收藏本站
《中国人民解放军第一军医大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人胰岛细胞分离纯化的实验研究

赵德明  
【摘要】: 研究背景:胰岛细胞移植是一种非常有前景的治愈糖尿病的手段。虽然既往已经在实验动物模型中成功的根治了糖尿病,但是在临床应用上仍有很多问题需要解决。近年来随着Edmonton方案取得了鼓舞人心的成功,为用胰岛细胞移植的方法治愈1型糖尿病开拓了广泛的应用前景。但是仍有很多问题有待进一步解决,如移植的胰岛细胞需要有足够高的活性才能逆转高血糖状态、移植的胰岛细胞需要足够多的数量、排斥反应、受者再次出现自身免疫反应、简便经济的新方法等等。鉴于在免疫抑制剂、器官获取技术、胰岛细胞分离技术和胶原酶方面取得的进展,我们有理由相信胰岛细胞移植将成为治疗1型糖尿病的最佳选择之一。本实验旨在探讨用常见试剂进行人胰岛细胞的分离与纯化,并利用分离纯化所得到的胰岛细胞进一步研究新型免疫抑制剂对胰岛细胞功能的影响。 目的:1、用两步消化法和试管纯化法初步建立用胶原酶P分离、纯化人胰岛细胞的方法;2、了解Pefabloc和PNGS对胰岛细胞分离纯化的最终产量和胰岛细胞功能的影响;3、用MTT法体外探讨三种不同免疫抑制剂对所分离纯化的胰岛细胞活力的影响。 方法:1、胰岛细胞的分离纯化:按本实验室建立的方法,用胶原酶P两步法消化分离胰腺,用试管法通过不连续密度梯度HC-A-Ficoll纯化 液纯化胰岛细胞。2、通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数胰岛细胞的 数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能。3、通过免疫组 化和透射电镜观察分离纯化的胰岛细胞是否存在胰岛素和胰高血糖素颗 粒。4、通过DTz染色,在倒置显微镜下计数Pefabloc组和PNGS组纯 化胰岛细胞的数量,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能。5、采用 MTT法测定三种免疫抑制剂在不同浓度作用下胰岛细胞活力的变化。 结果:1、纯化后平均每个胰腺可获得81444士34631个胰岛细胞团, 平均每克胰腺组织可获得胰岛细胞团1 136士474,平均纯度为74.84%。2、 纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时胰岛素的释放量 为低糖时2.巧的倍(p0.01),免疫组织化学和透射电镜下胰岛素和胰 高血糖素颗粒均为阳性。3、胶原酶P工作液中加入Pefabloc后,每个胰 腺可获得1 10250士28590个胰岛细胞团,平均每克胰腺组织可获得胰岛 细胞团1559士319个,产量高于control组,有显著意义,但对胰岛素释 放刺激反应无明显差别,SI分别为Pefabloc组1.93士0.21和Contr01组 1.86士0.19;纯化液中加入PNGS后,每个胰腺可获得65750士8132个胰 岛细胞团,平均每克胰腺组织可获得胰岛细胞团871士204个,产量高于 Contl’o1组,但统计学上没有显著差别,胰岛素释放刺激反应结果显示, 51分别为PNGS组2.74士0.54和Control组1.86士0.19,PNGS组明显高 于Control组,差别显著。4、低剂量的雷帕霉素对胰岛细胞活力无明显 影响,ing/mL及以上雷帕霉素能引起胰岛细胞活力降低,低剂量和高剂 量的血cli刀口nab和FTY720对胰岛细胞的活力均无明显影响。 结论:1、建立了人胰岛细胞分离纯化的方法。2、Pefabloc能增加 胰岛细胞的产量,PNGS可以保护胰岛细胞。3、雷帕霉素对胰岛细胞有 一定的毒性作用,dach刀田皿ab和FTY720对胰岛细胞无明显毒性作用。
【学位授予单位】:中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R657.5

【引证文献】
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 汪亦男;胡强;戚文军;那顺巴雅尔;顾为望;;成体西藏小型猪胰岛体外分离与纯化的研究[A];第十届中国实验动物科学年会论文集[C];2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 彭宝岗;吕明德;肖定璋;梁力建;何强;;三七总皂甙阻断大鼠肝细胞钙内流的研究[J];中华实验外科杂志;1997年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周琳,薛耀明,金春华,邹红;胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究[J];第一军医大学学报;2001年02期
2 赵德明,张桦,陈宏,蔡德鸿;三种不同免疫抑制剂对胰岛细胞功能的影响[J];第一军医大学学报;2003年02期
3 郑燕芳;施红;王晓宁;;几种中药复方对胰岛细胞凋亡、坏死的影响[J];福建中医学院学报;2007年04期
4 吴海军;肖恩华;;骨髓干细胞应用于肝脏疾病的治疗[J];国际医学放射学杂志;2008年03期
