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《第一军医大学》 2004年
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腺病毒介导双自杀基因选择性杀伤血管内皮细胞的研究

杨文宇  
【摘要】:肿瘤是医学界研究的焦点,人们一直为寻求有效的治疗手段达到抗肿瘤生长转移的目的而努力。随着分子生物学及基因工程的迅速发展,基因治疗以成为恶性肿瘤的有效治疗手段之一,在众多的基因治疗方法中,自杀基因疗法引起了许多学者的兴趣,是一种较为有效的方法,成为近年基因治疗的研究热点。该疗法除能直接杀伤转基因的肿瘤细胞外,还可利用其独特的“旁观者效应”杀伤周围大量未转基因的瘤细胞,另外还有先转染后治疗、可靶向作用、可诱导免疫等优点,在肿瘤的基因治疗中具有独特的优势。但目的基因转导率低、肿瘤细胞对相应的前药的抗药性及不同类型的肿瘤细胞对各种自杀基因治疗系统的敏感性不同等缺点严重影响了自杀基因治疗的效果。如何采取更有效的自杀基因系统是目前所急需解决的问题。 高效基因转移载体和合适的目的基因的选择是影响疗效的关键因素。腺病毒是高效的基因转移载体,它既能感染分裂旺盛的细胞也能感染静止期细胞,而且病毒滴度高、易于储存等,因而成为肿瘤基因治疗的主要载体之一。在in vivo基因转移途径中腺病毒载体则为病毒性载体中的首选,体内转移率可达70%-80%以上。传统的细胞内同源重组腺病毒载体制备方法步骤繁多、工作量大,而且成功率较低。已有学者利用细菌内同源重组法制备重组腺病毒,使制备过程大为简化、成功率高。而“两步同源重组法”是David ES等提出的一种在细菌内同源重组法的基础上进行改良的简便高效快捷的最新方法。 随着研究的深入,有学者发现不同类型的肿瘤对两种自杀基因治疗系统的敏感性不同,如胃肠道的肿瘤对CD/5-FC基因治疗系统较为敏感,而脑胶质瘤等对TK/GCV自杀基因治疗系统敏感。另外,在单用CD/5-FC或TK/GCV自杀基因治疗系统 后复发的肿瘤细胞对相应的前药产生了耐药性。因此有学者联 合应用en/5一FC系统和TK/GCV系统(double suicide gene)治疗 肿瘤,发现可获得协同作用,大大提高了抗肿瘤效应,但未发 现耐药性产生。 目前由于以肿瘤细胞为靶点的基因治疗的疗效不能令人满 意,许多学者尝试以肿瘤血管为治疗靶点,通过抑制肿瘤新生 血管生成,切断肿瘤供养来抑制肿瘤生长,减少肿瘤的浸润和 转移,己取得了较为满意的效果,成为近年肿瘤生物治疗的研 究热点。近年研究己表明肿瘤血管的生长速度是正常组织的 50一100倍。肿瘤血管之所以能持续生长关键在于其血管内皮细 胞的增殖能力,而肿瘤血管内皮细胞的增殖与多种内皮细胞生 长因子有关,其中血管内皮生长因子(VEGF)是最重要的因 子,是已知最强的促内皮细胞有丝分裂原,是血管形成的关键 因子。VEGF促进肿瘤血管的生长必须与血管内皮细胞表面的 vEGF受体(vEGFR)相结合,使vEGFR胞内部分磷酸化而 激活,通过信号转导进一步激活基因表达、DNA和蛋白合成, 从而产生细胞生长信号,促使血管内皮细胞分裂、增殖。肿瘤 新生血管除了营养肿瘤细胞促使肿瘤生长外,还可以通过其建 立的微循环促使肿瘤细胞转移。因此抑制肿瘤血管生成大大增 强了抗肿瘤效果。现已知VEGFR有五型,其中n型受体 (KDR/Flk一l)与肿瘤的新生血管形成关系最为密切。研究表 明VEGF与大肠癌的恶性程度和转移有关。我们的实验也表明 大肠癌组织中KDR表达明显增加。 为了提高自杀基因的靶向性,近年来有学者利用肿瘤细胞 特异的启动子来调控目的基因,从而使目的基因在特定的肿瘤 组织中表达。目前较常用的有甲胎白蛋白(AFP)启动子介导 自杀基因治疗肝癌,采用癌胚抗原(CEA)启动子介导自杀基 因治疗大肠癌等,虽然治疗效果有了明显的提高,但不适用于 AFP、cEA分泌较低的肿瘤。由于vEGF主要在肿瘤细胞及间 质细胞产生,而VEGFR主要在肿瘤血管内皮细胞中表达,利 用vEGF与VEGFR启动子可调控目的基因在肿瘤细胞与肿瘤 血管内皮细胞中选择性表达,目前有学者己进行了这方面的初 步研究。在上述基础上,本课题拟构建以KDR启动子调控下 的cD一TK双自杀基因重组腺病毒,以腺病毒介导的双自杀基因 选择性杀伤大肠癌血管内皮细胞,同时考虑与VEGF启动子介 导双自杀基因联合应用,通过一方面VEGF启动子介导的双自 杀基因选择性杀伤分泌VEGF的大肠癌细胞,减少VEGF的分 泌;另一方面,KDR启动子介导双自杀基因选择性杀伤大肠癌 血管内皮细胞,两者协同作用,双途径,多方位的治疗大肠癌。 