收藏本站
《第一军医大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

靶向性VEGF启动子介导CD/TK双自杀基因重组腺病毒混合碘油治疗兔VX2肝癌的实验研究

陈德基  
【摘要】: 目的 评价采用VEGF启动子介导CD/TK双自杀基因重组腺病毒(Ad-VEGFp-CDgly TK)混合超液化碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射更昔洛韦(GCV)+5-氟胞嘧啶(5-FC),综合治疗兔VX2肝移植癌的效果。 材料与方法 第一部分:VEGF启动子介导CD/TK双自杀基因重组腺病毒的构建。 第二部分:兔VX2肝移植癌模型的建立。利用组织块法。 第三部分:靶向性VEGF启动子介导CD/TK双自杀基因重组腺病毒混合超液化碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实施及其疗效的综合评价。实验分组:①经肝动脉注入生理盐水(NS组)、②超液化碘油(LP组)、③Ad-VEGFp-CDglyTK(Ad-VEGFp-CDglyTK组)和④Ad-VEGFp-CDglyTK与超液化碘油混合(Ad-VEGFp-CDglyTK+LP组)。基因治疗组术后腹腔注射GCV+5-FC。疗效评价:(1)确定肿瘤存在,观察肿瘤的生长状况对各组实验兔行MRI、SCT、DSA、US检查。(2)双自杀基因的转染RT-PCR法证实。(3)组织病理学的改变常规HE染色,光镜下观察。(4)免疫组织化学检测采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶法(SP法):检测肿瘤组织抗VEGF、抗Ⅷ因子相关抗体表达。并予微血管密度(MVD)计数。(5)肿瘤组织细胞原位凋亡采用TUNEL法检测。(6)安全性监测抽血检测血常规,ALT,γ—GT,Cr,总胆固醇,甘油三脂等指标。(7)统计学分析。所有的数据采用均数±标准差的方式表示。肿瘤体积及MVD用方差分析、组间两两比较采用SNK-q检验;VEGF比较采用秩和检验。应用SPSS11.5软件包进行分析,以P<0.05为有统计学意义。 结果 1、4组实验兔VX2肝肿瘤存在。术前肿瘤体积在统计学上无显著性差异(P>0.05);介入治疗后10天、15天的各组之间肿瘤增长率均有显著性差异(P<0.05),LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤增长率最小,而LP组肿瘤增长率小于Ad-VEGFp-CDglyTK组,三个治疗组疗效均优于生理盐水对照组。 2、兔VX2肝移植癌组织总RNA中CDglyTK双自杀基因转染成功。PCR反应结果显示:用扩增CD、TK基因引物进行的PCR反应,出现CD、TK基因特征性的DNA条带。其片段大小为:CD片段:1.3kb;TK片段:1.1kb。 3、常规组织病理学改变提示:LP组及LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤多为大面积坏死,肿瘤周边见一些残存的肿瘤组织。Ad-VEGFp-CDglyTK组与NS组肿瘤内可见斑片状坏死,周边可见转移灶。Ad-VEGFp-CDglyTK组与LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤组织切片中可见片状坏死区,而且这些区域可见大量炎性细胞浸润。 4、抗VEGF因子的表达:LP组最高,与其它三组相比有显著性差异(P<0.05),其它三组之间未见显著性差异。MVD表达:LP组最高,LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组最低,与其它各组相比有显著性差异(P<0.05),而Ad-VEGFp-CDglyTK组MVD表达也低于NS组,有显著性差异(P<0.05)。 5、肿瘤组织细胞原位凋亡提示:镜下可见细胞凋亡可大片发生。肝癌细胞均出现凋亡表现:细胞体积明显缩小,核呈蓝紫色,断裂为多个碎块状,核仁无,碎裂的核由膜包裹着,有者凸起于细胞表面,呈蓝紫色凋亡小体。LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组最高,与其它各组相比有显著性差异(P<0.05)。 6、存活期:LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组(53.0±3.0)d与其他组(46.0±2.5)d,(47.5±3.0)d相比有差异(P<0.05)。 7、血清AST、ALT、Cr水平及全血细胞计数:LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组治疗前后变化与其他组相比无差异(P>0.05),与对照组相比有差异(P<0.05)。4组验血结果未见显著性差异。 