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《第一军医大学》 2001年
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E1B缺陷型腺病毒抗肿瘤效应与宿主细胞P53及腺病毒受体的关系

饶进军  
【摘要】:应用病毒直接杀死肿瘤细胞是抗癌研究中的新方法,其中E1B缺陷 性腺病毒 dl1520(也称ONYX-015)是研究进展最快的一个,目前在国 外已进入Ⅲ期临床试验,临床试验结果非常令人振奋。dl1520系人C 族第5型腺病毒,其基因组核苷酸2022处有C→T的点突变,2496~3323 之间缺失827bp的核苷酸片段,它不能表达腺病毒E1B55KDa蛋白,是 一种缺陷性腺病毒。McCormick研究小组经研究认为缺乏E1B55KDa蛋白 的dl1520会受到宿主细胞P53的抑制,因而不能在含有正常P53的细 胞中复制,但可以在P53缺陷的细胞中复制并杀死宿主细胞。鉴于人类 肿瘤中有半数以上存在P53的缺陷,所以dl1520被用于治疗恶性肿瘤。 然而,近来的一些研究显示dl1520的复制与宿主细胞P53无关,dl1520 能在一些P53正常的细胞中复制,相反在一些P53缺陷的细胞中反而不 能复制。这些相互矛盾的结果不仅引起学术界的争论,同时也给应用 dl1520抗肿瘤出了难题,尤其是对于安全性问题是一个严重的考验。 为阐明P53在dl1520复制中的作用,我们对dl1520在不同P53状 况细胞中的复制进行了研究。进一步为避免细胞内其他因素的干扰,我 们还利用转基因的方法导入外源性P53基因,研究P53对dl1520复制 的影响及对腺病毒(包括dl1520和野生型腺病毒)致细胞病变(CPE) 的影响。同时我们还研究了dl1520在正常人细胞中的复制及CPE作用。 为探讨腺病毒感染与 dl1520作用的关系,我们应用 Ad-βgal报告基因 和抗Hexon抗体调查了不同细胞的感染情况,以RT-PCR检测了腺病毒 受体的表达情况。另外,尝试以阳离子脂质体Lopofectamine介导dl1520 直接感染宿主细胞,增加耐受细胞的感染率,观察感染对 dl1520作用 的影响。 我们的结果显示dll520能在P53”的HenG-2细胞和P53-的Hen3B、 U251、A431细胞中复制中并产生pE,但却不能在PS丁的LOVO细胞和 P53的 PC-3,T-24,Jurkat,K562,HL-60细胞中复制,也不产生CPE。 研究还发现dl 1520能在正常人肝细胞中复制及产生吓E。以外源性P53 基因导入不表达P53的Hep3B细胞后,能表达出正常的P53蛋白,而 dll520能在这种表达外源性 P53的 Hep3B-P53细胞中复制及产生 CPE。 研究还发现腺病毒(包括野生型及m 缺陷型)在HeP3B、U251细胞中 产生oE的效果与在表达外源性P53蛋白的HeP3B-P53,U251-P53细胞 基本一致。另外,通过对感染率的检测,发现对 dll 520耐受的细胞均 呈现低感染状态,这些低感染的细胞CAR水平都很低或完全缺失。以 卜ipofectamie可以不依赖CAR而直接介导腺病毒感染 PC-3和 Jurkat细 胞,细胞增加感染后同样可出现CPE效应。 我们的结果证明dll520的复制及CPE效应与宿主细胞的P53无关, P53及P53-EIB55KDa复合物对腺病毒(包括野生型腺病毒)的CPE作用 没有影响。我们发现 dl 1520能在正常人肝细胞中复制并损害肝细胞, 其效果与肝癌细胞HepG-2相当。研究还表明感染过程是影响dll520作 用的主要因素,而细胞CAR是影响感染的主要原因。Lipofectamine可 以增加dll520对一些耐受细胞的感染、促进细胞产生CPE。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R73-36

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