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《第一军医大学》 2002年
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逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究

金丹  
【摘要】: 目的 (1)构建人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)逆转录病毒载体并制备重组病毒液,检测经逆转录病毒介导hBMP基因转染的兔骨髓基质干细胞(BMSc)中外源hBMP-7 mRNA和蛋白的表达。(2)探讨hBMP-7基因转染对BMSc增殖和向成骨细胞分化的调节作用。(3)对重组病毒液和经基因转染的BMSc与左旋聚丙交酯(Poly-L-lactide,PLLA)生物材料复合后修复兔桡骨1.5cm缺损的能力进行评价,从而探讨基因转移技术在骨组织工程中应用的可行性,并建立利用经hBMP基因转染的BMSc构建组织工程化骨组织的方法。 方法 (1)采用粘-粘端连接法构建hBMP-7逆转录病毒载体(PLNCX_2-hBMP_7),利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,经G418筛选后,制备含hBMP-7目的基因的重组逆转录病毒液,病毒液感染兔骨髓基质干细胞,使用原位杂交、RT-PCR以及免疫组织化学的方法检测hBMP-7在BMSc中的表达。(2)采用MTT法、流式细胞仪对比分析经转染与未经转染BMSc的增殖情况,NPP法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,~3H脯氨酸掺入方法检测胶原合成情况,放射免疫方法测定细胞骨钙素(BGP)、层粘连蛋白合成情况。(3)制备新西兰大白兔桡骨1.5cm缺损实验模型,病毒液修复实验分为4组:PLNCX_2-BMP_7+PLLA修复组:PLNCX_2+PLLA修复组;单纯PLLA生物材料修复组;空白组,未加任何填充材料,于术后采用大体观察、X线观察、组织学观察方法对骨缺损修复情况进行对比检测。(4)将制备的病毒液转染BMSc,利用经转染的BMSc修复兔桡骨1.5cm骨缺损。修复实验也分为4组:经转染细胞+PLLA修复组;未经转染细胞+PLLA修复组;单纯PLLA生物材料修复组;空白组,未加任何填充材料。采用大体观察、X线观察、组织学观察、免疫组织化学等方法对骨缺损修复情况进行对比检测。 结果 (1)构建的hBMP-7逆转录病毒载体中外源基因方向、序列均正确、无碱基缺失及突变现象。原位杂交、RT-PCR以及免疫组织化学 检测显示经I,TreunXZ-BMP病毒液感染的BMS。中有较强的阳性结果出 现,而PLNCX。空载体转染的BMS。以及未转染的BMSC中极少见阳性表达 结果。G)经 PLNCXZoMP病毒介导的基因转染的兔 BMSC增殖能力无 明显改变,同时其合成胶原、ALP、BGP、层粘连蛋白的能力能够得到显 著提高,与PLNCXZ病毒液转染、未经转染的BMS。相比有显著性差异。 D)PLNCXZEMP重组病毒液与 PLLA生物材料复合修复组可见在缺 损处有骨性连接形成,组织学观察见有大量新生骨组织形成,而PLNCX。 病毒液+PLLA修复组、单纯材料修复组和未修复组均未见骨性连接形 成,仅在部分骨缺损两断段形成少量骨组织。(4)大体观察、X线、组 织学检测分析结果初步证实经转染的BMSc修复骨缺损的成骨速度和成 骨量均优于未转染BMSc修复组,单纯PLLA生物材料修复组和空白组 中均未见骨缺损得到修复。 结 论(1)采用逆转录病毒介导的方法可以将 hBMP.7转染至 BMSC中,并有外源hBMP7的表达。*)PLNCX。HMP7基因转染能够 促进体外培养的BMS。向成骨细胞转化,并对其增殖能力没有显著影响。 3)采用 PLNCXZEMP重组病毒液与生物材料复合的方法能够修复 兔侥骨 1.scm缺损。(4)PLNCX。-BMP基因转染能够提高 BMSc形成 组织工程化骨组织和修复骨缺损的能力。(5)采用基因转染的方法能够 提高BMS。体内外成骨能力,可用于以BMSC为种子细胞的组织工程化 骨组织的构建和进一步应用。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R346

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王勤涛,吴织芬,董广英,史俊南;流式细胞技术分析骨形成蛋白对人牙周膜细胞增殖和分化的影响[J];华西口腔医学杂志;1999年03期
2 杨志明,余希杰,黄富国,解慧琪;外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响[J];华西医科大学学报;2001年01期
3 朱文菁,金慰芳,张丽丽,张罗修,王洪复;MTT法分析培养成骨细胞的存活和增殖能力[J];上海医科大学学报;1995年04期
4 陈富林,毛天球,羊书勇,丁桂聪,顾晓明;骨髓基质干细胞接种于珊瑚修复兔颅骨缺损的实验研究[J];实用口腔医学杂志;2001年01期
5 金丹,裴国献,王前;骨髓基质细胞与钙磷陶瓷复合构建组织工程化骨组织[J];中华创伤杂志;2001年03期
6 杨志明,李彦林,解慧琪,秦廷武,黄富国;生物衍生骨复合成骨细胞体内异位成骨研究[J];中华创伤杂志;2001年08期
