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《第一军医大学》 2004年
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人胎儿肺上皮细胞的发育分化及其干细胞的初步鉴定

孔祥永  
【摘要】:肺发育的程度与出生婴儿的生存能力密切相关,而肺泡发育与肺泡上皮细胞的分化是肺发育程度的形态学标志,肺泡发育特别是AECⅡ的发育不完善会导致肺表面活性物质及其相关蛋白的合成和分泌障碍,影响肺功能并导致肺部疾病。许多肺部疾病如囊性肺纤维化、呼吸窘迫综合征和慢性肺疾病,严重影响着新生儿和婴幼儿的生命安全和生存能力。成熟的肺上皮细胞都是胚胎期的上皮干细胞发育而来,肺发育的过程伴随着上皮干细胞不断发育分化以及凋亡的过程。肺部干细胞研究的重要性在于,不仅对肺的发育有一个新的认识,而且能估计肺部疾病和肿瘤的发生发展情况并应用于体内的基因治疗。但肺上皮干细胞的研究进展相对滞后,其原因就是目前还缺乏鉴定肺上皮干细胞的有效手段。近些年来,人们普遍认为在肺支气管树的不同解剖部位存在着不同的具有干细胞特征的细胞亚群。在肺组织中是否存在一种“普遍性”的多潜能的上皮干细胞一直是人们努力探索和研究的疑难问题。 研究证明,TTF-1作为重要的调控上皮细胞特异性基因表达的同源核转录因子,对促进胎肺发育起重要作用。SP-A和SP-B是组成PS的重要的相关蛋白,直接反映着肺泡发育尤其是AECⅡ分化与成熟程度。新近研究表明,TTF-1在体外可以激活人肺泡上皮细胞的SP-A、SP-B和SP-C的基因转录,然而TTF-1、SP-A和SP-B在人胎肺发育过程中的表达规律在国内还少见报道。目前发现和鉴定干细胞的大多数成果都归功于标记物的使用,但肺上皮干细胞还缺乏特有的表面标记。国外已有研究报道在小鼠胎肺发育中持续强阳性表达mTERT的上皮细胞可能充当肺干细胞,而上皮干细胞标记物CK-19和神经前体细胞表面标记nestin在人胎肺中的表达规律及其在鉴定肺上皮干细胞中的作用国内外均未见报道。因此本研究拟通过观察人胎儿肺发育过程中上皮细胞发育分化的形态特 征和特异性蛋白的表达,进一步阐明肺上皮细胞发育分化的规律及其调 节因素,在形态和功能上对发育过程中的肺上皮干细胞进行鉴定,初步 明确可作为鉴定肺干细胞的标志物及方法,同时阐明其存在的壁完和分 布特征,为后续的研究工作打下基础。 材料和方法 一,收集水囊引产的妊娠10周一34周正常胎儿肺组织共41例及新 生儿和成人正常肺组织各2例,取材、固定、包埋制成石蜡切片,HE染 色,光镜观察;选取其中21例胎肺组织取材后切成Illun3大小的组织块, 2.5%戊二醛前固定,l%四氧化饿后固定,乙醇丙酮系列脱水,Spur(环 氧树脂)包埋,超薄切片,醋酸铀一构椽酸铅双染色,透射电镜观察。 二,应用免疫组化超敏SP法检测TTF一1、SP一A和SP一B在人胎肺发 育中的表达,同时,首次检测干细胞抗原hTERT、上皮干细胞抗原CK一19 和神经前体细胞表面标记nestin在人胎肺中的表达,光镜观察。 三,应用双重标记免疫组化染色同时检测TTF一1和SP一A、TTF一1和 SP一B在人胎肺中的表达,光镜观察。 四,应用原位杂交的方法检测神经前体细胞表面标记nestin--mRNA 在人胎肺中的表达,光镜观察。 实验结果 一,肺上皮细胞的分化发育观察:胎肺发育的早期以支气管的不断 分支和管壁结构的不断完善为主,上皮主要为柱状的未分化细胞。19周 时,在形态上即可辨认AECll、AECI和气血屏障。25周原始肺泡开始形 成,肺泡上皮以立方形的AECll为主,但AECI逐渐增多,气血屏障逐渐 变薄。 二,TTF一1、SP一A和SP一B的表达与分布:TTF一1在胎肺第10周已开 始表达,定位于上皮细胞核内,随着支气管的发育分化,远端位置的反 应总是较近端者强。SP一A蛋白在胎肺10周亦开始表达,SP一B蛋白晚于 SP一A于胎肺16周开始表达,定位于上皮细胞胞浆。SP一A和SP一B在小管 期表达逐渐增强,阳性反应细胞主要为无纤毛细胞。胎肺发育末期、新 生儿肺至成人肺中,TTF一1、SP一A和SP一B阳性反应均在AECll和肺泡前 提细胞中稳定表达,纤毛细胞和AECI无表达,TTF一1分布的时间、空间 特征与肺泡表面蛋白SP一A和SP一B的分布有重叠性,即它们可以分别在 一3一 细胞浆和细胞核同时表达。原始肺泡上皮细胞SP一A和SP一B的表达在胎 儿出生前增加不明显,出生后合成分泌明显增多。 三,hTERT在胎肺组织中的表达与分布:胎肺发育10周时检测到 hTERT的表达,上皮和间质均有表达。hTERT的表达高峰在小管期的早期 即17周一20周,21周一24周时上皮细胞hTERT阳性细胞逐渐向远端呼吸 道迁移,25周hTERT开始表达于新生的原始肺泡上皮,呈减弱趋势。 hTERT反应较强的细胞呈区域性或散在分布于小支气管、细支气管基底 膜和肺泡上皮,在形态上类似小支气管、细支气管基底样细胞中的少部 分细胞和原始肺泡AECll中的少部分细胞。 四,CK一19在人胎肺发育中的表达:胎肺发育早期表达丰富,几乎 所有的上皮细胞均CK19表达阳性,定位于上皮细胞的胞膜和胞浆,间质 细胞无表达。随着胎肺的发育,主要在立方状的上皮细胞中表达,成熟 的AEC工无表达。阳性细胞主要有两种形态:一种胞核较大,圆形或椭圆 形
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R329

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 傅文玉,路艳蒙,朴英杰;人骨髓间充质干细胞的分化与端粒酶活性[J];第一军医大学学报;2001年11期
2 孔祥永,栾斌,冯建飞,贾天明,徐灵敏,郭杰,郭铭玉;哮喘大鼠气道细胞DNA合成和气道重塑关系的实验研究[J];第一军医大学学报;2002年09期
