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《第一军医大学》 2000年
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应用生物素—亲和素预定位技术对荷人大肠癌裸鼠模型MR免疫显像的实验研究

柴青芬  
【摘要】: 实验目的:单克隆抗体介导的MR免疫成像不但有助于微小癌灶的 检出,而且有可能对肿瘤的组织类型作出术前诊断。但由于肿瘤局部选 择性浓集的Gd~(3+)离子浓度较低,产生的信号较弱,成为MR免疫成像发 展的障碍。生物素-亲和素预定位系统三步法具有信号放大作用,能够大 幅度提高肿瘤/非肿瘤的放射性核素的比值,在放射免疫显像动物实验和 临床应用中取得了良好的效果。MR免疫成像的原理基本同放射免疫成 像,只是所用的示踪元素不同。为了提高瘤靶局部Gd~(3+)离子的浓度,增 强肉眼可辨的信号强度,本实验设想应用生物素-亲和素预定位技术,对 皮下接种人大肠癌的裸鼠模型进行实验研究,探索抗体生物素化的条件、 预定位增强方法和增强特点,以达到提高MR免疫成像敏感性的目的。 材料和方法:1、6-8周龄的BALB/C裸鼠20只,在右前肢背部和部 分右臀部皮下注射入大肠癌LoVo细胞,制作肿瘤模型。2、将抗CEA 单克隆抗体CL_(-3)和生物素酯(NHS-LS-Biotin/DMSO),按1∶30-50摩尔 比,在碱性条件下活化。3、GdCl_3和DTPA-B反应后,用G-10凝胶层 析法去除游离的Gd~(3+)离子。4、单克隆抗体CL_(-3)与cDTPA偶联,并用超 速离心法除去游离的DTPA,将CL_(-3)-DTPA偶合物标记Gd~(3+)。5、将动物 分为三组:预定位组、抗体对照组和Gd-DTPA组。预定位组,在第一天 尾静脉注射生物素化单抗(McAb-B),24小时后腹腔注射Av和SA,48 小时尾静脉注射Gd-DTPA-B。抗体对照组和Gd-DTPA组则在第三天, 即预定位组的首次注射后48小时,尾静脉分别注射McAb-Gd-DTPA和 Gd-DTPA。所有动物均进行平扫,注射Gd造影剂增强后20分钟、2小 时、8小时及24小时5次扫描,测定各时间点信号强度及背景噪声标准 差。 结果:1、CL_(-3)单克隆抗体在生物素化后,每个抗体可结合11-23个 生物素分子,结合12个时,抗体活性高达95%。2、应用G-10凝胶层析 法可去除Gd-DTPA-B中所含的游离Gd~(3+)离子。3、预定位法对肿瘤有特 异性增强作用,注射Gd-DTPA-B 2小时后,只有肿瘤组织有明显强化作 用,而肌肉组织则无强化作用。在注射 Gd-DTPAB 20分钟,肿瘤信号 强度明显升高,以后呈缀慢下降趋势,在24小时后仍可见到有差别。4、 预定位法有信号放大作用,其特异性信号升高幅度(强化率)约为43%, McAbodoTPA对肿瘤亦有特异性增强作用,但其增强幅度较低,在24 ’J\时时其信号升高门.9%。据此预定位法强化率为抗体直接标记法的 2.4 倍。5、与直接标记单抗相比,预定位法提高了增强后对比度噪声比,增 强后各时间分别是平扫的5.7、4.2、4.8、4.3倍。而抗体对照组在24 ,J’ 时最大时仅为平扫的2.4倍。 结论:预定位法对荷人大肠癌裸鼠肿瘤有特异性增强作用和信号放 大作用,对提高瘤靶Gd3”的选择性浓集,具有显著性促进作用;优于传 统的抗体直接标记法。可为Gd标记的单克隆抗体磁共振靶向诊断提供 新途径。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R73-36

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【参考文献】
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