7 司晓辉,杨连甲,金岩;转染人骨形成蛋白2基因对NIH3T3细胞生物学行为的影响[J];中华口腔医学杂志;1999年02期
8 栗向东,胡蕴玉;pcDNA_3-hBMP_2转染对成纤维细胞生物学性状的影响[J];中华外科杂志;2001年04期
9 刘侠,乐以伦;碱性磷酸酶与钙化[J];中国生物医学工程学报;1997年01期
10 杨健,贝建中,王身国;改进高分子材料细胞亲和性的研究——聚(D,L-乳酸)的等离子体处理改性[J];中国修复重建外科杂志;2001年05期
【共引文献】
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1 乐宇民,杜建;骨关节炎Ⅰ号预防氢化可的松所致兔软骨细胞损伤作用[J];安徽中医学院学报;2005年01期
2 杨耀武;毛天球;王磊;侯锐;高瞻;羊书勇;陈富林;雷德林;栗向东;;鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷用于组织工程支架修复颅骨缺损实验研究[J];北京口腔医学;2007年02期
3 任杰,杨爽;生物医用材料——聚乳酸的表面改性研究进展[J];北京生物医学工程;2004年04期
4 卢建华;钱煦岱;华江;王维佳;朱小飞;;红曲对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的影响[J];中华中医药杂志;2008年06期
5 熊焰;骨粘连蛋白、碱性磷酸酶在骨肉瘤瘤骨形成中的作用及意义[J];重庆医学;2001年04期
6 胡运生;马保安;张勇;李文海;范清宇;;绿色荧光蛋白报告基因转染示踪体内骨髓间充质干细胞的分化[J];中国医师杂志;2006年10期
7 顾祖超,李起鸿,赵玉峰,周红星;兔骨髓基质细胞在诱导条件下的成骨特性[J];第三军医大学学报;2002年05期
8 秦辉,许建中,王序全,何清义,罗飞,朱灏,尹芝华;双相接种技术构建组织工程骨的异位成骨观察[J];第三军医大学学报;2005年16期
9 周燕;张纲;卓贤露;裘松波;谭颖徽;;降钙素基因相关肽对兔成骨细胞增殖和TGF-β_1表达的影响[J];第三军医大学学报;2012年05期
10 于利峰;孔令擘;朱庆生;;骨髓间充质干细胞建立的成骨细胞培养模型的研究[J];第四军医大学学报;2009年23期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 谢芬艳;胡文娟;翁静;陈强;;等离子体聚合胺基功能薄膜及其细胞吸附性研究[A];第十三届全国等离子体科学技术会议论文集[C];2007年
2 胡文娟;谢芬艳;陈强;蔡惠平;;PECVD聚合胺基功能薄膜的研究[A];第七届全国表面工程学术会议暨第二届表面工程青年学术论坛论文集(二)[C];2008年
3 耿芳;谭丽丽;龚明明;张炳春;杨柯;;金属基骨植入材料表面生物活性的研究进展[A];第六届中国功能材料及其应用学术会议论文集(5)[C];2007年
4 戴璇颖;徐世清;陈息林;裔洪根;柳学广;王玉军;;环境激素阿特拉津对昆虫培养细胞的影响[A];中国蚕学会第四届青年学术研讨会会议论文集[C];2004年
5 任高宏;裴国献;覃昱;汪群力;;成人骨髓源成骨细胞体内异位成骨的实验研究[A];中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会论文集[C];2004年
6 张建峰;张皎;姚静;侯加法;;鸡类胰岛素生长因子Ⅰ的克隆、表达及其表达产物的生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
7 胡骁飞;林东康;李春群;魏凤仙;常娟;;低磷日粮添加植酸酶对生长猪生产性能和血液指标的影响[A];酶制剂在饲料工业中的应用[C];2005年
8 田玉慧;杨献军;李万里;杨瑞;岳汉军;;大豆异黄酮和钙对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的作用[A];达能营养中心青年科学工作者论坛优秀论文集2003年第4期[C];2003年
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1 马雷;bFGF基因修饰的MSCs细胞复合β-磷酸三钙修复骨缺损实验研究[D];新疆医科大学;2010年
2 范宏元;循膀胱经背俞穴弹拨法合针灸治疗寒湿阻络型大骨节病的临床研究[D];成都中医药大学;2010年
3 黄旋平;hBMP-2基因修饰自体BMSCs移植促进兔下颌骨牵张成骨新骨形成的实验研究[D];广西医科大学;2011年
4 陈美玲;Sonic hedgehog基因对种植体周围骨缺损修复的影响[D];华中科技大学;2011年
5 师彬;仙鹿活骨丸的研制及其治疗股骨头坏死的机制研究[D];天津大学;2009年
6 陈美玲;Sonic hedgehog基因对对植体周围骨缺损修复的影响[D];华中科技大学;2011年
7 侯乐乐;鸡骨保护素真核质粒pcDNA3.1(+)-chOPG的构建及其在蛋鸡体内、外表达及功能的研究[D];南京农业大学;2011年
8 陈秀霞;雌、雄激素对蛋鸡髓质骨形成和成骨细胞作用机理的研究[D];南京农业大学;2009年
9 王大为;促进成骨细胞骨形成的中药及其活性成分的研究[D];沈阳药科大学;2001年
10 郑高利;葛根异黄酮对骨质疏松症的防治作用及其机理研究[D];浙江大学;2002年
