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《南方医科大学》 2007年
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愤怒应激对大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响及中药干预作用的实验研究

许丽  
【摘要】: 课题背景: 怒是七情之一,它具有双刃剑的作用,在正常的情况下,它是人体的精神状态对客观事物的应激反映,但突然、强烈或长期持久的精神刺激,或是脏腑功能失调,气机逆乱,阴阳气血失衡,才会导致疾病的发生,如《灵枢·寿夭刚柔》云:“忧恐忿怒伤气,气伤脏,乃病证。”指出:凡忧恐忿怒等情志变化,首先损伤人体的气机,引起气机的紊乱进而使五脏受病,所以怒在临床中是造成内伤杂病的致病因素之一。 现代医学认为,大脑的边缘系统以海马、下丘脑、杏仁体为情绪形成和调节的中心,维持内环境的自稳态,它主要通过下丘脑-脑干-自主神经系统来调控内环境。《素问·阴阳应象大论》指出:“怒伤肝。”中医认为,肝主升、主动,在志为怒,故而怒与肝联系紧密。从肝的现代生理病理学研究成果看,肝的生理功能和病理变化涉及人体多个系统,有研究表明:中医所论肝病证候,多出现神经、内分泌和免疫系统的功能改变,如肝郁时,去甲肾上腺素、肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺等中枢神经递质、皮肤电位,血中儿茶酚胺等激素,肾上腺的组织结构以及CD4+/CD8+等免疫系统多项指标均发生改变,并多有交感神经偏亢。这提示中医所说的肝的功能与西医学的神经—内分泌—免疫网络密切相关。由此,肝之“主疏泄”,其中枢神经生物学机制在整体上可能与调节下丘脑—垂体—肾上腺轴有关。 本课题根据中医七情理论,参照Megan方法方法建立中医愤怒应激动物模型,力求将躯体刺激减少到极小,在病因上力求符合中医情志内伤的原则,记录并分析大鼠行为变化,评价模型质量。采用高效液相色谱—电化学检测分析具有愤怒情绪应激表现的大鼠单胺类递质E、NE、DA、5-HT及其代谢产物的含量,并探讨中药天麻钩藤饮对下丘脑单胺类递质的调节作用。分析单胺类神经递质及其代谢产物在HPA调节中的相互作用和关系,寻求最有显著差异的客观指标,为探索愤怒应激中枢变化机制和中药防治心身疾病提供实验依据。 实验方法: 1.参照Megan等方法建立愤怒动物模型,雄性Wistar大鼠32只,随机分为三组:正常对照组、愤怒模型组和孤独饲养组,每组8只,另设入侵组。愤怒模型组大鼠均单独饲养于不锈钢笼中(50×30×20cm),自由饮食饮水。制造昼夜颠倒环境,每晚24:00开灯,中午12:00关灯。孤独饲养10天后开始实验。第11天13:30-15:30进行实验,该时间段内大鼠处于夜间兴奋状态。在每只模型组大鼠笼内放进1只入侵鼠,开始计时、摄像。前5分钟为双方适应期,记录第6-20分钟内大鼠行为变化。第21分钟将模型组大鼠从笼中取出,立即放入旷场实验箱内,进行应激后行为学检测。 同样环境下,正常对照组大鼠予以群居饲养,自由饮食饮水,第11天进行行为学测定及旷场实验;孤独饲养组大鼠均孤独饲养10天,第11天15:00不给予愤怒刺激,记录大鼠行为变化,并对进行评分,15:30放入旷场实验箱内,进行应激后行为学检测。入侵组大鼠予以群居饲养,于实验前2天禁食,不禁水。 2.雄性Wistar大鼠,体重180-220g,随机分为三组:正常对照组、愤怒模型组和给药模型组,每组8只,另设入侵组8只。愤怒模型组造模方法同前,模型给药组于实验前3天天麻钩藤饮浓缩液灌胃,每日1次,每次2ml,连续给药3天。正常对照动物组大鼠群居饲养,自由饮食饮水10天,不予任何刺激。