rhIGF纯品,为获得 大量基因工程产品以满足进一步研究与临床应用奠定了基础。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R346

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王凤泽;人胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2003年
【参考文献】
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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9 张兴国;石国庆;柳楠;任航行;代蓉;刘国庆;;4对微卫星DNA标记在3个绵羊品种中多态性的研究[J];安徽农业科学;2007年09期
10 高双成;王世华;施江;景蕊莲;孔祥生;;小麦种子萌发期水分胁迫诱导表达差异cDNA的研究[J];安徽农业科学;2007年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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7 刘煜德;吴辉;吴伟;李荣;黄衍寿;;肺炎衣原体感染加重高胆固醇饮食兔动脉粥样硬化及黄连解毒汤干预作用[A];中华中医药学会心病分会第十次全国中医心病学术年会暨吉林省中医药学会心病第二次学术会议论文精选[C];2008年
8 付桂香;李建民;周勇;赵世萍;;山茱萸总苷抗炎免疫抑制作用及其机理研究[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
9 贾斌;张苏云;席继锋;彭林泽;曾献存;余志勇;;新疆塔里木马鹿遗传多样性的微卫星分析[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
10 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
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1 陈雪红;海生素对肝癌的抑制作用及机制研究[D];中国海洋大学;2010年
2 乔小放;RNA干扰SUMO1基因对结肠癌Hct116细胞生物学行为的影响[D];吉林大学;2011年
3 艾育芳;早晚熟油菜成花机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
4 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
5 朱静媛;志贺菌属细菌整合子与多重耐药性研究[D];郑州大学;2010年
6 朴龙;草苁蓉环烯醚萜苷的肝损伤保护作用及抑瘤作用的研究[D];延边大学;2011年
7 王宏军;南五味子多糖提取及其对雏鸡免疫活性的研究[D];吉林大学;2011年
8 秦雪;树鼩肝癌发生过程中的差异蛋白质组学研究及Prx家族的表达验证[D];广西医科大学;2006年
9 李桂英;Serratia sp.SYBC H发酵产蛋白酶,酶学性质,应用及其基因克隆研究[D];江南大学;2011年
10 杨文凯;兔心外膜脂肪转染apM1基因对冠状动脉粥样硬化形成的影响[D];华中科技大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许仄平;齐墩果酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注时糖原含量的影响[D];南京医科大学;2009年
2 张杰;大鼠肝脏缺血再灌注损伤时齐墩果酸对氧自由基的影响[D];南京医科大学;2009年
3 华福洲;齐墩果酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中PI3K-AKT-GSK-3β信号传导通路的影响[D];南京医科大学;2010年
4 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
5 王翠;杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a的基因克隆与功能分析[D];郑州大学;2010年
6 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
7 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
8 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
9 黄静;同一个体血清和贲门癌组织幽门螺杆菌感染对比研究[D];郑州大学;2010年
10 解文飞;尼日利亚非洲蜂和本地意蜂及其杂交二代形态特征与微卫星DNA遗传多样性研究[D];安徽农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 范子荣,杨冬华,覃汉荣,徐重,邱庆林;IGF-I、IGF-II及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达[J];癌症;2000年02期
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10 夏乐先,王建纲,刘晓辉;重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因工程菌的发酵研究[J];中国生化药物杂志;2002年02期
【二级引证文献】
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1 张楚龙;IGF-Ⅱ及bFGF在肾上腺疾病组织中的表达及意义[D];南方医科大学;2011年
2 郭玉姣;猪脂肪沉积相关基因表达的发育性变化及其品种差异[D];四川农业大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 陈军,汪慧民,李满枝,吴荫棠;非同位素PCR-单链构象多态性技术的建立和应用[J];生物化学与生物物理进展;1994年06期
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3 满宜刚,林晓霞,舒志荣,李自普;病毒性脑炎患儿血和脑脊液胰岛素样生长因子-1的变化[J];实用儿科临床杂志;2004年12期
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10 隋向前,杨成悌,张缤,刘欣跃,林文果,赵锋;转化生长因子β_1和胰岛素样生长因子1与原发性高血压左室重构的关系[J];中国心血管病研究杂志;2005年03期
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2 王雷;王宝维;贾晓晖;杨志刚;李桢;;五龙鹅IGF-1基因克隆与表达特性研究[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
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5 陈之玺;张世宏;;移液器数据处理自动化的设计和应用[A];江苏省计量测试学术论文集(2010)[C];2010年
6 曹作群;肖红清;;大电流型低电阻测试仪的原理及其检定[A];’02全国电工测试技术学术交流会论文集[C];2002年
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8 杨忠;楼红英;吴本云;;信号发生器自动检定系统[A];江苏省计量测试学会2005年论文集[C];2005年
9 喻鑫罡;张先龙;曾炳芳;;低频微动后TGF-β1与IGF-Ⅰ在新骨组织中的表达[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
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4 肖亮;启动子多态性对IGF-1基因表达的影响及其在大鼠门脉高压性血管病变中作用机制的研究[D];华中科技大学;2009年
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1 吴岚晓;人胰岛素样生长因子1基因的克隆、表达及产物纯化与检定[D];第一军医大学;2000年
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4 曾煜周;胰岛素样生长因子-1与高血压左心室肥厚的相关性研究[D];广西医科大学;2009年
5 赵广;IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响[D];中国医科大学;2005年
6 刘洪霞;胰岛素样生长因子1重组类似物的研究[D];吉林大学;2006年
7 陈瑞英;慢性肺源性心脏病患者血清胰岛素样生长因子1的水平及意义[D];郑州大学;2002年
8 胡静;IGF-1和bFGF对人牙髓干细胞增殖及分化影响的实验研究[D];第三军医大学;2006年
9 陆华拓;兔腰椎间盘早期退变及其微创转基因治疗的初步研究[D];昆明医学院;2009年
10 李蓓;胰岛素样生长因子1腺病毒载体对全氟异丁烯致小鼠吸入性肺损伤防护作用的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
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