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《南方医科大学》 2010年
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人全血细胞因子在免疫抑制状态评估中的应用

何懿  
【摘要】: 背景 器官移植术后病人和自身免疫性疾病患者都常规使用免疫抑制剂治疗,同时相当一部分肿瘤患者需要接受放疗或者化疗。这些治疗方案对患者的免疫系统有很强的抑制作用,这就不可避免的带来了一个重要问题:如何合理使用免疫抑制剂、制定放疗或化疗方案?一方面如果免疫抑制剂使用不足可能导致移植器官的排斥,或者自身免疫性疾病加重;另一方面如果免疫抑制剂使用过度或者放疗、化疗过量,使患者免疫系统功能被过度抑制,则可能引发严重的感染。目前,器官移植术后和自身免疫疾病死亡病人中,有相当一部分是由于免疫抑制剂使用过度继发严重感染造成。因此如何合理使用免疫抑制剂,制订合适的放疗、化疗方案是目前临床急需解决的一大难题。而造成这一难题的主要原因是目前没有一种快速有效的办法能够评估患者的免疫状态,因而无法准确的判断免疫抑制剂或者放疗化疗方案使用是否合理。 细胞因子由机体免疫细胞分泌,是机体免疫系统功能的执行者和体现者,细胞因子的水平很大程度上反映了机体免疫系统的状态。因此我们可以通过评估机体的细胞因子水平来反映机体的免疫状态,从而指导临床医生合理用药。 在细胞因子检测方面,我们选取先进的液态悬浮芯片技术作为细胞因子的检测方法。此方法可同时检测一份样本中多达100种细胞因子的含量。 目的 1.找到适合的免疫刺激剂,能够快速有效地刺激全血免疫细胞分泌细胞因子。 2.通过体外实验,研究不同免疫抑制剂对细胞因子的抑制作用,总结出不同免疫抑制剂特异性的细胞因子谱。 3.进一步收集临床肾移植病人血样本,总结出不同免疫状态(移植物存活良好,移植物排斥,感染等)下病人细胞因子的变化规律,建立不同免疫状态下的细胞因子谱,用于评估患者免疫状态。 方法 1.实验样本的选择 以往实验多选用稀释的全血或者分离的单个核细胞作为研究对象,我们进行体外实验的目的是为了更好的模拟机体的内环境,因此我们选择未稀释的肝素化全血作为我们的研究样本,更好的模拟全血细胞所处的内环境。 2.免疫刺激剂的选择 我们比较不同免疫刺激剂刺激全血细胞分泌细胞因子的能力。对比PHA和PMA+IONO刺激全血细胞分泌细胞因子的变化。进一步找出PMA+IONO刺激全血细胞分泌细胞因子的最佳浓度和最佳刺激时间。 3.不同免疫抑制剂以及同一免疫抑制剂不同浓度条件下细胞因子的变化 加入不同免疫抑制剂与全血共同培养6小时,保证免疫抑制剂与全血细胞充分作用,再加入免疫刺激剂PMA+IONO刺激全血细胞分泌细胞因子,研究不同免疫抑制剂对不同细胞因子的抑制作用,以及同一免疫抑制剂不同浓度条件下抑制作用的变化。 4.免疫抑制剂单用及联合运用对细胞因子谱的影响 按照临床常见的免疫抑制剂组合,MPA+DEX+FK或者MPA+DEX+CsA联合使.用,比较免疫抑制剂单用和联合使用条件下,细胞因子谱的变化规律。 5.细胞因子检测方法的选择 在细胞因子检测方面,我们需要全面快速分析全血中多种细胞因子,因此传统的ELISA技术、蛋白质组学技术均无法满足我们的需求。而液态悬浮蛋白芯片技术:它将流式检测与芯片技术有机地结合在一起,最多可以检测一份样本中100种细胞因子的水平,而且检测时间短,一次检测大概花费2小时。因此我们选用通过了美国FDA认证的液态悬浮蛋白芯片技术作为细胞因子的检测技术。 6.统计学方法 采用SPSS13.0对数据进行统计分析。采用方差分析进行多组之间的比较,采用LSD法(方差齐)或者Dunnett'sT(方差不齐)进行多组之间的两两比较。 结果 1. PMA+IONO能够快速有效的刺激细胞因子的分泌,PMA(0.15μg/ml)+IONO(2.5μg/ml)为刺激细胞因子分泌的最佳刺激浓度。6小时为PMA+IONO刺激细胞因子分泌的最佳时间点。 2.低浓度DEX (0. 1μg/ml)、中浓度DEX (1μg/ml)及高浓度DEX (10μg/ml)均能抑制的细胞因子:IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IFN-γ, TNF-a, IL-13和GM-CSF。此外,中浓度DEX (1μg/ml)及高浓度DEX (10μg/ml)还能抑制的细胞因子有:G-CSF。 3.