三苯氧胺联合阿霉素、顺铂及紫杉醇抑制MCF-7细胞株增殖的实验研究

【摘要】： 背景 化疗和内分泌治疗在乳腺癌内科治疗中有重要的价值。尽管对三苯氧胺与细胞毒性药物联合应用有否定的研究结论，NSABP B-16试验和NSABP B-20试验分别肯定了AC方案和CMF方案与三苯氧胺联用的优势。紫杉醇类与铂类化疗药物在乳腺癌二线化疗中的地位已获肯定。辅助三苯氧胺与含紫杉醇类或铂类药物联用的协同作用及长期应用三苯氧胺对细胞毒性药物敏感性的影响未能引起更多的关注，需要进一步研究。 目的 研究在三苯氧胺治疗与阿霉素、紫杉醇或顺铂联合应用时，长期应用三苯氧胺对MCF-7细胞株药物敏感性的影响及其对策。 方法 1．MTT法确定紫杉醇及顺铂的IC50、IC30及IC10值。MTT法测定不同方法处理后MCF-7细胞的倍增时间。 2．流式细胞仪检测IC30及IC10两种不同剂量紫杉醇及顺铂单用、联用及与2×10~(-8)MOL／L三苯氧胺联用，三周期处理对MCF-7细胞周期的影响，C-myc、caspase-3、MT、GST-pi、p170、Bcl-2、Bax、E-cadherin、VEGF表达的变化；Annexin V／PI双标法检测细胞凋亡。 3 流式细胞术检测与1×10~(-7)MOL／LTAM共同孵育8周、16周对细MCF-7细胞周期的影响及MCF-7细胞ER／PR／EGFR／C-erbB-2表达的变化；West blot法检测EGFR／C-erbB-2蛋白表达的变化； RT-PCR检测EGF侧C一ethB一2 mRNA的变化。 4，M竹比色法检测与1 xlo一7MoUL工AM共同孵育一6周后MeF一7 对顺铂、紫杉醇敏感性的变化;三磷酸腺普发光法检测与1人M 共同孵育16周后MCF一7对阿霉素敏感性变化;流式细胞术检测 P170、Bd一2、Bax蛋白表达的变化:流式细胞术检测细胞内阿 霉素的荧光强度，及Ghvec对荧光强度的影响。 结果 l，不同剂量顺铂(D一10、D一30)、紫杉醇(T-10、T-30)单独使 用、联用(L2一10、LZ一30)及二者与Zx 10一SMoL几三苯氧胺联用 (L3一10、L3一30)四种处理方法均导致MCF一7细胞GZ/M期阻滞; 四种方法处理后的MCF一7细胞S期细胞比例降低、G夕G;期细胞 比例升高，细胞倍增时间明显延长(p0 .05)。2x10一SMo眺三 苯氧胺与IC10剂量强度的紫杉醇+顺铂联用(L3一10)与 IC10 剂量的紫杉醇+顺铂(L2一10)，三周期处理后MCF一7细胞S期比 例分别为5.8%、7%，细胞倍增时间分别为59士6小时及55士8 小时;Zxlo.SMOL几三苯氧胺与IC30剂量强度的紫杉醇十顺铂 联用(L3一30)与IC30剂量强度的紫杉醇+顺铂(L2一30)，三周期 处理后MCF一7细胞S期比例分别为5.3%、4.6%，细胞倍增时 间分别为82士12小时及80士16小时。 2，IC10及IC30剂量强度LZ、L3处理三周期后细胞增殖、凋亡、 耐药、转移、血管生成相关蛋白表达变化如下(表1，2)。 3，IC10剂量LZ一10、L3一10处理后第三周期凋亡+死亡细胞比例 分别为22%、23%，而IC30剂量LZ一30、L3一30处理相应则分别 为40%、37%，较未处理组凋亡+死亡细胞比例2%明显上升 (p0 .05)，LZ一10、L3一10比较以及LZ一30、L3一30间比较均无统 计学差异(P0.05)。 4，lxlo一7MOL几JAM导致MCF一7细胞G了G，期细胞比例升高、S 期细胞比例降低;与1 x 10一7MOL/LEAM共同孵育16周后，McF一7 细胞ER、PR表达降低，EGFR、C一erbB一2表达升高:West blot 法检测EGF侧C一erbB一2蛋白表达升高;RT-PCR检测 EGF侧C一ethB一2 mRNA表达增强。流式检测Bcl一2表达稍降低， Bax表达明显降低，Bcl一2忍ax比值明显升高，p170表达稍升高。 5，与1 x 10一7MOL几JAM共同孵育16周后，MTT法检测MCF一7 细胞对顺铂、紫杉醇敏感性较未处理时均降低，三磷酸腺昔发光 法检测对阿霉素敏感性下降，流式检测细胞内阿霉素荣光强度降 低。而Glivec可部分恢复TAM处理后MCF一7对阿霉素的敏感 性，并可使下降的细胞内阿霉素的荧光强度有所回升。 结论 1，2 x 10一SMoL几三苯氧胺与Iclo剂量紫杉醇+顺铂联用对抑制 MCF一7的增殖有协同作用，而与IC30剂量的紫杉醇十顺铂联用 无明显的协同作用。 2，处理后的MCF一7细胞S期细胞比例及细胞倍增时间可作为对 三苯氧胺联合紫杉醇十顺铂化疗的效果评估的指标。单一指标可 作为独立疗效评价的指标。 3，处理后MCF一7细胞easPase一3、GST-Pi、P170、Bel一2、Bax、 E一cadherin、VEGF变化亦可作为疗效评价的指标，但单一指标 能否作为独立疗效评价的指标需进一步研究。 4，与1 x 10一7MOL/I JAM共同孵育16周后，MCF一7细胞对阿霉素、 J顶铂、紫杉醇敏感性均降低，Glivec可部分恢复TAM处理后 MCF一7对阿霉素的敏感性。 MT GST-Pi BCL一2 baxC一MYC 对照组10土2.0 10土1.4 7.58士2.0 14.2士2.2 17.2士2.2 LZ一10 12.4士1.0 16.2士1.5 12.3士1.5 10.9士2.0 15.3士2.0 L3一10 13.6士2.0 13.7士2.0 12.3士2.6 8.0士1.2 13.1士1.1 LZ一30 8.6士1.4 18.0士3.1 21.3士2.7 7.0士1.8 13.4士2.2 L3一30 8.6士1.0 19.7士2.2 20.5士3.5 7.2士2.3 10.6士2.7 表1 easPase一3P一1 70E一ead VEGF 对照组1.63士1.0 5.09士1.1 39.4士3.0 26.2士7.3 LZ

【学位授予单位】：中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R737.9