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《第一军医大学》 2000年
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p16基因对胶质瘤细胞生长作用的实验研究

陈祎招  
【摘要】: 不受控增殖是肿瘤细胞的根本属性。随着现代分子生物学的发展, 人们认识到肿瘤细胞增殖同正常分裂细胞一样,也按一系列有序步骤进 行,称为细胞周期,而在这一周期的若干期相间存在着一些关卡,它们 的调控异常则可直接导致细胞的恶性增殖,其中,周期蛋白依赖性激酶 (CDK)是这些关卡转变控制中的核心,这一分子机制是决定细胞停止或 继续增殖的关键。p16基因正是这一过程的一个重要调控分子,其主要 作用是特异性的抑制细胞周期素D(cyclin D)-细胞周期素依赖性激酶 (CDK)复合体,从而达到对细胞由G_1期到S期的调控。目前发现,在 多种肿瘤中都有p16基因的缺失或突变,其中尤以脑胶质瘤中的缺失率 最高,因此,探索p16基因与脑胶质瘤的关系将具有重大意义。 实验方法:采用脂质体及磷酸钙转染的方法将外源野生型p16基因 导入胶质瘤细胞系U251,SWO,C6,采用Northern杂交及免疫组化检测 p16基因的表达,分别观察p16基因长期稳定转染与短暂转染对胶质瘤 细胞的作用,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析转染后细胞周 期分布的变化,从p16基因长期稳定转染与短暂转染对胶质瘤细胞的不 同作用入手来探索p16基因与胶质瘤细胞凋亡的关系。同时,运用MTT 法分析稳定转染p16基因后胶质瘤细胞系对放疗及VM26,CDDP化疗敏 感性的变化,流式细胞仪检测化疗药物作用后的胶质瘤细胞周期与凋亡 的变化进而分析其可能的细胞生物学及分子生物学机制。 实验结果表明:(1)p16基因可以抑制胶质瘤细胞生长并诱导胶质 瘤细胞的G_1期阻滞,使处于G_1期的胶质瘤细胞增加约10.1%-25.8%;(2) p16基因的短暂转染可以诱导胶质瘤细胞凋亡而长期稳定转染则无明显 的凋亡诱导作用;(3)p16基因转染后,胶质瘤细胞的放疗敏感性增加, 在8Mx射线,距离100cm,照射野20×15cm,吸收剂量8Gy,剂量率 500cGy/inin的条件下,pl6基因转染组细胞的抑制率为对照组的 1石2.3 倍:同时,胶质瘤细胞对**26,***P的化疗敏感性降低并可抑制 VM26,CDDP诱导的胶质瘤细胞凋亡。 结论:pl6基因可诱导胶质瘤细胞的q期阻滞进而抑制胶质瘤细胞 的恶性增殖;pl6基因可诱导胶质瘤细胞的凋亡但仅发生在pl6基因的 短暂转染过程中,而pl6基因的长期稳定转染后无明显的凋亡诱导作用, 胶质瘤细胞的遗传异质性与 pl6基因转染后的“自然选择”作用可能是 其主要机制;pl6基因可以通过其诱导的胶质瘤细胞o期阻滞进而抑制 VM26,CDDP诱导的细胞凋亡从而降低它们对VM26,CDDP的化疗敏感 性,同时,pl6基因可以增加胶质瘤细胞的放疗敏感性,这些现象的分 子生物学机制仍有赖于我们的进一步深入研究,
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R739.41

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【参考文献】
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