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《第一军医大学》 2002年
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大肠癌HGF/SF-met信号通路转录诱导基因表达谱及阻断作用研究

李学农  
【摘要】: 一、背景、目的和意义 肿瘤转移(tumor metastasis)是一个多步骤、多因素、多基因的复杂过程,基本过程包括脱离(detachment)、侵入(intravasation)、循环(circulation)、附着(arrest)、侵出(extravasation)、血管生成(angiogenesis)及生长(growth)等。而所有步骤均可归结为癌细胞与宿主细胞及细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)之间的相互作用——粘附、浸润、移动、蛋白酶分泌以及复杂的信号转导过程,基于细胞信息传递和调控在细胞生命活动中处于主导地位,癌细胞信号转导系统的作用及相关机制对于揭示肿瘤转移的本质,探索新的抗肿瘤转移途径具有十分重要的作用。我们发现胚胎组织形态分化过程中干细胞及其原始分化细胞一系列迁移演化的过程与肿瘤转移过程极其相似。从这一新思路出发,通过文献分析得知,HGF/SF-c-met信号通路是目前诱导细胞迁移的关键信号通路。HGF/SF-c-met信号通路是由配体分子HGF/SF(hepatocyte growth factor/scatter factor,以下简作HGF)作用于其特异性受体c-met,引起一系列信号转导蛋白的酶促反应,促发相应生物学效应的信号传递路径。HGF是由间质细胞(如纤维母细胞、神经胶质细胞、肝贮脂细胞、巨噬细胞等)产生的具有多种生物学效应的多能性细胞生长因子,是目前所发现具有最强活性的刺激肝细胞再生的细胞因子,曾误以为它就是特异性肝细胞生长因子,事实上它对肾小管上皮、肺泡上皮、胃肠道粘膜上皮等许多上皮细胞均具有促有丝分裂(mitogen)、促运动(motogen)及促形态发生 。oz。。。。。。y。 帅orphogen)活性,llGF书F能促进癌细胞生长、粘附、移动及浸润,并能 刺激血管内皮细胞生长,己列为重要的促血管生成因子。c仰o t是 HGF”F--met信号通路的第一进门户,它仅存在于上皮细胞细胞膜,属于生 长因子酪氨酸激酶跨膜受体家族成员。IIGF/SF、e t信号通路异常激活是 肿瘤恶性生长、演进、浸润及转移的重要因素,并可能发挥关键性因果性 作用(critical causal role)。但HGF/SF-。1et信号通路的作用靶分子 及其与增殖、浸润、转移的联系分子机理尚不清楚。HGF书F、et信号通路 的一系列生物学效应是以启动相应基因功能为基础的,但有关HGF书F、et 信号通路转录诱导基因表达谱的研究尚未见报道。 为此,本研究以人大肠癌细胞为研究对象,利用基因芯片技术能同时 大规模地检测成千上万个基因的特点,探索HGF亿F1et信号转导通路转录 诱导基因表达谱,试图从基因水平探讨HGF书Fmet信号通路在大肠癌中的 作用机制。并应用先进的反义基因治疗技术,首次构建旷met侣 联合 反义真核表达载体,探索阻断HGF/SF、e土信号传导通路的抗浸润、抗转移 效应,摸索抗转移治疗的新途径。并以期从正反两方面报诱导和阻断)探 讨HGF书F、et信号传导通路在大肠癌转移中的作用及其分子机理。主要 研究内容如下: 1.检测HGP、。-met在人大肠癌中的表达状态,通过体外粘附性、移 动性及浸润力等细胞生物学实验初步确定HGF对人大肠癌细胞的 刺激效应,以探讨HGF沾F1et信号通路在大肠癌转移中的作用。 2.采用基因芯片技术,比较HGF刺激前后的基因表达谱改变,以探索 HGF书F--met信号通路相关诱导转录基因表达谱,从基因水平探讨 其作用机制。 3.构建阻断HGP/SF--met信号通路的。、et/S100A6联合反义基因真核 表达载体,探讨联合反义真核表达载体对人大肠癌细胞的体外生 物学效应及抗转移作用,探索抗信号转导的反义基因治疗新策略。 4.探讨我室发现的具有抗转移作用的中药有效成分3,4,5-三羟基 蔑-3-p-单o-葡萄糖昔(3,4,5,-trihydroxystibene-3-P 1。n。“0“gin。。sNe,*删G)对Hm丫即-me亡信号通路的作用及抗转 移作用机理。 二、材料和方洁 。oz。。。。。。h。 二.设立HGF梯度浓度处理组及空白对照组(D-Hanks液),对HGP刺激激 活HGF书F1et信号通路的体外生物学效应,包括生长曲线、粘附率、 移动性、浸润力、细胞周期、。-inn,MMP-2的蛋白表达进行系列分析, 采用国际通用的Trans。elf浸润小室模型法研究细胞移动性和浸润力, 应用PI染色流式细胞术(FCM)检测细胞周期改变,应用SABC免疫荧光 技术及FCM定性与定量相结合研究相关蛋白表达。采用D-actin内参 照半定量RT--PCR技术研究大肠癌细胞的。-met,HGF的表达状态。 2.采用含有4096条人类基因CDNA的HGEC-405芯片,从三次重复的HGF 刺激实验大肠癌细胞中提取RNA,逆转录合成CDNA,应用双荧光探针 标记法,Cy3-dUTP标记对照组细胞mRNA,用心-dUTP标记HGF刺激细 胞的 mRNA,通过竞争性芯片杂交,用 GenePix 4000B芯片扫描仪(Axon) 扫描芯片,GenePix Pro 3.0分析Cy3
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.34

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王国胜;灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞荷瘤裸鼠HGF/SF-met信号转导通路的影响[D];黑龙江中医药大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
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4 李学农,丁彦青,周军;3,4′,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖苷体外抗粘附、抗浸润作用[J];中国癌症杂志;2001年01期
