收藏本站
《南方医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

SH2B1β基因的克隆表达、单抗制备与鉴定

邱国真  
【摘要】: 目前,肥胖迅速向全球蔓延,已经波及到人们概念中该问题并不严重的东南亚地区。因此,肥胖已成为当今全球医学上越来越严重的问题。当人们的体重大大超过推荐的指标就可以确诊为肥胖症,随着肥胖患病率的增高,与肥胖相关的其他慢性非传染性疾病,如糖尿病、代谢综合征、高血压、心脑血管疾病、睡眠障碍、哮喘、肿瘤等的患病率也呈明显上升的趋势。根据流行病学统计,肥胖发生率的增加与成年人群死亡率的增加呈高度相关。近年来的研究表明,肥胖是由特定的生化因子引起的一系列进食调控和能量代谢紊乱而导致的疾病,与遗传、环境、基因、膳食结构有关,而基因是主要的决定因素。从宏观的水平上看,食物摄入增加、体力活动减少和生热机制的改变导致了脂肪的过多堆积;但从微观水平上分析,成熟脂肪细胞的增多是脂质发生累积的关键因素。肥胖已经不仅仅是影响人体形象美观的问题,还是威胁人类健康的问题。被列为世界上第六位的影响全人类疾病负担的危险因素。 1950年,Ingalls等发现一个基因的阴性突变可以导致肥胖,他将该基因称为肥胖基因(obese gene,ob gene),第一次出现了ob基因的概念。Coleman等用交叉灌流实验证明,某种血源性因子能调节动物摄食、代谢、参与肥胖形成,且这种因子的产生与ob基因有关。1991年Friedman描述了五种可以使小鼠形成肥胖的单基因突变,分别是obese(ob)、diabetes(db)、fat(fa)、tubby(tub)和obese yellow(A~y),为研究肥胖的分子机制奠定了基础。1994年Zhang等利用突变基因的定位克隆技术克隆了小鼠和人的ob基因,同时发现ob基因的突变可以导致肥胖,使肥胖研究真正进入分子时代。 瘦素蛋白(Leptin)是ob基因的产物,是由白色脂肪细胞分泌的一种有167个氨基酸残基组成的蛋白质。它除了通过作用于下丘脑特异性受体发挥抑制饮食、减少能量摄入、减轻体重和增加能量消耗的作用外,同时还通过其它组织器官上的受体(胰岛、肝脏、性腺、肾上腺、甲状腺等)在体内共同形成一个复杂的网络作用系统,影响着机体许多生理系统和代谢通路。瘦素蛋白的外周作用还包括调节糖代谢的平衡、促进脂肪分解、抑制脂肪合成、参与免疫调节功能和促进生长发育等。经过长期的研究,人们对瘦素蛋白的生物学作用已经有更进一步的认识:瘦素蛋白在能量代谢调节中并不是一个孤立的激素,而是与许多神经肽、神经递质、激素及其它因子协同发挥作用;在人群中存在有不可忽视的“瘦素抵抗”现象等。这些都是致力把瘦素蛋白单独用作为治疗肥胖症药物的研究者今后需要解决的问题。 随着研究的深入,研究者发现SH2B1β蛋白能与瘦素激活的细胞信号蛋白JAK2(非受体酪氨酸激酶)相互作用,调节能量代谢和体重。SH2B1β是SH2B信号接头蛋白家族中的一员,其结构上有SH2结构域,可以结合磷酸化的酪氨酸残基,进而连接不同的信号蛋白,发挥其衔接信号及强化信号通路的作用。SH2B1β广泛分布于下丘脑、肝脏、胰脏、脂肪组织等组织中,参与胰岛素敏感性和血糖平衡的调节以及增强神经生长因子诱导的神经分化。由于SH2B1β是Leptin/JAK2信号通路活化所必需的,如果敲除小鼠的SH2B1β基因,将使小鼠的体重是同窝正常组小鼠的两倍,SH2B1β基因缺失导致严重的瘦素抵抗,食欲过盛和肥胖。SH2B1β通过自身结合JAK2同时募集胰岛素底物蛋白(IRS)结合JAK2复合体,以JAK2/STAT3和IRS2/PI3K两条路径来增强瘦素依赖的信号转导,因而SH2B1β是一种内源的瘦素敏感性增强剂,同时,SH2B1β的过表达还可以抵消蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)介导的瘦素抑制信号的作用。 目前有最新的文献报道指出,脂肪组织与神经组织中的SH2B1β在脂肪细胞的生长分化过程中产生两种相反的效应。虽然神经组织SH2B1β的负调节效应占优,但是脂肪组织SH2B1β是以一种细胞自主的方式来调节脂肪细胞的分化,并在3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中呈现表达量进行性增加,同时促进细胞中脂滴的累积以及脂肪分化转录因子PPARγ、C/EBPα的表达。 脂肪细胞数量的增多和体积的增大能导致肥胖,而前脂肪细胞分化的增加则是导致成熟脂肪细胞数量增多的主要原因,近年来脂肪细胞的分化调控已成为肥胖及其相关疾病的研究热点。人或动物的脂肪组织成份包括微血管、神经组织、成纤维细胞、脂肪细胞以及前脂肪细胞,脂肪细胞系的发育过程为多能干细胞—间充质干细胞—前脂肪细胞—成熟脂肪细胞,所以有效的调节前脂肪细胞的分化能控制脂肪组织增生、肥大。脂肪细胞分化与胰岛素和胰岛素样生长因子相关,胰岛素和胰岛素样生长因子通过结合其受体激活PI3K和MAPK两条信号转导通路,促进脂肪细胞的分化。