8、治疗后实验兔重要脏器的组织学观察:为了解该综合疗法对荷瘤兔有无毒副作用,取治疗组荷瘤兔心、脑、肾等重要脏器行常规病理检查未见明显异常。 结论 1、经肝动脉介导方式,是Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油治疗兔VX2肝移植癌理想的给药方法及途径。 2、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射GCV+5-FC,对兔VX2肝移植癌有确切的杀伤作用。 3、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射GCV+5-FC,与单纯超液化碘油栓塞以及单纯灌注Ad-VEGFp-CDglyTK、术后腹腔注射GCV+5-FC相比,对兔VX2肝移植癌有增强治疗效果的作用。 4、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射GCV+5-FC,对兔VX2肝移植癌的治疗具有比较安全的优点。 5、介入疗法可以为自杀基因药物治疗肝癌提供理想的给药方法及途径。 6、双自杀基因与碘油混合使用,可以提高自杀基因在肿瘤组织内的转染选择性,可以克服传统化疗性栓塞远期效果不理想的缺点,增强治疗效果。 7、该综合疗法可以作为治疗人类肝癌一种新型、可行而有效的方法。
【学位授予单位】:第一军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R735.7

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 柳云帆;吴小兵;阮力;;腺病毒载体在疫苗研究中的应用[J];生物技术通讯;2011年04期
2 卢建溪;阳莉;钱师宇;王强;;携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建[J];中国微生态学杂志;2011年08期
3 徐远玲;张旭东;马宏宝;;腺病毒载体左侧反向末端重复区对下游基因表达特异性的影响[J];郑州大学学报(医学版);2011年04期
4 林茂海;苏津自;蔡文钦;郑礼裕;许昌声;王华军;;携带肾上腺髓质素基因腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年23期
5 林峰;苗北平;卢永田;;重组adv5.oriP.HRP腺病毒载体构建及对EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株的靶向表达[J];数理医药学杂志;2011年03期
6 冷加燕;许文林;沈慧玲;龙璐璐;吴晓君;陈巧云;姚俊;;YB-1腺病毒载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响[J];江苏大学学报(医学版);2011年04期
7 王荥;王延洲;徐惠成;;deltex-1腺病毒载体的构建及其在大鼠bMSCs中的表达[J];第三军医大学学报;2011年15期
8 应希;王一;;αA晶状体蛋白重组腺病毒载体的构建和鉴定[J];眼科新进展;2011年09期
9 孟希亭;林晨;梅佳;王海娟;马飞;张金龙;张颖;钱海利;;活体成像系统检测携荧光素酶增殖缺陷型腺病毒在小鼠体内的表达和分布[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年04期
10 钟声;刘丹平;刘素伟;李晓禹;李谌;李媛;;血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晋慧;姚明忠;顾锦法;孙兰英;郎明非;刘菁;刘新垣;;肿瘤靶向性腺病毒载体的构建[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 刘旭;田长富;;癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅱ)[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
3 凌昌全;李绍祥;张晨;张亚妮;;携蜂毒素基因腺病毒载体的构建及体外抑瘤实验研究[A];第九届全国中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2002年
4 马立新;马琪;徐松;;新型、简捷、有效的方法构建基于腺病毒载体系统的cDNA表达文库[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
5 王桂兰;鲁继荣;成焕吉;马青山;张云峰;;高滴度含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒的包装和浓缩[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