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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4 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
6 朱启星;马泰;涂登云;沈彤;丁锐;;银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞NO合成的影响[J];癌变.畸变.突变;2006年06期
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8 刘家仁,庞永珣,张尤恩,范春,王贤珍,朱振岗;用细胞转化实验检测S江有机污染致癌危险性[J];癌变.畸变.突变;1999年04期
9 吕慧贞;张建朋;陈新;刘静;张元湖;;一种改进的鸭梨总RNA提取方法[J];山东农业科学;2007年05期
10 张秀华;王文锋;;微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨[J];山东农业科学;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵丹萍;陶彬;陈立功;李艳琴;宋勤叶;李潭清;杨芳;李红园;袁洪兴;;PCV2感染对猪瘟弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
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3 刘俊;赵荣祥;丛品;洪钱江;;哺乳动物内耳再生毛细胞前体细胞来源的研究[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C];2009年
4 冯婷;涂文伟;黄娟;李晋蓉;殷仲伟;范营营;李虹;;流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
5 李菲菲;白云伟;方静;付辉;毛建平;;龙脑眼部清洁液对大鼠角膜损伤治疗作用的初步研究[A];2012全国天然药物和中药毒理、药理学交流研讨会论文集[C];2012年
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7 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
8 王少康;孙桂菊;杨磊;李莉华;;维生素D_3对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响[A];营养与慢性病——中国营养学会第七届理事会青年工作委员会第一次学术交流会议论文集[C];2010年
9 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
10 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG2基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜淑贞;玉米赤霉烯酮对断奶仔猪的毒性初探及改性蒙脱石的脱毒效应研究[D];山东农业大学;2010年
2 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
3 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年
4 翁春华;血管生成素特异microRNAs的鉴定与功能分析[D];浙江大学;2010年
5 陈志芬;人白细胞介素15与18协同作用肿瘤浸润淋巴细胞对结肠癌细胞杀伤功能的研究[D];武汉大学;2010年
6 莫雪安;同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠模型的实验研究[D];广西医科大学;2011年
7 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
8 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
9 肖芃;腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养及其增殖与凋亡的相关研究[D];华中科技大学;2011年
10 孙叙敏;复方阿胶浆协同化疗的减毒增效作用及其机制实验研究[D];北京中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈玉红;生物活性预混料对断奶仔猪免疫功能影响的研究[D];华中农业大学;2010年
2 梁斌;一种能同时检测金黄色葡萄球菌A型和B型肠毒素单克隆抗体的制备及特性分析[D];华中农业大学;2010年
3 吴学宝;猪瘟病毒影响RANTES产生分子机制的研究[D];华中农业大学;2010年
4 黄嫣;新型特异性抗Met单克隆抗体用于大肠癌中Met表达检测重组人高尔基体蛋白GP73原核表达、纯化及鉴定[D];南京医科大学;2009年
5 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
6 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
7 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
8 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
9 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
10 李静;父源性HLA-A基因与子痫前期相关性研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈孝银,沈卓群;琼玉膏对化疗实验肺癌小鼠nm23及PCNA基因蛋白表达的影响[J];安徽中医学院学报;2000年02期
2 王心华,甄永苏;大黄素抑制人高转移巨细胞肺癌PG细胞的肿瘤转移相关性质[J];癌症;2001年08期
3 马靖,符乃阳,李玉梅,彭文烈,徐安龙;甘草提取物体外选择性诱导几种人肿瘤细胞凋亡[J];癌症;2001年08期
