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《第一军医大学》 2005年
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应用AdEasy腺病毒载体系统构建携带人骨形成蛋白2基因的重组腺病毒

苏秀云  
【摘要】:目的:利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带hBMP2基因的重组腺病毒载体,应用于hBMP2基因治疗和在骨组织工程中对种子细胞进行基因改造,促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。 方法:常规CaCl2法制备E. coli DH5α感受态细菌,pcDNA3-hBMP2质粒转化E. coli DH5α感受态细菌。维特洁DNA小量纯化试剂盒抽提pcDNA3-hBMP2质粒,限制性内切酶XbaI、KpnI酶切,酶切产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定,1.0%琼脂糖凝胶电泳结果与理论上pcDNA3-hBMP2质粒多克隆位点图谱吻合;将pcDNA3-hBMP2送交上海申友公司进行双向测序,hBMP2基因序列与已报告的hBMP2基因序列吻合。pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒转化E. coli DH5α感受态细菌,维特洁DNA小量纯化试剂盒抽提pAdTrack-CMV质粒,限制性内切酶XbaI、KpnI、PacI酶切,酶切产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定,1.0%琼脂糖凝胶电泳结果与理论上pAdTrack-CMV质粒多克隆位点图谱吻合。pcDNA3-hBMP2质粒和腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV经KpnI和XbaI双酶切,凝胶回收试剂盒回收hBMP2基因片断和pAdtrack-CMV载体片断,回收的载体片断和目的基因片断T4 DNA Ligase进行酶连反应。酶连产物转化E. coli DH5α感受态细菌,维特洁DNA小量纯化试剂盒抽提重组pAdtrackCMV-hBMP2穿梭质粒,PmeI、PacI、BamHI酶切,酶切产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果与pAdTrackCMV-hBMP2质粒预期理论酶切位点相吻合,证明获得正确的重组pdTrackCMV-hBMP2质粒。参照Gene PulSeE XcellTM Instruction Manual(电转仪操作手册)制备E coli
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

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