目的 研究腺病毒介导的双自杀基因在KDR启动子调控下对 血管内皮细胞的选择性杀伤作用,为进一步开展肿瘤血管的靶 向治疗研究奠定基础。首先利用改进的AdEasy系统构建携 带KDR启动子/C Mv启动子调控的双自杀基因的重组复制缺 陷型腺病毒。针对传统的细菌内同源重组法制备腺病毒过程仍 较复杂,成功率低和对实验室条件要求高等缺点,通过先构建 AdEasier一1细菌后进行细菌内同源重组的“两步转化法”来 简化实验过程,缩短实验周期,提高成功率。构建好的腺病毒 用于感染HuvEc细胞和Lovo细胞,测定感染效率,检测转 基因的表达,对转基因细胞施以前药(5一FC和/或GCV),观 察转基因细胞对前药的敏感性,比较不同转基因细胞对前药的 ?
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R73-3

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 崔健;mPEG-CS介导的livin和survivin双基因干扰治疗大肠癌动物实验研究[D];中南大学;2011年
【共引文献】
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1 翟敬芳;丛林;欧玉荣;;血管内皮生长因子及其激酶插入区受体在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义[J];蚌埠医学院学报;2010年04期
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9 缪应业;刘新;李浩;乔卿华;侯林虎;刘小圆;郝晓柯;;siRNA沉默PC3细胞中KDR基因的表达[J];第四军医大学学报;2008年19期
10 ;Poly(ethylenimine)-grafted-poly[(aspartic acid)-co-lysine]: A Non-viral Polymer with Potential for DNA Delivery[J];Chinese Chemical Letters;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 李若慧;谢飞;;用作DNA载体的聚乙二醇选择性接枝壳聚糖共聚物[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年
2 李若慧;谢飞;;用作DNA载体的聚乙二醇选择性接枝壳聚糖共聚物[A];中国化学会第28届学术年会第5分会场摘要集[C];2012年
3 胡玉荣;张强;马萍;吕万良;王坚成;张振中;;壳聚糖纳米粒基因载体的制备及其转染研究[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
4 赵雪;任慧霞;;壳聚糖及其衍生物作为基因递送载体的研究进展[A];山东省药学会第一届学术年会论文集(下)[C];2005年
5 宗莉;张淑芸;袁喜英;杨晓容;;壳聚糖介导的基因转染研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
6 柯伟伦;蒋晨;;Angiopep修饰的脑靶向基因药物递释系统[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
7 柯伟伦;蒋晨;;Angiopep修饰的脑靶向基因药物递释系统[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 要旸;亲水性聚合物在基因载体、表面蛋白固定及蛋白结晶方面的应用[D];南开大学;2010年
2 高鹏;特异性介导DNA转导的多结构域嵌合蛋白的构建、表达及鉴定[D];吉林大学;2011年
3 王育波;壳聚糖/β-甘油磷酸钠作为液态栓塞材料的可行性分析[D];吉林大学;2011年
4 何年安;超声靶向微泡破坏促进基因转染与药物传送的实验研究[D];复旦大学;2011年
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6 孙勇;hITF基因治疗肠源性感染的体内外实验研究[D];第三军医大学;2011年
7 郭术涛;两亲性可降解聚阳离子核酸载体及层层组装的核酸传递系统[D];天津大学;2011年
8 范黎;壳聚糖智能靶向抗肿瘤药物运载系统研究[D];第四军医大学;2011年
9 马明;作为非病毒基因载体的新型阳离子聚合物的设计合成及应用[D];武汉大学;2011年