SH2B1β作为一种胰岛素受体(IR)和胰岛素样生长因子受体(IGF-IR)活性的正调节蛋白,参与调控脂肪细胞分化的信号通路。 目前有关脂肪组织SH2B1β的研究很少,而且研究主要是针对鼠源蛋白。根据文献报道SH2B1β鼠源基因与人源基因的相似性达到85%-87%,本课题着眼于使用人源的SH2B1β基因在体外原核表达重组蛋白后,制备抗SH2B1β的单克隆抗体,通过定性及定量的方法初步探讨该人源蛋白在人源前脂肪细胞分化中的调控作用,为治疗与前脂肪细胞分化关系密切的肥胖及其并发症提供新的药物靶点。 由于脂肪干细胞是临界于间充质干细胞与前脂肪细胞时期之间的一种细胞状态,所以本研究通过体外原代培养脂肪干细胞(ADSC)并诱导其成脂分化,收集分化成熟的脂肪细胞后,用TRIZOL一步法提取细胞总RNA。运用RT-PCR方法成功扩增并克隆出SH2B1β基因片段,将所得的目的基因克隆至pET28a(+)表达载体,并在大肠杆菌中进行了大量可溶性表达。用饱和硫酸铵盐析法和DEAE阴离子交换法纯化重组蛋白,重组蛋白通过抗His-tag单抗鉴定后免疫小鼠制备单克隆抗体,分别用ELISA、Western-Blot法检测及鉴定单克隆抗体的特异性。 利用RT-PCR技术成功克隆了SH2B1β基因,其大小约为2000bp。经测序并与GenBank中序列进行比对,结果显示插入片段与已报道的SH2B1β基因序列配对一致,无移码突变,大小为2016bp。将编码基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,经PCR、限制性酶切分析等鉴定,证实成功构建了SH2B1β-pET28a(+)重组原核表达质粒。 经IPTG诱导后,重组质粒SH2B1β-pET28a(+)在大肠杆菌E.coli DE3中表达出His-tag融合重组蛋白,分子量约为80kDa,与理论值基本符合。表达产物主要以可溶性形式存在。经过纯化后,重组蛋白纯度可达80%以上。用抗His-tag单抗对表达产物进行Western-blot分析,可见特异性区带出现,表明该蛋白确实是所要表达的His-tag融合蛋白。进一步用纯化的表达产物免疫小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明重组蛋白能与该免疫血清起反应,而与正常小鼠血清不发生交叉反应,说明重组蛋白具有抗原活性。 将免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合后筛选到2株单抗分泌细胞。以纯化重组蛋白为抗原,用ELISA法检测单抗细胞株培养上清的效价,OD值分别为1.553~2.210。Western-blot结果显示:抗SH2B1β的2株单抗与人源脂肪组织内提取的天然蛋白发生特异性反应,而阴性对照组则无明显条带出现,说明制备的单抗均为特异性单抗。 以上结果表明,我们已经成功地构建了SH2B1β-pET28a(+)原核重组表达质粒,目前国内尚未见关于SH2B1β重组并表达的相关报道。而且在大肠杆菌中大量表达出具有免疫活性的可溶性重组蛋白SH2B1β;筛选并建立了2株分泌抗SH2B1β单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研究该蛋白的生物学功能、在脂肪细胞发育分化过程中所起的作用、对肥胖症潜在治疗价值的验证奠定基础。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R589.2;R346

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 亓玉民,尹鸿轸,陈远耀;处理杂交瘤细胞污染的有效方法[J];吉林大学学报(医学版);1989年01期
2 罗盛康,席菁乐;成人前脂肪细胞的原代培养[J];第一军医大学学报;2005年03期
3 鲍荣琦;调脂汤治疗高脂血症32例[J];南京中医药大学学报(自然科学版);2002年06期
4 解乃昌;肥胖模型及病态肥胖外科减肥治疗机理[J];陕西医学杂志;1996年03期
5 李斌,赵红艺,马晓冰,王晓军,钱文江;新法吸脂整形术──高频电场的应用,附百例临床报告[J];实用美容整形外科杂志;1999年03期
6 李博萍,潘竞锵,韩超;减肥中药及方剂的药理研究进展[J];中草药;1999年07期
7 许婕,陈志华,王骏,张宝马;扬州市农村人群体质指数分布和肥胖调查[J];中国公共卫生;2003年02期
8 梁柳娟,黄朝褆,张婉芬,林展云;社区成年人肥胖流行病学调查[J];现代预防医学;2003年06期
9 武阳丰,周北凡,陶寿淇,吴锡桂,杨军,李莹,赵连成,谢高强,我国人群心血管病发病趋势预测及21世纪预防策略研究协作组;我国中年人群超重率和肥胖率的现状及发展趋势[J];中华流行病学杂志;2002年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期
2 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
