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《第一军医大学》 2001年
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重组hIGF-I工程菌的发酵及产物纯化的研究

刘真喜  
【摘要】: 胰岛素样生长因子-I(IGF-I)是一种多功能的细胞增殖调控因子。重 组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)是一种很有发展潜力与广阔临床应 用前景的药物,现代生物技术的发展为重组hIGF-I的大规模生产提供了 可能途径。 基因工程菌的发酵技术是基因工程药物大规模生产的必备技术。本研 究构建了重组hIGF-I工程菌E.coli BL21(DE3)/pRSET-IGF,对该重组 工程菌的生长及产物的表达规律进行了探索,并在此基础上进行高密度 发酵的初步研究,菌体最终发酵密度达OD_(600)值20,表达的重组蛋白占 菌体总蛋白的25.4%,初步形成了一套重组hIGF-I工程菌发酵的工艺。 重组hIGF-I在重组工程菌E.coli BL21(DE3)/pRSET-IGF中以包涵 体的形式表达。针对这一重组蛋白包涵体的洗涤、变性、复性以及最终 的分离纯化过程进行研究。实验结果表明,洗涤的包涵体纯度可达67.8%; 8mol/L尿素及10mmol/L DTT可以使包涵体充分溶解。在复性过程中, 采用分步透析逐渐降低尿素浓度的方法,可以有效地提高复性的效率; 与此同时,在复性液中加入氧化型及还原型的谷胱苷肽有助于提高变性 蛋白质中二硫键的正确配对。复性后的蛋白质采用Q Sepherose F F离子 交换层析分离,可获得有一定生物学活性和免疫抗原性的重组蛋白。质 谱分析目标蛋白分子量为7.8KD,与天然结构IGF-I蛋白分子一致;重 组蛋白的纯度为85.27%,回收率为23.49%。
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