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《南方医科大学》 2008年
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1-磷酸鞘氨醇在烧伤诱导的高血管通透性中的作用

刘湘兰  
【摘要】: 目的: 烧伤后血管通透性升高是引起低血容量性休克和多器官功能衰竭的重要原因,因此有效防治血管通透性的升高是烧伤治疗中的关键。由于血管通透性升高的机制还未阐明,目前尚未找到防治血管通透性升高和减少烧伤补液的有效措施,探寻血管通透性升高的机制及寻找一种新的降低血管通透性的药物显得非常重要。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)来源于细胞膜鞘磷脂的分解代谢,是血浆的一个重要组成成分,主要由血小板贮存分泌。目前已证明1-磷酸鞘氨醇是内源性血管内皮细胞屏障功能保护因子之一,但对烧伤后内皮屏障功能的影响未有报导。本研究拟应用显微外科技术、荧光比例技术、激光共聚焦显微镜成像技术和细胞免疫组化等方法,从整体、组织和细胞三个层次研究1-磷酸鞘氨醇对烧伤后高血管通透性的作用,为临床烧伤治疗提供新的思路。 方法: 1.烧伤模型的制备 符合国家实验动物标准的SPF级BABL/c雄性小鼠30只,6~8周龄,18~22 g,背部剪毛约30%体表面积,8%硫化钠水溶液脱去残留毛,保鲜袋内装92℃水,袋外温度为90℃,假烧伤组保鲜袋内为37℃水,使其充分接触脱毛处9秒,至Ⅱ~Ⅲ烫伤,烫伤后立即通过肌肉注射给予每只小鼠生理盐水1ml(假烧伤组不予补液)。 2.实验动物分组 实验所用的主要S1P代谢制剂为两种:S1P和抑制S1P生成的N,N′-二甲基鞘氨醇(N,N-Dimethylsphingosine,DMS)。整体、组织和细胞水平三个层次实验分组均如下:符合国家实验动物标准的SPF级BABL/c雄性小鼠30只,6~8周龄,18~22 g或SPF级Wistar雄性大鼠30只,三月龄,体重160~200 g,均由南方医科大学实验动物中心提供。动物随机分成6组,每组5只:①假烧伤组;②假烧伤+S1P组;③假烧伤+DMS组;④烧伤组:⑤S1P+烧伤组:⑥烧伤+S1P组。 3.在体肠系膜微静脉通透性的观察 剖腹寻找合适的肠系膜微静脉(直径10~50μm,血管周围无脂肪细胞包裹),正置荧光显微镜、实验室分析软件NIS-Element BR连续观察分析血管内荧光物质渗出情况。血管内的荧光密度值(Ii)和血管外渗出的荧光密度值(Io)分别由软件测定,血管通透性由Ii和Io的比率决定,表示为Pa,其Pa值越大表示通透性越高。观察时间为烧伤后20~50 min。 4.游离微静脉的插管、灌流和通透性测定 利用特制的玻璃套管对游离的单根皮肤微静脉两端插管,模拟体内循环状态进行血清和药物的灌注。用图像分析软件Imaging Workbench2计算一定时间内血管内外荧光强度,其比值的变化速率由通透系数Pa表示,Pa值越大表示通透性越高。 5.激光扫描共聚焦显微镜观测肠系膜微静脉内皮细胞的F-actin免疫荧光染色。 6.激光扫描共聚焦显微镜观测人脐静脉内皮细胞F-actin和VE-cadherin的双重免疫荧光染色。 结果: 1.整体水平 (1)烧伤模型在补液后6 h的血压与假烧伤组没有显著差异。 (2)增加假烧伤组小鼠体内的S1P浓度(假烧伤+S1P组)其Pa值与单纯假烧伤组在各时间点比较没有显著性差异,而给予DMS抑制S1P生成后(假烧伤+DMS组),与单纯假烧伤组比较血管外荧光物质渗出增加,Pa值在50 min时为0.82±0.07,显著高于假烧伤组0.66±0.12(P0.05)。 (3)烧伤后血管通透性明显升高,荧光显微镜下观察可见血管周边大量渗出的荧光物质,随时间延长明显增多。烧伤后25 min Pa值为0.74±0.07,50min Pa值为0.91±0.07,均显著高于假烧伤组(P0.01)。 (4)烧伤前30 min给予S1P(S1P+烧伤组),烧伤后25~50 min可见血管周围仅有少量荧光物质渗出,其Pa值在烧伤50分钟时为0.66±0.10,与单纯烧伤组比较显著降低(P0.01);与假烧伤组没有显著性差异。烧伤后给予S1P(烧伤+S1P组),血管周围仍见大量荧光物质渗出,其Pa值与假烧伤组比较仍显著升高(P0.05)。 2.组织水平 (1)正常血清灌流时游离微静脉的Pa值为0.85±0.53,给予S1P灌流30 min后Pa值与正常组比较无显著性差异,而给予DMS抑制S1P后Pa值升高,为2.84±0.19,与正常组比较显著升高(P0.05)。烧伤血清灌流可引起单根游离微静脉通透性升高,Pa值为2.54±0.46,与正常组比较显著升高(P0.05),预给予S1P灌流或后给予S1P治疗均可抑制烧伤血清诱导的高血管通透性,Pa值分别为0.73±0.26、0.76±0.19,与正常组没有显著性差异,而与烧伤组比较均有显著性差异(P0.05)。 (2)激光扫描共聚焦显微镜观测结果示:在假烧伤组肠系膜微静脉的内皮细胞骨架蛋白F-actin主要分布在细胞周边,线条完整连续,界线清晰,整根血管显示出内皮细胞网络状结构;假烧伤后给予S1P同样可见整根血管显示纵形的内皮细胞形态;而给予DMS抑制S1P生成后血管内皮细胞形态不再完整,细胞骨架网络状结构离散;烧伤后血管内皮细胞形态变得模糊难辨;预防性先给予S1P可抑制烧伤后的内皮细胞形态学改变,可见完整的内皮细胞骨架,线条完整清晰,与假烧伤组形态一致;烧伤后再给予S1P治疗无法完全逆转烧伤诱导的内皮细胞F-actin形态改变,血管只显示残留断裂的F-actin。 3.细胞水平 (1)S1P对内皮细胞F-actin和VE-cadherin形态学影响的剂量效应:随S1P浓度增大(0.5μmol/L~1μmol/L),F-actin外周致密带变清晰,荧光强度增强,VE-cadherin具有与F-actin相似的变化;当S1P的浓度为10μmol/L时F-actin外周致密带变得粗糙不规则,VE-cadherin出现锯齿样断裂。 (2)烧伤血清对内皮细胞F-actin和VE-cadherin形态学影响的时间效应:随着刺激时间延长,细胞内应力纤维明显增多,外周致密带越来越模糊,至6 h已无法辨清细胞形态;VE-cadherin由细胞周边向胞浆弥散越来越明显,至6 h细胞周边的VE-cadherin网络结构消失,出现分布内化现象。 (3) S1P对烧伤血清引起内皮细胞F-actin和VE-cadherin形态学改变的作用:正常内皮细胞中F-actin和VE-cadherin二者重叠分布于细胞周边,形成外周致密带;S1P刺激后二者外周致密带变得更加光滑,线条清晰连续;而给予DMS刺激后F-actin外周致密带发生断裂,细胞骨架难辨,VE-cadherin发生类似变化;烧伤血清刺激后内皮细胞可见大量应力纤维形成,VE-cadherin发生断裂;预防性给予S1P可抑制此改变,与正常内皮细胞分布类似;先用烧伤血清刺激再给予S1P可逆转内皮细胞F-actin和VE-cadherin的形态改变,与正常内皮细胞分布类似。 结论: 1.在整体水平,S1P对正常血管通透性起保护作用;烧伤可导致血管通透性升高;S1P在整体水平上可预防烧伤后血管通透性的升高。 2.在组织水平,S1P可维持微静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin的正常形态;烧伤导致微静脉内皮细胞F-actin外周致密带断裂,引起血管通透性升高;S1P可预防和逆转烧伤后单根游离微静脉通透性的升高。 3.在细胞水平,1-磷酸鞘氨醇促使内皮细胞骨架蛋白F-actin和粘附连接蛋白VE-cadherin在细胞周边的分布,在一定浓度范围内成剂量效应(0.5μmol/L~μmol/L),而浓度为10μmol/L时则导致应力纤维形成和VE-cadherin内化;烧伤血清诱导内皮细胞F-actin重排和粘附连接蛋白VE-cadherin内化,在30 min~6 h呈时间效应;1-磷酸鞘氨醇可预防和逆转烧伤诱导的内皮细胞F-actin和VE-cadherin的重排和内化。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R644

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 汪心婷;赵仲堂;;中国烧伤现状[J];预防医学论坛;2006年05期
2 赵克森,黄巧冰;血管通透性增高的基本机制[J];中国病理生理杂志;2003年04期
3 王正国;全球烧伤近况——来自世界卫生组织的报告[J];中华烧伤杂志;2001年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陆瑞敏;方朝晖;;益气养阴活血法对新诊断2型糖尿病患者血管内皮钙黏蛋白水平的影响[J];中医药临床杂志;2012年02期
2 姜雄;周洋;张朝贵;;153例重度胸部创伤伴休克的临床分析[J];重庆医学;2010年14期
3 陈洁;姜虹;朱也森;;血必净对内毒素休克大鼠心肌TNF-α变化的影响[J];中国医药导刊;2009年06期
4 赵明月;黄跃生;张琼;王广;阮兢;雷泽源;褚志刚;向飞;;缓激肽B1受体在严重烫伤大鼠内脏血管通透性变化中的作用[J];第三军医大学学报;2008年04期
5 冯浩淼,黄宗海,黄绪亮,宋慧娟,孙英刚,林洪武;大鼠创伤性休克后血清一氧化氮的动态变化及其机制[J];第一军医大学学报;2002年10期
6 孙高斌,黄宗海,孙英刚,杨文宇;一氧化氮合酶抑制剂对大鼠创伤性休克的干预作用[J];第一军医大学学报;2003年04期
7 张丽华,贾钰华,孙学刚,邢飞跃,刘志锋,宋革,姜勇;三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性[J];第一军医大学学报;2004年10期
8 江爱达,余林中,龚小卫,邓鹏,马晓冬;凉膈散药物血清对脂多糖诱导体外培养巨噬细胞核转录因子-кB的影响[J];第一军医大学学报;2005年06期