3 蒋超,卿晨,蒙凌华,丁健;灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡[J];癌症;1999年06期
4 田芳,李友军,陈主初,何春梅,邓燕飞,袁建辉,段朝军;染色体3p14.2区域一个与鼻咽癌呈负相关EST的鉴定[J];癌症;2000年02期
5 彭少华,吴德昌,李刚,项晓琼,楼铁柱,赵永良;Annexin Ⅰ在α粒子转化细胞及肺癌组织中高表达[J];癌症;2000年06期
6 彭少华,吴德昌,nic.bmi.ac.cn,李刚,项晓琼;Annexin Ⅰ基因转染对BEP2D细胞生长的影响[J];癌症;2000年07期
7 邓燕飞,田芳,杨新明,谢鼎华,何执鼎,卢永德,邵细芸,陈主初;鼻咽癌组织中FHIT基因异常表达的研究[J];癌症;2000年10期
8 田芳,陈主初,段朝军,何春梅,曾平耀,关勇军,潘乾,陈永恒,夏家辉;染色体3p14.2-14.3区域一个与鼻咽癌相关新基因的克隆[J];癌症;2000年11期
9 张洪涛,张春燕,杨秋格,杨学惠;银染mRNA差异显示方法的建立和二次扩增参数优化[J];癌症;2001年03期
10 范云霞,赵玫,黄常志,茆灿泉,杜菲,周纯;反义HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应[J];癌症;2001年07期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 杨泽;郑宏;于普林;史晓红;唐雷;高芳坤;;衰老、肥胖及其相关疾病[A];老年人才资源开发学术研讨论文集[C];2003年
2 王瑜;焦淑芳;庞星火;尹香君;时颖;谢瑾;;北京市居民肥胖流行现状及危险因素分析[A];中国营养学会公共营养分会第六届学术研讨会暨中国居民膳食与营养状况变迁论文集[C];2005年
3 窦娜;庄洁;陈佩杰;;成年男性BMI的变化对身体形态、机能及素质的影响[A];体质研究与健康促进论文集[C];2006年
4 许传莲;郑毅男;韩立坤;奥田拓道;;大黄柳叶黄酮类成分促进脂肪分解作用的研究[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 房红梅;拆方益肝康及药物血清对肝星状细胞活化增殖、胶原代谢及细胞因子影响的研究[D];河北医科大学;2004年
2 兰丽珍;逆转录病毒介导人胰岛素原突变基因转染肝细胞分泌成熟胰岛素的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
3 蔡大川;1、整体重组酵母活菌治疗性疫苗抗HBV实验研究  2、人脐带血来源树突状细胞抗HBV治疗实验研究[D];重庆医科大学;2004年
4 翟宝进;超声波逆转人肿瘤多药耐药的体内实验研究[D];重庆医科大学;2004年
5 王宁;精原干细胞途径建立hFIX转基因小鼠及Flt3配基乳腺生物反应器研究[D];复旦大学;2003年
6 郑斌;hhlim基因的表达调节及其与心肌细胞肥大发生之间的关系[D];河北医科大学;2003年
7 王昌源;多房棘球绦虫亚单位疫苗及DNA疫苗初步研究[D];重庆医科大学;2003年
8 雷撼;新型阳离子脂质体的合成及人β防御素2基因转染和表达的研究[D];第三军医大学;2003年
9 马晶波;红景天甙对黑素细胞生物学作用的研究及美白中草药筛选过程中一些问题的探讨[D];复旦大学;2003年
10 吴英松;恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆、表达、单抗制备及疟疾诊断研究[D];第一军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄力;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性[D];河北医科大学;2004年
2 王静;卡介菌基因组DNA的制备及其对支气管哮喘和肺纤维化防治作用的研究[D];河北医科大学;2004年
3 刘忠渊;利用毕赤酵母系统表达功能蛋白的研究[D];新疆大学;2004年
4 刘炯;宫颈癌染色体3p14杂合性缺失和微卫星不稳定性研究[D];江西医学院;2003年
5 赖相红;利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研究[D];新疆农业大学;2002年
6 刘岭;蜂毒素提取纯化方法与质量标准研究[D];第二军医大学;2002年
7 王继英;逆转录病毒表达载体的构建及其鸡输卵管生物反应器的制作[D];山东农业大学;2003年
8 牛国栋;甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的分子进化及功能研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