10 岳鑫业;聚乙二醇-聚酯-聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯三嵌段共聚物纳米粒基因载体的研究[D];天津大学;2012年
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3 郑翠芳;硅壳/聚合物纳米颗粒制备与载药研究[D];武汉理工大学;2010年
4 徐志学;透明质酸包封的非病毒基因微载体的研究[D];浙江大学;2011年
5 王翔;Pluronic修饰的聚阳离子非病毒基因载体的构建、表征及体外转染效率评价[D];第二军医大学;2011年
6 王娟;分泌型IgA嵌合抗体在中国仓鼠细胞中的表达研究[D];陕西师范大学;2011年
7 张建民;抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对鼠肝癌原位移植瘤及其新生血管的抑制作用[D];南京医科大学;2011年
8 李艳红;载淋球菌PorB基因壳聚糖纳米粒的制备及其诱导小鼠的免疫应答[D];南华大学;2011年
9 冯亮;乳铁蛋白修饰聚合物泡囊对脑胶质瘤的递药特性研究[D];复旦大学;2010年
10 李鹏;层层自组装多功能纳米基因载体的研究[D];山东大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 管晓翔,陈龙邦;肿瘤多药耐药性及其治疗进展[J];癌症进展;2004年02期
3 冯静;陈小兵;赵明耀;;结肠直肠癌肝转移相关分子标志研究进展[J];癌症进展;2009年05期
4 夏雪梅,陈余清,蔡映云,李殿明,胡俊锋,黄礼年;Survivin反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究[J];蚌埠医学院学报;2005年01期
5 Hans J Stauss;;Enhancing Immune Responses for Cancer Therapy[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年03期
6 胡少为,马坚妹,王朝晖,赵宝霞,刘敏,吕申;胃黏膜上皮及胃癌细胞中错配修复基因hMLH1蛋白的表达及意义[J];大连医科大学学报;2004年02期
7 康杰芳;王喆之;;人野生型p53肿瘤抑制基因在烟草中的遗传转化[J];第四军医大学学报;2007年20期
8 姚晓军;黄宗海;李强;王朝阳;;Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用及微环境中细胞因子活性的影响[J];南方医科大学学报;2010年02期
9 唐时幸;基因直接注射方法及其在医学上的应用[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1995年04期
10 吴洪波;于雁;;大肠癌基因治疗进展[J];国际肿瘤学杂志;2006年05期
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1 刘霆;新型非病毒载体介导融合自杀基因靶向治疗结肠癌的实验研究[D];中南大学;2007年
2 郭春光;结直肠癌肝转移相关分子标志物的筛选与鉴定[D];中国协和医科大学;2008年
3 蔡明;Livin基因和Survivin基因联合靶向SiRNA对大肠癌细胞生物学效应的研究[D];华中科技大学;2009年
4 李兰双;Fcy::Fur/5-FC自杀基因系统对宫颈癌的实验研究[D];重庆医科大学;2009年
5 杨转移;WIF-1基因启动子甲基化对星形胶质瘤生物学行为的影响[D];中南大学;2010年
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1 胡友主;Bcl-2、P53基因在肝母细胞瘤中的表达研究及意义[D];暨南大学;2000年
2 申龙树;大肠癌组织HLA及相关分子的异常表达及其意义[D];东南大学;2004年
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4 张惠晶;大肠癌中DCC基因失表达与其启动子甲基化的相关性研究[D];中国医科大学;2008年
5 李竞博;结直肠癌k-ras基因突变率及相关因素的研究[D];吉林大学;2009年
6 吴琼;TPEF、STAT1、CDK8在大肠癌中的表达及其意义[D];广州医学院;2009年