6 吴运谱;张晓华;乔传玲;;腺病毒载体流感疫苗研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 刘金娟;马翔;;小鼠HSP27基因腺病毒表达载体的构建与鉴定[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
8 刘潇聪;陈耀凯;;腺病毒体外介导CTLA4-Ig在L02细胞中的表达及其生物学活性[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
9 张春燕;李方和;龚劲松;陈妍;;抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
10 张子阳;袁春玉;杨亦彬;;人促血管生成素1腺病毒载体的构建[A];贵州省医学会肾脏病学分会2008年学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 李天舒 通讯员 朱丹萍;一研究证实腺病毒载体依然是安全的[N];健康报;2011年
2 本报记者 刘松柏;基因治疗的探路者[N];经济日报;2010年
3 火言;疫苗研发全球赛跑[N];中国质量报;2003年
4 万同己;P53基因与肿瘤基因治疗[N];中国医药报;2004年
5 麦迪信;糖尿病基因疗法初见成效[N];医药经济报;2003年
6 加闻;加拿大非典疫苗研究获新进展[N];医药经济报;2003年
7 翁维良:中国中医研究院首席研究员,中国中西医结合学会活血化瘀学会副主任委员,内科主任医师,博士生导师;心血管病基因疗法[N];中国中医药报;2000年
8 记者 毛磊;肌营养不良基因法可疗[N];新华每日电讯;2002年
9 王俊鸣;接种疫苗的猴子产生免疫反应[N];科技日报;2003年
10 记者 王雪飞;支架+转基因可减少心脏介入术后血管再狭窄[N];健康报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈德基;靶向性VEGF启动子介导CD/TK双自杀基因重组腺病毒混合碘油治疗兔VX2肝癌的实验研究[D];第一军医大学;2007年
2 扈江伟;腺病毒介导hTRX修饰的间充质干细胞在小鼠急性放射损伤中的修复作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
3 张燕玲;脑源性神经生长因子前体ProBDNF在大鼠后足切割痛的作用及可能机制研究[D];中南大学;2012年
4 吴成君;Ad35腺病毒载体构建及病毒蛋白免疫原性研究[D];北京协和医学院;2009年
5 于彬;六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体逃避预存免疫的研究[D];吉林大学;2012年
6 席启林;维生素D受体调控尿钙重吸收的分子机制研究[D];华中科技大学;2010年
7 徐尤年;血管生成素1腺病毒载体的构建及其对内毒素性肺损伤炎症消退的影响[D];华中科技大学;2010年
8 陈剑;BMP2和BMP7基因共转染兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的实验研究[D];第二军医大学;2011年
9 王鹏;表达His-tag-ICP47融合基因腺病毒载体的构建及其免疫活性的研究[D];郑州大学;2011年
10 刁彦鹏;腺病毒载体介导转染CD基因抑制大鼠移植静脉内膜增生及其机制的实验研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈媛媛;hIL-12腺病毒载体的构建及在人hBMSCs中的表达[D];山西医科大学;2010年
2 宋默;携带p53基因和Flt3L配体基因的腺病毒载体的构建及鉴定[D];大连医科大学;2010年
3 宋付凯;高表达hRAMP1基因腺病毒载体的构建及其在兔MSCs中表达的实验研究[D];遵义医学院;2010年
4 刘海斌;腺病毒介导的mda-7/IL-24基因对人喉癌细胞Hep-2的凋亡作用[D];第二军医大学;2010年
5 魏菁;腺病毒介导ChM-I基因抑制BMSCs体内构建的软骨血管化的实验研究[D];西北大学;2010年
6 刘海平;非增殖性腺病毒携带全长抗体Cetuximab的肿瘤基因治疗的研究[D];浙江理工大学;2010年
7 苏秀云;应用AdEasy腺病毒载体系统构建携带人骨形成蛋白2基因的重组腺病毒[D];第一军医大学;2005年
8 毛亮;选择增殖型腺病毒ZD55携带自杀基因Dm-dNK(果蝇脱氧核糖核苷酸激酶)治疗大肠癌的研究[D];中国医科大学;2010年
9 王晓刚;人白细胞介素23基因克隆和携带EGFP腺病毒载体的构建与鉴定[D];大连医科大学;2007年
10 陈童;构建降钙素基因相关肽的穿梭载体[D];浙江大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026