4 孙六合,王燕;抗癌膏穴贴对荷瘤小鼠脾NK细胞、IL-2活性的影响[J];北京中医;2002年02期
5 张曼颖,安继红,李昌辉;刺五加叶皂甙诱导肺癌细胞凋亡的研究[J];吉林大学学报(医学版);2002年01期
6 何金涛,周清华,袁淑兰,王艳萍,陈晓禾,秦建军;丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理[J];中国肺癌杂志;2002年02期
7 何金涛,周清华,袁淑兰,王艳萍,陈晓禾,秦建军;丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理[J];中国肺癌杂志;2002年04期
8 吴继萍;冯妮;李晓林;李斯文;;中医辨证论治结直肠癌术后的临床研究[J];光明中医;2011年09期
9 杨勤建,涂晋文;化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究[J];北京中医药大学学报;1999年05期
10 郭秋生;吕仙梅;;大肠癌中医辨证分型概况[J];临床合理用药杂志;2012年05期
【二级参考文献】
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2 朱梅刚,邱红明,杨学皆,卢凯,邓永健,张进华;应用人大肠癌肝转移裸鼠模型抗转移药物筛选研究[J];中国癌症杂志;1997年03期
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【相似文献】
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3 王娟;戴耀晖;贾丽华;洪筠;程斌;夏娟;;口腔黏膜白斑的基因表达谱分析[J];中华口腔医学研究杂志(电子版);2010年06期
4 杨平玲;江飞舟;徐敏丽;;β-连环蛋白与大肠癌关系的研究进展[J];实用医学杂志;2008年08期
5 宋洋;徐正磊;张茹;王立生;;IA型磷脂酰肌醇3-激酶和其下游分子蛋白激酶在大肠癌中的表达研究[J];当代医学;2011年21期
6 张显菖;廖洪竹;魏仁智;;大肠癌325例临床分析[J];四川医学;1980年02期
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9 吴金民;蔡心涵;张行;张苏展;孙常省;江摩海;郑树;;金黄色葡萄球茵NO:1800株吸收大肠癌患者血清中IgG值的初步研究[J];肿瘤学杂志;1986年01期
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7 沈海燕;王波;;胆结石、胆囊切除术与大肠癌关系的探讨[A];浙江省中西医结合学会消化专业第八次学术年会暨省中西医结合消化系疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年
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9 王凯;;抗VEGF McAb-SPIO在大肠癌肝转移小鼠模型MRI分子成像的初步研究[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年
10 池桂林;许岸高;张晓慧;;广东惠州大肠癌疾病负担研究[A];第九次全国消化系统疾病学术会议专题报告论文集[C];2009年
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8 本报记者 郭萍;大肠癌悄悄逼近国人[N];中国老年报;2001年
9 记者 施嘉奇;抽点血,找出大肠癌早期线索[N];文汇报;2010年
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1 李学农;大肠癌HGF/SF-met信号通路转录诱导基因表达谱及阻断作用研究[D];第一军医大学;2002年
2 黄志刚;应用肿瘤基因解剖工程数据库及RNA干扰技术检测大肠癌基因表达谱[D];复旦大学;2005年
3 唐贵林;激光诱导荧光检测大肠癌变组织的理论与方法研究[D];国防科学技术大学;2001年
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6 郝立强;定量检测大肠癌癌胚抗原信使核糖核酸的研究[D];第二军医大学;2002年
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8 杨德君;应用RNAi技术对大肠癌ECGF1基因生物功能的研究[D];吉林大学;2006年
9 埃赫维(KOUMAKPAYI.I.Hervé);热疗及化疗前后大肠癌细胞粘附分子表达和细胞凋亡的研究[D];天津医科大学;2003年
10 刘宇虎;人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库的构建及大肠癌相关抗原的SEREX筛选[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
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1 晏冬;大肠癌根治术后门静脉置管5-FU化疗的临床研究[D];新疆医科大学;2003年
2 杨振;β-catenin、PKCβⅡ与大肠癌发生发展关系的研究[D];郑州大学;2003年
3 马思平;E-cadherin和β-catenin在大肠癌组织中的表达及其临床意义[D];中国医科大学;2003年
4 张玲;大肠癌内微血管密度、LN、p53表达及临床意义研究[D];中国医科大学;2002年
5 吴斌;核因子-κB在大肠癌组织中的表达及意义[D];重庆医科大学;2003年
6 李铁军;大肠癌VEGF、P15、nm23表达与血管生成关系[D];重庆医科大学;2002年
7 朱杰昌;粘着斑激酶与整合素α_v、β_3亚基在大肠癌中的表达[D];天津医科大学;2004年
8 卢佩琳;人胃癌、大肠癌中CD44v6表达的研究[D];浙江大学;2002年
9 蔡香然;原发性大肠癌的MRI研究[D];暨南大学;2003年
10 刘勇帆;VEGF、MDR1基因在大肠癌中的表达及其与浸润和转移的关系[D];江西医学院;2004年
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