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7 孙晓毅!430030武汉,吴在德!430030武汉,胡俊波!430030武汉,刘绍春,朱惠芬,沈关心;肝癌自杀基因治疗与基因体内导入方法和途径的实验研究[J];中华外科杂志;2001年02期
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9 张正茂,张风华,单保恩,田川雅敏;尿嘧啶核苷磷酸化酶的表达在肿瘤诊断和治疗中的研究进展[J];中国综合临床;2005年08期
10 周嘉嘉;陈汝福;;肿瘤自杀基因靶向治疗[J];国际肿瘤学杂志;2006年01期
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1 朱惠明;姜岭梅;黄勋;;原发性肝癌的自杀基因治疗[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
2 陈兰英;屈二军;;自杀基因治疗在消化道肿瘤中的应用[A];遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集[C];2007年
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4 余东升;黄洪章;潘朝斌;刘习强;唐海阔;胡晓文;;放射诱导启动子介导双自杀基因治疗人舌鳞癌裸鼠移植瘤的实验研究[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年
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7 王桂龙;向阳;;骨肉瘤基因治疗的研究进展[A];2006年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2006年
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9 赵立军;李强;白冲;曹广文;李玉光;戚中田;;肺腺癌组织特异性自杀基因治疗实验研究[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
10 卞卡;成诗银;崔鹏程;;hTERT基因启动子调控靶向自杀基因治疗喉癌的研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
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2 祝源 邹安琪;恶性脑胶质瘤基因治疗研究日渐深入[N];中国医药报;2006年
3 本报记者 熊江雪;“自杀基因”挑战“癌王”[N];健康时报;2005年
4 马飞;肿瘤基因治疗仍在探索阶段[N];健康报;2001年
5 本报特约记者 刘慧;佑安医院成功为肝癌妈妈实施肝移植术[N];保健时报;2008年
6 孔为民;肿瘤基因治疗研究进展[N];中国中医药报;2002年
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1 林荣凯;双自杀基因重组腺病毒靶向治疗大肠癌的体外实验研究[D];第一军医大学;2005年
2 文飞;超声微泡联合CD-UPRT/5-FC自杀基因治疗人肺癌荷瘤鼠的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
3 张英元;CEA启动子驱动的HSV-TK/CD双自杀基因治疗人肺癌细胞的动物实验研究[D];广州医学院;2011年
4 白志杰;hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-TK/GCV基因系统治疗膀胱癌的实验研究[D];河北医科大学;2005年
5 齐进春;人端粒酶逆转录酶启动子驱动重组腺病毒治疗人前列腺癌的动物实验研究[D];河北医科大学;2006年
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8 薛敦;载CD/TK基因PEG-PEI Fe_3O_4纳米磁流体的制备及相关性质研究[D];中南大学;2009年
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10 伍霞;融合型自杀基因Fcy::Fur/5-FC对人卵巢癌细胞杀伤作用的研究[D];重庆医科大学;2009年
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