5 乔新惠,宋岚,李邦良,周弟先,刘四春;甲壳低聚糖对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛细胞生长及胰岛素分泌量的影响[J];医学临床研究;2003年04期
6 季代金;黄茂涛;;应用自体骨髓干细胞治疗肝硬化研究进展[J];中华实用诊断与治疗杂志;2009年11期
7 吴靖芳;薛刚;张耕;王浩宇;王志勇;张小俊;郑慧娥;任君旭;;大鼠胚胎成纤维细胞与胰岛共培养的实验研究[J];解剖学报;2007年05期
8 吴海军;肖恩华;尚全良;李艳辉;罗伟;袁友红;;同种异体骨髓基质细胞肝内移植治疗急性肝损伤的实验研究[J];临床放射学杂志;2009年10期
9 吴海军;肖恩华;;骨髓干细胞移植治疗肝脏疾病的若干问题[J];世界华人消化杂志;2008年25期
10 姜文泉,元文勇,柳明洙,孙权,申容硕,张学武;三七总皂甙对大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期钙离子含量变化的影响[J];延边大学医学学报;2001年04期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 盛希群;硒与糖尿病关系的研究[D];华中科技大学;2004年
2 郝丽萍;酒精对胰岛β细胞胰岛素分泌及凋亡影响的研究[D];华中科技大学;2005年
3 杨雪菲;以转基因为基础的胰岛生物发光影像学和胰岛素合成功能研究[D];华中科技大学;2007年
4 焦艳;TGF-β1在BMSC移植可能对大鼠肝纤维及肝癌进程影响中的作用[D];福建医科大学;2009年
5 刘晟;经肝动脉及门静脉途径非人类灵长类动物肝内异种胰岛移植的研究[D];中南大学;2010年
6 尚全良;同种异体骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的磁共振扩散成像实验研究[D];中南大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 邬姗;小檗碱改善内质网应激减轻胰岛素抵抗的分子机制[D];华中科技大学;2010年
2 周琳;胰淀素对培养的新生大鼠胰岛细胞生物功能影响的实验研究[D];第一军医大学;2000年
3 张晓春;降糖孜雅比提片(HZT)对体外培养胰岛细胞的影响[D];新疆医科大学;2007年
4 吴海军;同种异体骨髓基质细胞肝内移植治疗急性肝损伤疗效观察的实验研究[D];中南大学;2008年
5 姚海;新疆石榴皮提取物对原代培养胰岛细胞功能的影响[D];新疆医科大学;2008年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 范宇;石炳毅;钱叶勇;杜源;;胶原酶消化时间及质量浓度对大鼠胰岛细胞分离的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年20期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 关永源,陈克敏,孙家钧,关超然,Daniel E E;三七皂甙对血管平滑肌α受体引起~(45)Ca外溢与内流的影响[J];中国药理学通报;1990年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王君,张云良;7例1型糖尿病患者用无糖皮质激素免疫抑制剂行胰岛移植[J];国外医学.内分泌学分册;2001年04期
2 蔡锦全,谭建明,董维平,王煜菲,王鉴波;西罗莫司和FTY720对大鼠胰岛细胞体外分泌功能的影响[J];第二军医大学学报;2004年11期
3 肖毅,何晓东,王姮;胰岛移植的临床应用[J];中国糖尿病杂志;1996年01期
4 颜绮华,阎书凤;胰岛移植临床应用近况[J];广州医药;1996年04期
5 权金星,汪大望,沈飞霞,郑景晨,倪连松,吴建波;高浓度葡萄糖对人胰岛β细胞凋亡影响的分子机制[J];中华老年医学杂志;2004年11期
6 严蕊琳;谢永红;;胰岛移植后血管重建的实验进展[J];嘉兴学院学报;2009年06期
7 张海宏,廖顺尧,程惊秋,李幼平;胰岛移植研究进展[J];临床外科杂志;2002年03期
8 周茂华,陈东明,夏兆骥,丁亮华,贾铁利,李静平,王传民,朱洪荫;微囊化大鼠胰岛异种移植治疗小鼠实验性糖尿病的研究[J];中华器官移植杂志;1999年01期
9 张雷,单世光,吴德全,孙岩,齐忠权;他克莫司与来氟米特对异种胰岛移植术后T细胞亚群的影响[J];中华器官移植杂志;2003年04期
10 胡远峰;人胎胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病[J];中国实用外科杂志;1994年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 万晓玉;林宁;陈雪茹;董艳;;基质金属蛋白酶2在2型糖尿病大鼠模型的胰岛组织中的表达[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
2 杜玉茗;王虹;;抗动脉粥样硬化治疗对IGT病人胰岛β细胞功能的影响[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年