9 赵清;赵克森;;钙通道激动剂Bay k 8644对重症失血性休克大鼠细动脉平滑肌细胞膜电位的作用[J];南方医科大学学报;2006年04期
10 李正功;李涛平;叶红;冯媛;李丹青;;阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者免疫功能研究[J];南方医科大学学报;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 金文扬;孙伟;;EPO/EPO受体调控系统在LPS诱导心肌损伤时的作用的实验研究[A];《中华急诊医学杂志》第九届组稿会暨第二届急诊医学青年论坛全国急危重症与救援医学学习班论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙学刚;LPS受体介导的细胞激活的信号机制研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 郑惠珍;Rho激酶在烧伤诱导的内皮屏障功能损害中的作用[D];第一军医大学;2004年
3 周学武;大鼠羊水栓塞后类胰蛋白酶、补体C3、C4、核因子-κB的变化及地塞米松干预的研究[D];中国医科大学;2005年
4 陈世文;高渗盐复合液治疗大鼠冷冻性脑损伤及合并休克的研究[D];第二军医大学;2005年
5 张鸿;异氟醚和异丙酚后处理对内毒素血症大鼠肺泡毛细血管屏障功能影响的实验研究[D];复旦大学;2005年
6 陈柏成;体外循环瓣膜置换术后ALI/ARDS的临床研究[D];第三军医大学;2005年
7 郑丰杰;从Toll样受体通路探讨加味桔梗汤治疗内毒素致急性肺损伤的作用机制[D];北京中医药大学;2007年
8 陈腾祥;内毒素休克小鼠肝脏核蛋白质组学研究[D];第一军医大学;2007年
9 刘刊;SC5b-9介导肺微血管内皮通透性障碍及其机制[D];第二军医大学;2007年
10 温克;超氧阴离子及过氧化氢对在体大鼠肠系膜微血管通透性的作用[D];天津医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张红;鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及对雏鸭致病性观察[D];华中农业大学;2010年
2 张川荛;后适应对树鼩血栓性脑缺血时神经保护效应的比较研究[D];昆明医学院;2011年
3 田虹;TNF-α基因多态性与脓毒症的相关性研究[D];天津医科大学;2011年
4 闫婷婷;乳糖衍生物Gu-4对内毒素休克小鼠的治疗效应及其机理研究[D];南京师范大学;2011年
5 莫镜;Rho-ROCK信号通路介导缺氧所致人肺微血管内皮细胞肌动蛋白细胞骨架重构和重组人白介素10对缺氧条件下人肺微血管内皮细胞凋亡变化规律的影响[D];广州医学院;2011年
6 高广荣;低温复苏对失血性休克大鼠肺组织PPAR-γ及相关基因表达的影响[D];大连医科大学;2011年
7 高洁;NF-κB信号通路在张应力介导的成纤维细胞凋亡中的作用[D];青岛大学;2011年
8 李正功;阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者免疫功能的研究[D];南方医科大学;2011年
9 冯浩淼;创伤性休克时一氧化氮变化及相关治疗研究[D];第一军医大学;2002年
10 袁静;IκB激酶在失血性休克继发急性肺损伤中的作用及山茛菪碱的干预研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 查林,张伟,陈晓明,陈令智,罗卫东,符英华,刘丙旭;长途铁路旅客意外伤害发生现况及危险因素分析[J];疾病控制杂志;2001年03期
2 尚磊,徐勇勇,江逊;儿童意外伤害住院的情况调查[J];疾病控制杂志;2001年03期
3 尹婧;皮肤烧伤的流行病学现况[J];疾病控制杂志;2001年03期
4 杨巧红,王声湧,马绍斌;1994~2003年我国火灾的流行病学分析[J];疾病控制杂志;2004年06期
5 葛相金,唐国华,李善举,张梅烈,黄一峰,姜玉亭;高密市农村居民伤害流行病学调查报告[J];疾病控制杂志;2004年06期
6 艾银海,吴拥军,熊美华,王庆波,涂世艳;抗洪官兵伤害流行病学调查[J];疾病控制杂志;2005年01期
7 王永武,陈存富,原峰,姜文荃,张志华;756例特殊原因烧伤,致伤原因与病人职业特点分析[J];中国烧伤创疡杂志;1996年02期
8 向大伟,王兴泰,姚亚军,冯捷,王晨辉;2294名军人伤害住院情况分析[J];西北国防医学杂志;2005年01期
9 张青献,张世英,梁红英,宁豪丁,朱浴晖,李学云,张雪;深圳市居民伤害流行特征和疾病负担调查[J];中华流行病学杂志;2001年04期
10 黄淳,赵建华,孟宁,刘明智,黎唏,闫力群,肖彤;宁夏回、汉族中小学生伤害的流行病学特征分析[J];中华流行病学杂志;2001年04期
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