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1 孙晓琳;富血小板纤维蛋白对骨髓间充质干细胞和成骨细胞影响的实验研究[D];吉林大学;2011年
2 林小敏;神经组织工程支架材料的制备及体外性能检测[D];大连理工大学;2011年
3 王婧;重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽原核表达及单克隆抗体制备[D];北京协和医学院;2011年
4 陈国武;纳米网孔n-HA/PA66/成骨细胞/VEGF组织工程骨的构建[D];重庆医科大学;2011年
5 黄勇;医用钛表面HA/ZrO_2过渡涂层的制备及其生物相容性评价[D];电子科技大学;2011年
6 高晓燕;金葡液在兔下颌骨牵张成骨中作用的研究[D];辽宁医学院;2011年
7 周信;针药结合诱导骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究[D];南京中医药大学;2011年
8 吕楠楠;壳聚糖的改性研究[D];长春理工大学;2011年
9 杨维;氨及其与藻毒素对鲫鱼幼鱼的生态毒理效应[D];南京师范大学;2011年
10 廖保强;力生长因子E肽促进骨愈合及含E肽生物活性材料的研究[D];重庆大学;2011年
【二级参考文献】
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1 杨志明,余希杰,屈艺,解慧琪;Ⅰ型胶原-整合素α_2β_1系统对成骨细胞生物学特性的调控[J];华西医科大学学报;2000年03期
2 陈富林,毛天球,杨维东,王常勇,顾晓明,朱萧玲;培养成骨细胞接种于天然珊瑚中再造骨组织的研究[J];实用口腔医学杂志;1999年05期
3 毛天球;组织工程的研究概况[J];实用口腔医学杂志;2000年01期
4 孙磊,胡蕴玉,王玉清,陆裕朴,宁志杰,吕荣;不同处理的骨移植物的骨诱导活性比较研究[J];中国矫形外科杂志;1995年04期
5 余希杰,杨志明,屈艺,解慧琪;Ⅰ型胶原及其受体系统在成骨细胞内的表达[J];中国修复重建外科杂志;2000年04期
6 傅荣,杨志明;骨膜成骨细胞培养与生物活性陶瓷复合的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;1996年04期
7 李彦林,曾才铭,王宏邦,李世和,赵晓霞,韩睿;陶瓷样异种骨的制备及复合骨髓移植成骨的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;1998年02期
8 李彦林,杨志明;陶瓷样异种骨复合骨髓异位成骨的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;1999年01期
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1 盛璞义,廖威明,李晓艳,李佛保,何智勇,黄纲,谭美珍;Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测[J];中华骨科杂志;2003年03期
2 刘延青!100083,娄思权!100083;骨髓基质中的骨源性干细胞[J];中华骨科杂志;2000年02期
3 高冬;陈文元;吴立娅;宋军;;衰老引发骨髓干细胞演变的规律及中药的干预作用[J];中医杂志;2009年01期
4 吴一民,陈建庭,孙炜;兔骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性[J];内蒙古医学院学报;2005年01期
5 陆东风,陈平安;骨髓基质干细胞定向分化成心肌样细胞的基础研究[J];血栓与止血学;2004年03期
6 林巍巍,陈罡,袁颖,王晓冬;大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定的初步研究[J];交通医学;2003年05期
7 李慧丽,王彬尧;骨髓基质干细胞移植治疗心肌损伤[J];高血压杂志;2003年04期
8 夏长所,叶发刚,洪光祥,廖建中,李怀忠,李红,窦榕榕;磷酸钙人工骨结合骨髓基质干细胞移植修复骨缺损的实验研究[J];中华手外科杂志;2004年03期
9 何亚峰,邓廉夫;骨髓基质干细胞的研究进展[J];国外医学.骨科学分册;2004年02期
10 李文辉,郑湘予,皮国富,王义生;同种异体骨髓基质细胞修复大鼠股骨缺损[J];实用诊断与治疗杂志;2005年06期
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1 戚超;杨志明;黄富国;秦廷武;罗静聪;李秀群;;骨髓基质干细胞与生物衍生骨构建组织工程骨修复山羊胫骨缺损的研究[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
2 毛峰;;脂肪干细胞向神经元的诱导分化[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年
3 王尊彦;;生长因子——划时代食用干细胞产品[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年
4 吴齐全;周君梅;张胜利;马晓荣;高同斌;谢华;陈方;;人羊水来源干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