3 ;教学与技术方法[A];中国解剖学会2004年年会论文文摘汇编[C];2004年
4 张丽;赵家军;;棕榈酸对胰岛的脂毒性及力平之保护作用的研究[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年
5 王纲柱;孙爱励;胡晓东;王绪朝;胡岩;肖纯杰;;胰岛细胞移植治疗糖尿病的临床研究[A];第七次中国中西医结合糖尿病学术会议论文汇编[C];2004年
6 秦伟锋;石岩;张文顺;刘亮;;糖调节受损临床研究进展[A];第十二届全国中医糖尿病大会论文汇编[C];2010年
7 王洪江;邵本深;赵作伟;朱峰;巩鹏;谭广;王忠裕;;无功能胰岛细胞瘤20例诊治[A];中华医学会第10届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2004年
8 李凤飞;孙子林;殷俊梅;翟清;陈碧君;张雪萌;;胰腺星状细胞在2型糖尿病胰岛纤维化进程中的可能作用[A];中国微循环学会2011年全国学术会议论文汇编[C];2011年
9 李扬;袁莉;;ACE2-Ang(1-7)-Mas通路介导的内皮细胞效应对胰岛B细胞功能的影响[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
10 臧贵明;杨晔;高连如;张昭馥;;高血压患者胰岛β细胞功能评价及雷米普利干预实验[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘侃;华北制药领跑免疫抑制剂[N];科技日报;2004年
2 胡德荣;环孢菌素A药理作用机制揭示[N];健康报;2006年
3 本报记者 魏小刚 刘章锁 张军军;老产品宝刀不老 新产品应运而生[N];中国医药报;2005年
4 王卿;转型路上的坚实步伐[N];医药经济报;2004年
5 卫生部中日友好医院风湿免疫科主任医师 马丽;治类风湿关节炎要用病情缓解药[N];保健时报;2007年
6 吴新光;华药 创新成就多元[N];河北经济日报;2007年
7 本报特约撰稿人 干荣富 甘石;免疫抑制剂,不愁没有后来者[N];医药经济报;2007年
8 ;免疫抑制剂的临床应用现状[N];中国医药报;2004年
9 硕强;省生物产业项目首获政策性贷款[N];河北日报;2007年
10 信闻;不用免疫抑制剂可控制排异反应?[N];医药经济报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 龚蕾;高糖致胰岛微血管内皮细胞凋亡的机制及年龄相关胰岛β细胞再生的研究[D];山东大学;2013年
2 刘福强;脂毒性对胰岛微血管内皮和胰岛功能的损伤及GLP-1的干预作用[D];山东大学;2012年
3 吴振永;AMPA受体影响β细胞胰岛素分泌的机制[D];浙江大学;2011年
4 李扬;ACE2-Ang(1-7)-Mas通路介导的胰岛内皮细胞效应对β细胞功能的作用及机制研究[D];华中科技大学;2011年
5 陈海燕;长期高蛋白饮食对营养性肥胖大鼠胰岛的影响及发生机制的研究[D];山东大学;2009年
6 刘铁军;微生物酵素对甲基强的松龙作用下肠屏障功能影响的实验研究[D];首都医科大学;2005年
7 王新国;人肝再生增强因子免疫抑制机制研究[D];重庆医科大学;2009年
8 罗明琍;桑叶有效部位降血糖作用与JNK信号通路的关系[D];广州中医药大学;2013年
9 汪英;ACE2-Ang(1-7)-Mas轴介导的胰岛内皮功能对β细胞功能的调节及机制[D];华中科技大学;2013年
10 马雪;重组人胰高血糖素样肽-1前药(Pro-rhGLP-1)的表达、纯化及药效学研究[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵德明;人胰岛细胞分离纯化的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 杨宁;用大肠杆菌表达速效人胰岛类似物的研究[D];上海交通大学;2010年
3 糜公仆;2型糖尿病患者血管紧张素Ⅱ水平与脂联素、胰岛β细胞分泌功能的关系探讨[D];重庆医科大学;2011年
4 吴亚文;运动训练对糖尿病大鼠胰岛形态和β细胞功能的影响[D];南京医科大学;2010年
5 林忆阳;整合素α3与基质相互作用对体外培养胰岛组织存活与功能的影响[D];第一军医大学;2001年
6 张旭辉;大鼠胰岛和睾丸支持细胞共移植治疗糖尿病的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
7 张雅静;宫内发育迟缓大鼠胰腺PDX-1的表达及意义[D];中国医科大学;2010年
8 周辉华;穿心莲内酯衍生物抗H_2O_2诱导的胰岛细胞RIN-mβ凋亡的蛋白组学研究[D];暨南大学;2010年
9 王清勇;新生SD大鼠岛源性胰岛祖细胞的分离培养与诱导分化[D];郑州大学;2004年
10 高利平;IL-1β损伤胰岛β细胞机制及FDP保护作用的初步研究[D];重庆医科大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026