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《中国人民解放军第一军医大学》 2003年
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HLA-A~*0201-肽复合物的初步构建与应用

周最明  
【摘要】: 为建立能直接检测单一表位特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的新方法—人类白细胞抗原(human histocompatibility leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类分子-肽四聚复合物(tetrameric complex),采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别从细胞株Raji和CIR/A0201克隆了HLA-A~*0201分子的轻链(β2微球蛋白,β2m)与重链基因;通过PCR法将一段由15个氨基酸组成的可生物素化序列加在重链的第275位氨基酸的羧基末端,构建了重链-BirA酶底物肽(substrate peptide for BirA-dependent biotinylation,BSP)重组基因,以增强HLA-A*0201-肽复合物与T细胞受体的亲和力,并便于生物素-亲和素进行标记。β2m与重链-BSP基因分别通过酶切位点Nde I/sap I和XbaI/Sap I与表达质粒pTYB1进行基因重组并测序证实,在IPTG诱导下,β2m-标签蛋白、重链-BSP-标签蛋白融合基因在大肠杆菌ER2566中,以包涵体形式获得高效、稳定表达。经DTT诱导切割下标签蛋白后得到纯化的β2m与重链-BSP多肽,它们不带有除本身结构以外的氨基酸残基,在体外复合实验中能够、且只能够与相应表位(如HBcAg18-27)形成稳定复合物。 同时结合T细胞表位的计算机预测分析,利用纯化的β2m与重链-BSP多肽只能够与相应表位形成稳定复合物的特点,初步证明乙型肝炎病毒(HBV)C区热点变异S87G和/或I97L对HLA-A*0201限制性CTL表位的形成没有影响。
【学位授予单位】:中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R392.1

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【参考文献】
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【共引文献】
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