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《第一军医大学》 2000年
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生物人工肝的构建及其治疗急性肝衰的实验研究

胡还章  
【摘要】: 急性肝衰(ALF)的治疗是当代临床医学的一大难题,常规治 疗病死率高达80%。虽然肝移植(LT)可将ALF的病死率降低到 30-50%,但是,LT存在急诊手术时供体来源困难、手术复杂、患 者需要终生接受免疫抑制治疗及费用昂贵等缺点。作为肝脏替代疗 法的另一个方向,人工肝的研究在近40年来取得了长足的进展。目 前,国外以培养的肝细胞与人工辅助装置相结合的生物人工肝 (BAL)所进行的动物实验及临床初步应用结果已表明,BAL不仅 可能代偿ALF患者肝脏解毒、生物合成功能及稳定内环境、阻断恶 性循环,而且为具有强大再生能力的肝细胞提供了再生的条件和时 间。经过逐渐成熟和完善后,BAL可望将不会仅停留为等待LT的 一种过渡治疗手段,而极有可能象肾透析曾给肾功能衰竭的治疗带 来革命性变化一样,为ALF的现代治疗提供最大的希望。结合本课 题的前期工作,本研究用微载体粘附悬浮培养的原代正常猪肝细胞 作为生物材料构建BAL,进行治疗猪ALF的实验,旨在为BAL早 期进入临床Ⅰ期试验提供依据。 第一部分:猪肝细胞的分离与微载体粘附悬浮培养 目的 获得一个具有丰富来源的肝细胞生产技术。 方法 取本地杂种小猪作为肝细胞供体。用Seglen改良二步胶 原酶原位循环灌注法分离获取肝细胞悬液,台盼蓝(TB)染色法计 算细胞数及细胞活率。将Cytodex-3微载体按5mg/mL的浓度加入 经5%甲基硅树脂乙酸乙酯溶液硅化的STUART搅拌培养瓶中。猪 肝细胞按5×10~6/mL的密度全部接种于培养瓶,随后加入培养液及 附加因子至1/3最终体积,搅拌培养6小时后加入培养液及附加因 子至最终体积200mL,然后持续搅拌培养。光镜及电镜下观察细胞 生长情况,动态检测培养上清中白蛋白及尿素浓度。 结果 每只猪肝平均获取肝细胞数为N.26土 0.75)XIO‘\活 率为o91.22士0.83)%。猪肝细胞在接种后即呈明显的Cytodex刁 聚集趋势,在培养48-72小时后可见典型的多细胞聚球形成,该形 态特点及白蛋白、尿素合成能力可保持约4周左右。 结论 采用IV型胶原酶原位门腔循环灌注可分离获取大量。高 活性的原代正常猪肝细胞,经微载体粘附悬浮培养后可达到高密度。 高活性、长期离体培养的目的,可满足BAL对生物材料的要求。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R575.3;R318.14

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