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《中国人民解放军第一军医大学》 2003年
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Tju103和CTLA4Ig联合诱导MHC非匹配同种异基因小鼠骨髓移植免疫耐受

陈永乐  
【摘要】: MHC不相合骨髓移植移植失败和相关并发症明显加重。其中,移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是主要并发症和致死原因。应用非特异性免疫抑制剂或者剔除移植物中T细胞均能明显降低GVHD的发生,但是出现移植失败率、原发病复发率和感染率增高。因此,有必要保留移植物中的T细胞,对其进行调节,使其对受者产生特异性免疫耐受。通过阻断共刺激信号的传导,诱导T细胞无能是肯定、有效的诱导特异性耐受方法。但因为共刺激信途径众多,难以完全阻断,效果有限,因此需要进行多途径的调节。最近合成的Tju103是特异结合CD4分子上与MHC-Ⅱ结合的位点的小分子有机化合物,调节抗原信号,能有效降低同种异基因皮肤移植排斥和同种异基因骨髓移植GVHD发生。CTLA4-Ig是最有效的共刺激信号阻断剂之一。联用Tju103和CTLA4-Ig,同时调节抗原和共刺激双信号传导,可能对T淋巴细胞免疫抑制更深入,但能否保持CTLA4-Ig的特异性免疫耐受的诱导作用,不清楚。本实验联合应用Tju103和CTLA4-Ig进行T细胞活化的双信号调节,观察调节对供者T细胞的表型、功能以及异基因小鼠骨髓移植后GVHD、GVL(graft versus leukemia)效应和抗感染的影响,旨在探索一条能降低GVHD而保留GVL效应和抗感染能力的异基因骨髓移植特异性免疫耐受途径。 实验方法 (1)供鼠T淋巴细胞无能的诱导及表型和功能鉴定:分离供者(C57BL/6~(H-2b)鼠)T淋巴细胞,在受者抗原(经MitC处理的BALB/c~(H-2d)或CB6F1~(H-2bd)鼠巨噬细胞)存在下和CTLA4-Ig及Tju103一起孵育,进行T细胞活化双信号调节。FCM检测经调节 的供者T细胞的表型的改变,甲基琼脂造血祖细胞集落培养观察 对造血的作用,MLR和MTT法鉴定对增殖反应性和细胞毒效应 的影响。 (2)EL%11红白血病小鼠模型建立:从尾静脉给受鼠(BALB/c 鼠和CB6FI鼠)接种可移植EL%H红白血病细胞,建立小鼠红 白血病模型并进行鉴定。 (3)异基因小鼠骨髓移植GVHD模型建立:以C57BL/6鼠为供 者,BALB/。和cB6FI鼠经“0C0全身照射后作为受者,进行 C57BLz6H一Zb~BALBzeH一Zd和C57BL/6H一Zb~CB6FIH一Zbd小鼠骨·髓移 植,建立完全异基因和半相合小鼠骨髓移植GVHD模型并进行鉴 定。 (4)异基因小鼠骨髓移植实验:以C57BU6鼠为供者,以BALB/c 或CB6FI鼠为受者,在上述模型基础上进行小鼠完全异基因和半 相合骨髓移植实验,观察经cTLA4一Ig和Tju103联合调节的供鼠T 细胞对移植后骨髓植入、GVHD、GVL效应、抗感染和皮肤移植 耐受的影响 实验结果 (1)T细胞增殖反应和杀伤效应:在耐受诱导源存在下,CTLA4一19 和cTLA4一I留Tju103显著抑制C57BL/6鼠T细胞对己接触抗原 (BALB/c或CB6FI鼠)的增殖反应(抑制率:完全异基因移植 为77.67士0.58%、87.67士1.16%;半相合移植为80.76士2.68%、 89.54士3.15%),但保持对未接触抗原和白血病的反应性(抑制率: 完全异基因移植分别为4.33士0.58%、4.67士1.16%,4.27士0.巧%、 4.67士0.58%;半相合移植为4.41士0.95%、5.42士0.94%,6.10士 0.88%、6.73士0.91%),显著抑制对己接触抗原的杀伤活性(抑制 率:完全异基因移植分别为71.n士1.07%、76.85士2.69%;半相合 移植为87.80士1.14%、95.12士2.56%),而保留对未接触抗原和白 血病细胞的杀伤活性(抑制率:完全异基因移植分别为0.69士 0.69%、1.27士0.27%,1.24士1.38%、2.07士1.32%;半相合移植为 3 .31士0.49%、3.04士0.52%,2.20士0.96%、3.35士1.04%);Tjul03 则表现为非特异性的抑制(对接触抗原、未接触抗原和白血病的 增殖反应和杀伤抑制:完全异基因移植分别为80.33士1.16%、80.33 士0 .58%、80.67士0.58%,72.61士0.63%、74.25士0.74%、71.09土 1.66%:半相合移植为81.36士2.84%、79.52士1.67%、79.59士1.75%, 87.68士0.92%、83.58士1.57%、88.72士1.84%)。提示有耐受诱导 源时CTLA4Ig和CTLAI岁Tjul03诱导特异性免疫耐受(p0.05), 两者组合效果最好(p0.05);而Tjul03则诱导非特异性免疫耐受 (P0.05)。没有耐受诱导源,CTLA4一Ig、两者联合和Tju103一 样诱导非特异性免疫抑制(P0.05)。 (2)细胞集落培养:无处理、CTLA4一lg、芍ul03和两者联合处理 的供者T细胞,对CFU一GM形成的影响没有明显差别(p0.05), CTLA4一Ig、Tjul03和两者联合明显提高BFu一E形成(完全异基因 移植分别提高51.12士8.45%、35‘71士11,3%和59.18士14.57%,半 相合移植分别提高79.27士10.%%、74.39士13.15%和93.90士 18.320/0)印0 .05),但两两间无显著差别印0.05)。 (3)供鼠T细胞表面标志:CTLA4一Ig、Tjul02及两者联合均明显 抑制供者T细胞CD69表达(抑制率:完全异基因移植分别为78.06 士5.37%、79.58士16.62%和89.39士21.18%,半相合移植分别为 78.17士9.55%、77.82士14.40%和89.26士13.07%)(P0.05),以两 者组合最显著(P0.05)。CTLA4一Ig和两者联合提高供鼠T细胞 高表达儿唯y49C)(完全异基因移植分别增加表达4.07士0.57倍和 5.35士0.68倍,半相合分别增加5.37士0.87倍和6.04士1 .03倍) (P0.05)
【学位授予单位】:中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R392.1

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