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《第一军医大学》 2004年
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兔骨髓基质细胞附着于自体牙骨质片生长的体外研究

陈明  
【摘要】:由于牙周组织再生细胞的数量和来源不足,牙骨质很难得到再生。牙骨质与骨组织在结构、性质上有诸多相似之处,同时骨髓基质细胞(BMSCs)具有向多种组织分化的潜能,且材料易得,易于在体外分离、培养和扩增;可来源于自体,不存在免疫排斥问题,因此将骨髓基质细胞作为牙周组织工程,特别是牙骨质再生中的种子细胞具有可行性。本研究拟将体外诱导培养的骨髓基质细胞作为种子细胞,牙骨质片作为载体,观察其在载体上的粘附生长情况,探讨体外以骨髓基质细胞为种子细胞修复牙骨质的可行性,为进一步研究牙骨质的生成修复奠定基础。 方法:1、抽取健康新西兰大白兔骨髓,体外以全血培养法进行原代培养,传代后以含10mmol/L β-甘油磷酸钠、10~(-8)mol/L地塞米松、50mg/L L-抗坏血酸的矿化条件培养液培养,每日在光镜下观察细胞形态,制作细胞爬片,进行HE染色,用改良Gomori钙钴法进行碱性磷酸酶染色和钙结节染色检测其成骨活性。 2、拔除健康新西兰大白兔牙,制成3mm×2.5mm×0.5mm的牙骨质片,取24孔培养板,放入无菌的牙片(实验组)和玻片(对照组),将经Gomori钙钴法染色证明已具成骨细胞表型的第3~4代的骨髓基质细胞以1×10~6个/孔的细胞密度接种于牙片和玻片的表面,加入矿化培养液培养,每2d换液1次,按分组时间(分为1d、1w、2w、3w、4w等时间点)取材。 3、将实验组取材的样品制成石蜡切片,HE染色,光镜下观察骨髓基质细胞在牙片表面的生长状况,对照组直接在光镜下观察;扫描电镜观察骨髓基质细胞与自体牙骨质片的体外附着生长状况。 结果:1、倒置显微镜下显示体外培养的骨髓基质细胞表现为梭形、 多角形等成纤维细胞形态,HE染色显示细胞成多个不规则突起,胞 质淡染,胞核深染,胞核呈扁圆形。改良的钙钻法染色显示骨髓基质 细胞ALP染色为阳性,钙结节染色显示胞质中有棕黑色颗粒生成, 说明细胞具有ALP活性有钙结节生成。 2、实验组石蜡切片经HE染色显示,细胞吸附于牙骨质片表 面且生长形成细胞薄层,4w后有新生物附着于牙骨质表面上,着色 较浅,结构疏松。对照组细胞在玻片上可重叠生长,无细胞接触抑制。 3、实验组扫描电镜观察接种后的骨髓基质细胞附着于牙骨质 表面生长良好,细胞周围可见钙盐结晶样物质沉积。4w后可见钙化 层的形成,与对照组相比细胞排列紧密,结构完整。 结论:1、骨髓基质细胞在体外诱导培养后表现出明显的成骨细胞特 点,有较强的成骨潜能。 2、用自体牙骨质片作为载体较其它生物材料具有良好的生物 相容性,能有效地促进骨髓基质细胞的粘附增殖和矿化。 3、骨髓基质细胞作为种子细胞修复牙骨质具有可行性。
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