实验第11天,所有动物麻醉,断头处死,取出下丘脑,匀浆,离心,通过高效液相色谱系统(HPLC)加电化学检测器(ECD)检测单胺类递质及代谢产物含量。统计方法:采用SPSS10.0软件分析。均用(?)±s表示,利用Pearson相关分析旷场两变量之间的关系,采用单因素方差分析方法(One-Way-ANOVA)进行多样本均数比较,用Least-significant difference(LSD)方法和Dunnett方法进行两两比较,P<0.05被认为有显著性差异。 主要结果: 一、愤怒情绪动物模型的制作与评价 采用Megan E.方法造模,记录并分析大鼠行为变化,评价模型质量。 (1)模型组大鼠行为得分(Score)平均水平为65.88,各行为学指标的分布水平:搏斗次数>威吓次数>攀压次数>胜利次数>失败次数。各指标与总分做Spearman相关分析,结果发现搏斗次数、威吓次数、攀压次数与总分呈显著正相关关系(p<0.05)。 (2)愤怒模型组大鼠旷场实验行为学得分各组大鼠旷场行为水平得分、垂直得分、旷场实验得分均有显著差异(P<0.01)。水平得分、垂直得分、旷场实验得分F值分别为215.291、90.361、527.347;P值均为0.000。愤怒模型组得分高于孤独饲养组和正常对照组(P<0.01)。对垂直得分及水平得分进行Pearson相关分析,Pearson相关系数r=0.876,P=0.000(双侧),认为水平得分与垂直得分之间存在正相关关系。 (3)愤怒模型组大鼠旷场实验得分各组大鼠中央格停留时间、修饰次数、修饰时间、粪便粒数均有显著差异(P<0.01),中央格停留时间、修饰次数、修饰时间、粪便粒数F值分别为249.371、15.782、327.9.0、49.852;P值均为0.000。与正常对照组比较,愤怒模型组中央格停留时间长于正常对照组(P<0.01),修饰时间短于正常对照组(P<0.01),粪便粒数多于正常对照组和孤独组(P<0.01),修饰次数则与正常对照组差异不显著(P>0.05)。修饰次数与修饰时间的Pearson相关系数r=0.665,P=0.000(双侧),认为修饰次数与修饰时间之间存在正相关关系:旷场实验总分与粪便粒数的Pearson相关系数r=0.564,P=0.004(双侧),认为旷场实验总分与粪便粒数之间存在正相关关系。 二、愤怒应激对大鼠下丘脑单胺类递质及其代谢产物的影响及天麻钩藤饮对其调节作用 与正常对照组比较,模型组大鼠下丘脑NE、DA的含量升高,P值均为0.000,有显著差异(p<0.01);与正常对照组比较,模型组大鼠代谢产物5-HIAA的含量也升高,P值为0.000,有显著差异(p<0.01)。 与模型组比较,给药组大鼠下丘脑NE和DA的含量降低,P值均为0.000,有显著差异(p<0.01),5-HT则升高,P值为0.015,有显著差异(p<0.05);与模型组比较,给药组大鼠代谢产物DOPAC、5-HIAA的含量降低,P值分别为0.040、0.027,有显著差异(p<0.05):MHPG、HVA的含量差异则不显著(P>0.05)。 结论: 一、该模型是理想的愤怒心理应激模型,模型评估方法可行性较好。 二、大鼠受到愤怒刺激后,其下丘脑单胺类神经递质以NE、DA的含量及代谢产物5-HIAA的含量升高。 三、中药复方天麻钩藤饮可使大鼠下丘脑单胺类神经递质NE、DA及其代谢产物DOPAC、5-HIAA的含量减少,并能升高5-HT的含量。 四、愤怒心理应激激活丘脑-垂体-肾上腺皮质轴兴奋,引起单胺类神经递质及其代谢产物的紊乱;天麻钩藤饮对大鼠受愤怒应激后所致下丘脑单胺类神经递质及其代谢产物的紊乱具有一定的调节作用。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

【引证文献】
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