3 卢晓晔,黄中新,王樯;小鼠肺泡发育与肺泡上皮细胞分化的电镜观察[J];解剖学研究;2000年01期
4 郭灵;巢蛋白及其功能[J];解剖学研究;2001年03期
5 黎靖;胰腺干细胞的研究进展(文献综述)[J];国外医学.外科学分册;2003年03期
【共引文献】
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1 侯铁舟;陶洪;朱丰燕;王帅帅;;CD44在小鼠磨牙牙胚发育中的时空表达[J];第四军医大学学报;2009年06期
2 刘晓静,陈英,原林,余磊,王非,廖华;间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察[J];第一军医大学学报;2003年01期
3 刘小蓉,安靓,李进;昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察[J];第一军医大学学报;2004年04期
4 孔祥永,安靓,陶少华,陈玥,杜江,封志纯;人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义[J];第一军医大学学报;2004年05期
5 孔祥永;杜江;封志纯;;肺表面活性物质相关蛋白B在人胎肺发育中的表达及意义[J];南方医科大学学报;2006年08期
6 路艳蒙,傅文玉,朴英杰,乔东访,安连兵;人骨髓间充质干细胞的超微结构[J];电子显微学报;2002年04期
7 孔祥永;杜江;封志纯;;肺表面活性物质相关蛋白A在人胎肺发育中的表达及意义[J];中国儿童保健杂志;2005年06期
8 郭灵,谢瑶,何宏文,汪华侨,姚志彬;成年大鼠眼睫状体缘色素上皮组织的神经前体细胞的培养和鉴定[J];解剖学研究;2002年03期
9 周立兵,袁群芳,阮奕文,姚志彬;侧脑室注射秋水仙素诱导大鼠脑巢蛋白的表达[J];解剖学研究;2002年03期
10 熊轶,黄中新,覃莉;人胎肺Ⅱ型肺泡细胞中表面蛋白-B的表达及意义[J];解剖学研究;2002年04期
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1 荆海霞;魏青;张勤文;李莉;牛海林;薛乾;梁林;俞红贤;;不同发育阶段黄牛肺泡组织结构的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
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1 李略;人羊膜间充质干细胞向视网膜神经元样细胞诱导分化及其钠离子通道电生理特性的实验研究[D];北京协和医学院;2008年
2 龚加庆;干细胞参与胰腺炎损伤修复实验研究[D];第三军医大学;2011年
3 邓蔓菁;面突外胚间充质干细胞的多向分化及永生化[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
4 姜笃银;人体皮肤上皮细胞异常增殖和分化特征及其与创(烧)伤不同修复结局关系的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
5 王晓静;运用nestin-EGFP转基因小鼠研究脑和胰腺中nestin阳性细胞的体外增殖分化潜能[D];山东大学;2004年
6 张慧茹;仔猪胰腺干细胞的分离鉴定[D];西北农林科技大学;2005年
7 庞全海;山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及体外分化潜能的研究[D];西北农林科技大学;2005年
8 席恺;神经干细胞耳蜗移植的相关研究[D];郑州大学;2005年
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10 何旭;低氧促进人骨髓间充质干细胞成管、内皮分化及其在血管生成过程中的作用[D];吉林大学;2006年
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1 张烨;任华健;卫积书;吴峻立;徐泽宽;苗毅;;胰腺成体干细胞的体外培养和鉴定[J];南京医科大学学报(自然科学版);2009年04期
2 雷勋明;熊正明;王险峰;;维甲酸对缺氧缺血性脑损伤新生鼠内源性神经干细胞巢蛋白表达的影响[J];中国儿童保健杂志;2007年05期
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4 熊轶,黄中新,覃莉;人胎肺Ⅱ型肺泡细胞中表面蛋白-B的表达及意义[J];解剖学研究;2002年04期
5 张培训,姜保国;骨髓间充质干细胞的研究进展与周围神经修复[J];中国临床康复;2004年02期
6 徐秀红,郭宏波,毛佳,杜林栋;绿色荧光蛋白在成人胰腺来源的巢蛋白阳性干细胞中的表达[J];临床和实验医学杂志;2004年01期
7 司丕成;刘福云;夏冰;;神经干细胞在终丝中分布研究[J];临床小儿外科杂志;2005年06期
8 王海澜;蒋泽生;李爱辉;潘明新;高毅;;Nucleofector~(TM)技术在胰腺十二指肠同源基因1转染大鼠骨髓来源巢蛋白阳性细胞中的应用(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年29期
9 石绮屏;蔡继业;冯烈;;干细胞治疗糖尿病现状及进展[J];中国实用内科杂志;2011年05期
10 王英;董明敏;杜英;;新生豚鼠神经干细胞的分离培养及鉴定和标记(英文)[J];中国临床康复;2006年29期