5 陈志胜;陈胜锋;王丙云;刘林;;小鼠孤雌胚胎干细胞建系方法与效率[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 刘祖梅;韩毅;杜心灵;胡燕;金满文;;成年小鼠心脏干细胞的分离、培养鉴定和离子通道特性[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
7 余细勇;;干细胞向心肌细胞分化的表观调控研究[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
8 王国平;段亚琦;;干细胞与心肌梗死后的修复——机遇和挑战[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
9 郭坤元;佘妙荣;牛新清;胡亮杉;贺艳杰;曲佳;邓兰;涂三芳;;白血病干细胞的同种异体免疫抵抗和调节[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
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1 记者 陈枫梅志清 通讯员 刘泽炀 王薇;用“基因导弹”剿灭“癌干细胞”[N];南方日报;2007年
2 本报记者 吴洁;思考干细胞——研究、临床应用与产业化[N];科技日报;2001年
3 本报记者 聂翠蓉;抓住致癌的真正元凶[N];科技日报;2006年
4 记者 毛黎;美找到获取干细胞的又一新来源[N];科技日报;2006年
5 本报记者 天明;Geron公司永失所“爱”[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 北京和讯 张明星;干细胞——最大的生命科学概念[N];中国有色金属报;2001年
7 周向东;可以让你有一个备用的脏器[N];中国医药报;2001年
8 记者王俊鸣;科学家说用干细胞可修补脑部损伤[N];科技日报;2002年
9 杨昆;干细胞启动4000亿美元市场[N];医药经济报;2002年
10 章静波;干细胞——生命科学的一个主攻热点[N];光明日报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金丹;逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究[D];第一军医大学;2002年
2 李军;骨形态发生蛋白-2转染骨髓基质细胞的生物学特性和其骨诱导修复作用[D];第四军医大学;2004年
3 孙兵;表达GDNF的骨髓基质干细胞治疗帕金森病的实验研究[D];苏州大学;2004年
4 王建忠;HuVEGF_(121)基因修饰复合材料修复兔桡骨火器性骨缺损的实验研究[D];第三军医大学;2004年
5 陈金武;骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究[D];第四军医大学;2004年
6 孙新君;RhBMP-2/ACBM:一种有潜力的组织工程骨支架材料[D];第三军医大学;2004年
7 许卫兵;兔骨髓基质干细胞体外培养复合β-磷酸三钙构建组织工程化骨进行胸椎后路融合的实验研究[D];第二军医大学;2004年
8 郝敬东;ILizarov技术的实验与临床研究及骨髓基质干细胞增殖及转化的条件[D];苏州大学;2002年
9 龙华;腺病毒介导促软骨生长因子基因转染兔自体骨髓基质干细胞修复关节软骨缺损的实验研究[D];第四军医大学;2004年
10 董世武;Cbfa1基因修饰间充质干细胞治疗骨缺损的实验研究[D];第三军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑志宏;用分子组织工程学方法研究转化生长因子β_1对骨髓基质干细胞生物活性的影响[D];第四军医大学;2002年
2 范海涛;兔骨髓间充质干细胞的生物学特性及用于大段骨缺损修复的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
3 田竞;转基因骨髓基质干细胞复合冻干骨组织工程骨研究[D];第四军医大学;2004年
4 郑磊;新型骨基质材料复合骨髓基质干细胞体内外成骨能力的组织工程研究[D];第一军医大学;2000年
5 商红国;组织工程骨修复颌骨缺损的实验研究[D];青岛大学;2004年
6 王爽;大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及分化潜能鉴定的实验研究[D];中国医科大学;2004年
7 周和平;真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在MSC中的表达[D];第四军医大学;2004年
8 杨进;屏障膜联合自体骨髓基质干细胞及富血小板血浆修复牙槽骨缺损的实验研究[D];福建医科大学;2004年
9 常红星;自体骨髓基质细胞体外培养促分化及经皮注射修复兔骨缺损的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
10 李爱国;兔骨髓基质干细胞诱导分化修复膝关节软骨缺损[D];暨南大学;2004年
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