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《第一军医大学》 2004年
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鲍鱼养殖水系中霍乱弧菌基因水平转移的初步研究

朱利  
【摘要】:霍乱毒素基因(cholera toxin gene,ctxAB)可以通过溶源性丝状噬菌体(CTXφ)发生水平转移,因此,基因水平转移在霍乱弧菌(Vibrio cholerae,VC)的进化中有着举足轻重的作用。随着致病性VC也是水系中常在菌观念的确立,环境因素对ctxAB基因转移的影响成为人们研究的热点。故本研究在初步调查致病性VC携带溶源性噬菌体的基础上,建立了追踪致病基因的原位PCR—流式细胞仪(in situ PCR—flow cytometry,ISPCR—FCM)分析法。并在鲍鱼养殖水系中,运用该方法进行了VC基因水平转移的初步研究。 以丝裂霉素C为诱导剂,调查了VC携带溶源性噬菌体的情况。结果表明在丝裂霉素C诱导作用下,约18.75%(3/16)菌株产生携带ctxAB基因的丝状噬菌体CTXφ;一株O139群霍乱弧菌分泌出一种单条型丝状噬菌体,其性质不详;未检测出可以转移毒素共协调菌毛(toxin-coregulated pilus,TCP)的溶源性丝状噬菌体(Vibrio cholerae pathogenicity island phage.VIPφ)。 VC经固定和溶菌酶消化处理后,根据常规PCR确定的扩增参数进行细胞内ctxAB基因的原位扩增。FCM分析显示阳性率达100%。裂解细菌,获取扩增产物,琼脂糖凝胶电泳检测和测序的结果表明扩增产物是ctrAB基因的序列。多次重复试验结果一致。该方法的灵敏性达10~4个/ml。至此,建立了原位检测细菌内特异基因的ISPCR-FCM分析法。 以鲍鱼养殖水系为研究对象,考察该水系中ctrAB基因的水平转移情况。同时,检验ISPCR-FCM分析法在实际工作中的应用。结果显示,由于未检出ctxAB~+菌株,故无法评估VC基因水平转移事件。ISPCR-FCM分析法在实际运用中,其灵敏性、背景干扰以及流式细胞仪的分选工作等方面尚存在问题,需进一步研究改善。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S941

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【参考文献】
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