9 曹宏;抗对虾白斑综合症病毒单链抗体基因与葡萄糖氧化酶基因的融合及在酵母Pichia pastoris中表达[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
10 陈丹磊;腹腔镜可调节捆扎带胃减容术治疗病态肥胖症的临床分析[D];第二军医大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨军,陈澍禾,王静;去脂平降脂减肥作用的实验研究[J];安徽医学;1994年01期
2 王慧君,杜树发,翟凤英;社会经济地位对成年女性体重超重和肥胖的影响[J];国外医学.卫生学分册;2001年01期
3 封苏琴,郝超,沈洪兵,姜维平;肥胖与糖尿病、高血压关系的流行病学研究[J];江苏预防医学;2000年04期
4 何明,涂长春,樊华轩,傅克刚,黄起壬;富士减肥冲剂对肥胖模型动物的减肥作用[J];江西医学院学报;1995年03期
5 沈红;关于儿童单纯性肥胖有关问题探讨[J];上海预防医学杂志;2002年04期
6 娄玉方,张雅珍,谭馥梅;针刺在减肥中作用的临床研究[J];上海针灸杂志;2001年02期
7 刘凤斌;中医药治疗高脂血症的临床研究进展[J];上海中医药杂志;1999年12期
8 龚康敏,来平凡,郑源庞,李爱平;益脑方对小鼠脑及心、肝组织单胺类神经递质和微循环影响的实验研究[J];中国中医药科技;1998年01期
9 刘志诚,孙凤岷;肥胖症的针灸治疗[J];现代康复;2001年17期
10 赵进军,陈育尧,佟丽;肥胖症的中药治疗[J];现代康复;2001年17期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈善华;;用于诊断试验和亲和层析的单克隆抗体;抗体工程的初步阶段[J];国际生物制品学杂志;1983年03期
2 闫燕华;;分泌抗HTG(人甲状腺球蛋白)单克隆抗体的杂交瘤细胞系[J];现代免疫学;1985年03期
3 蒋性凡;周继文;黄翠英;任继明;杨守纯;;鼠单克隆抗HBc检测病人血清抗HBc应用的研究[J];现代免疫学;1985年03期
4 林漓;;用单克隆抗体成像法检测血管栓塞[J];国外医学情报;1985年02期
5 韩荣兴;人肝细胞癌单克隆抗体的制备及其应用[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年04期
6 白炎;用单克隆抗体来研究T细胞受体结构及激活途径(文献综述)[J];军事医学科学院院刊;1986年01期
7 Berndt MC;杜晓平;Berndt C;阮长耿;;免疫沉淀法鉴定抗人血小板单克隆抗体识别的抗原[J];苏州大学学报(医学版);1986年03期
8 江庆平;;抗体结合氨甲喋呤试治肿瘤[J];国外医学情报;1986年14期
9 刘尔翔;李文渌;刘宝丰;樊汝恭;毛映红;;三株抗恶性疟单克隆抗体(M26-32,F5-3F9,F5-4E9)的鉴定[J];生物工程学报;1986年01期
10 樊代明,张学庸,陈希陶,牟震先,胡家露,乔太东,陈宝军;抗胃癌人、鼠单克隆抗体系列的研制及其临床应用的综合研究[J];细胞与分子免疫学杂志;1987年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
3 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
4 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
5 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
6 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年
2 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年
3 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年
4 郑杰;分泌抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年
5 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年
6 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年
7 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年
8 贾娟娟;抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年
9 李彬;TLR4单克隆抗体诱导同种心脏移植免疫耐受的研究[D];苏州大学;2010年
10 王雨晨;伏马毒素B_1单克隆抗体的制备及多种免疫学检测方法的建立[D];上海交通大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026