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1 毛峰;;脂肪干细胞向神经元的诱导分化[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年
2 王尊彦;;生长因子——划时代食用干细胞产品[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年
3 吴齐全;周君梅;张胜利;马晓荣;高同斌;谢华;陈方;;人羊水来源干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
4 陈志胜;陈胜锋;王丙云;刘林;;小鼠孤雌胚胎干细胞建系方法与效率[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 刘祖梅;韩毅;杜心灵;胡燕;金满文;;成年小鼠心脏干细胞的分离、培养鉴定和离子通道特性[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
6 余细勇;;干细胞向心肌细胞分化的表观调控研究[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
7 王国平;段亚琦;;干细胞与心肌梗死后的修复——机遇和挑战[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
8 郭坤元;佘妙荣;牛新清;胡亮杉;贺艳杰;曲佳;邓兰;涂三芳;;白血病干细胞的同种异体免疫抵抗和调节[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 李蓝;;皮肤恶性肿瘤中潜在的肿瘤干细胞[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
10 冯凯;裴雪涛;;干细胞与现代组织工程学[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 吴洁;思考干细胞——研究、临床应用与产业化[N];科技日报;2001年
2 本报记者 聂翠蓉;抓住致癌的真正元凶[N];科技日报;2006年
3 记者 毛黎;美找到获取干细胞的又一新来源[N];科技日报;2006年
4 本报记者 天明;Geron公司永失所“爱”[N];中国高新技术产业导报;2001年
5 北京和讯 张明星;干细胞——最大的生命科学概念[N];中国有色金属报;2001年
6 周向东;可以让你有一个备用的脏器[N];中国医药报;2001年
7 记者王俊鸣;科学家说用干细胞可修补脑部损伤[N];科技日报;2002年
8 杨昆;干细胞启动4000亿美元市场[N];医药经济报;2002年
9 章静波;干细胞——生命科学的一个主攻热点[N];光明日报;2000年
10 通讯员 王其玲 记者 罗坚梅;干细胞,燃起人类绝处逢生新希望[N];杭州日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孔祥永;人胎儿肺上皮细胞的发育分化及其干细胞的初步鉴定[D];第一军医大学;2004年
2 邹西峰;骨髓源干细胞在损伤脑组织中迁移和分化的研究[D];第一军医大学;2004年
3 邓蔓菁;面突外胚间充质干细胞的多向分化及永生化[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
4 江小霞;人骨髓间充质干细胞对树突状细胞免疫功能的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
5 庞希宁;干细胞诱导分化为神经细胞的研究[D];中国医科大学;2005年
6 方利君;骨髓间充质干细胞转化为皮肤组织的实验研究[D];中国医科大学;2004年
7 高文根;自体骨髓CD34~+干细胞移植治疗冠心病心肌梗死的实验研究[D];第四军医大学;2005年
8 刘宏伟;骨髓干细胞动员与移植治疗心肌梗死比较[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
9 金丹;逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究[D];第一军医大学;2002年
10 郭红延;大鼠牙髓干细胞培养鉴定及生物学特性研究[D];第四军医大学;2004年
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1 裴涌;成人结膜干细胞定位的免疫组织化学研究[D];中国医科大学;2006年
2 周德存;人骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的实验研究[D];安徽医科大学;2003年
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4 韩桂林;体外诱导犬骨髓间充质干细胞向上皮样细胞分化的初步研究[D];第二军医大学;2006年
5 徐洪璋;骨髓间充质干细胞的相关研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
6 刘丹丹;人骨髓间充质干细胞向内皮细胞体外诱导分化的实验研究[D];吉林大学;2004年
7 傅斌;人前列腺干细胞分离培养及其生物学特性研究[D];江西医学院;2004年
8 黄宇婷;骨髓来源干细胞异位向子宫内膜方向分化的研究[D];复旦大学;2009年
9 李勇;大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及BMP2在诱导其向神经元样细胞分化中的作用[D];第三军医大学;2004年
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