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《第一军医大学》 2000年
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高侵袭转移Lovo细胞亚系的筛选与建立

陈艾保  
【摘要】: 大肠癌转移是一个复杂的过程,是肿瘤和宿主相互作用的共同结果, 其中肿瘤细胞在肿瘤侵袭的过程中起主导作用,研究瘤细胞生物学特性不 仅对研究肿瘤的发生及其发展具有重要意义,而且对了解它们的转移特性 具有重要作用。Lovo细胞是大肠癌未分化的高转移腺癌细胞,其转移期 间较长,4周的转移率约为40-50%。目前国内应用的Lovo细胞由于经 过多次的体外传代培养,细胞已出现退化现象,转移率有逐渐下降的趋势, 转移周期偏长。本实验采用体内连续传代方法,应用免疫缺陷动物裸鼠, 经脾反复接种瘤细胞,建立肝转移模型,从转移灶分离瘤细胞,经过多次 重复接种,使某些高转移亚系瘤细胞逐渐适应并呈优势生长和稳定下来, 同时去除不适应和不稳定亚系,获得了较稳定的具有较强转移能力的亚 系,该亚系具有在某器官形成高选择转移灶特性,经该方法筛选出的Lovo 细胞亚系可用于各种实验性大肠癌的实验和治疗研究。 本研究主要内容包括: 1、应用裸鼠体内连续传代方法,从脾接种建立肝转移模型,通过这 种实验性转移,选择并建立高侵袭转移的Lovo细胞亚系。 2、进行Lovo细胞亚系体外相关生物学特性的检测,通过调查瘤细胞 电泳泳动速率、运动能力、生长活力、细胞周期和DNA含量及体外侵袭 能力等参数,综合分析Lovo亚系细胞的侵袭能力。 3、进行Lovo细胞亚系裸鼠脾脏种植的体内观察与鉴定,探讨它的遗 传稳定性、对环境的适应性和转移潜能。 主要方法及结果: l、应用体内连续传代方法,把L。V。细胞接种入裸鼠脾脏,选择肝转 移灶,进行瘤细胞分离培养,重复3次脾接种,筛选出高侵袭转移的L。VO 细胞亚系。 二、对高侵袭转移L。V。亚系细胞进行裸鼠脾种植实验,结果显示L。VO 亚系细胞有遗传很稳定、环境适应性强和转移潜能高等特点。 3、对高侵袭转移L。V。亚系细胞和母系L。V。细胞进行瘤细胞电泳泳 动速率检测,研究瘤细胞表面电荷性质和密度变化,结果显示LOVO亚系 细胞电泳泳动速率明显高于母系LOV。细胞。 4、应用MTT法测定高侵袭转移L。v。亚系细胞和母系L。v。细胞的 活力,研究瘤细胞的生长速度,结果显示L叫。亚系细胞和母系LOVO细 胞生长速度有显著差别。 5、应用琼脂糖滴法测定瘤细胞的运动能力,结果显示高侵袭转移LOVO 亚系细胞移出琼脂糖滴的细胞数和距离明显高于母系L。V。细胞。 6、应用单层NIH3T3细胞法测定瘤细胞的体外侵袭能力,结果显示 高侵袭转移LOvO亚系细胞侵袭能力明显高于母系L。v。细胞。 7、应用 FCM测定瘤细胞的细胞周期和 DNA含量,结果显示高侵袭 转移LOV。亚系细胞SP明显高于其母系L。V。细胞,说明DNA合成增加。 本研究结果提示: L。V。亚系细胞是L。VO细胞一高侵袭转移细胞亚系。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R73-37

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