低浓度CsA(0.05μg/ml)、中浓度CsA(0.25μg/ml)及高浓度CsA(1.25μg/ml)能抑制的细胞因子:IL-17, IFN-γ, G-CSF和GM-CSF。中浓度CsA(0.25μg/ml)及高浓度CsA (1.25μg/ml)能抑制的细胞因子:IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13和TNF-α。 4.低浓度FK (1ng/ml)不能抑制任何细胞因子,中浓度FK (5ng/ml)能抑制细胞因子GM-CSF。高浓度FK (20ng/ml)能抑制的细胞因子有:IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-17, IFN-γ, TNF-a和G-CSF。 5.各个浓度的MPA均无法抑制任何细胞因子的分泌。 6.在DEX(1μg/ml), FK(5ng/ml)和MPA(10μg/ml)三联方案中: 1) IL-2, GM-CSF:同空白组相比,仅三药联用组能够抑制IL-2的分泌。 2) IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-α, G-CSF:同空白组相比,DEX组及三联用药均能抑制这几种细胞因子的分泌.三联用药组与FK组,MPA组细胞因子水平也有统计学差异。 3) IFN-y:同空白组相比,MPA组、DEX组及三联用药均能抑制IFN-γ的分泌。三联用药组与FK组,MPA组细胞因子水平也有统计学差异。 4) IL-10, IL-17:同空白组相比,单用或联用药物组均无法抑制其分泌。 7.在DEX(1μg/ml), CsA(0.25μg/ml)和MPA(10μg/ml)三联方案中: 1) IL-4, GM-CSF:三联用药组与空白组、MPA组有统计学差异,因此IL-4, GM-CSF主要反映的是CsA和DEX的协同作用。 2) IL-5, IL-6, IL-13:三联用药组与空白组、CsA组及MPA组有统计学差异,因此IL-5, IL-6, IL-13主要反映的是DEX的作用。 3) IL-10, G-SCF:三联用药组与空白组、DEX组及MPA组有统计学差异,因此IL-10, G-SCF主要反映的是CsA作用。 4) IL-2, IFN-y, TNF-a:三联用药组与CsA、DEX、MPA三药单用组均有统计学差异,因此这3个因子反映的是三个免疫抑制剂总体协同抑制作用。 5) IL-17:各组之间均无统计学差异。 结论: 1. PMA+IONO能够更快速有效的刺激全血细胞分泌细胞因子。 2.除MPA外,其他免疫抑制剂均能有效的抑制在PMA+IONO刺激条件下某些全血细胞因子的分泌,不同免疫抑制剂有其特异的细胞因子抑制谱。随着免疫抑制剂浓度的增高,细胞因子的抑制程度也增高。 3.免疫抑制剂在单用和联用条件下,细胞因子谱有一定变化。在FK, DEX及MPA三联方案中,我们总结发现:IL-2主要反映三种药物的协同抑制作用;IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, IFN-γ, TNF-a, G-CSF主要反映DEX的抑制作用;GM-CSF主要反映DEX及FK的协同抑制作用。在CsA, DEX及MPA三联方案中,IL-2, IFN-y, TNF-a主要反映三药联用的抑制情况;IL-4, GM-CSF主要反映CsA和DEX的联合抑制作用;IL-5,IL-6,IL-13主要反映DEX的抑制作用。IL-10, G-CSF主要反映的是CsA的抑制作用。从我们总结的结果可以得知,即使在三种免疫抑制剂联合使用的情况下,仍然有某些细胞因子特异的反映某一类免疫抑制剂的作用,因此我们可以通过检测这类细胞因子,反映其相对应的免疫抑制剂的用量,从而更好的指导临床医生更准确的调整免疫抑制剂,合理用药。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

【引证文献】
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1 汪志艳;刘永刚;王刚;石文达;武嘉男;涂亚斌;姜成刚;何玉利;韩梓峰;李玉明;王延群;蔡雪辉;;猪全血中IFN-γ、IL-2、TNF-αTaqMan定量RT-PCR方法的建立及对猪瘟疫苗的免疫评价[J];中国预防兽医学报;2013年02期
【参考文献】
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1 曲青山;吕宇涛;张小谱;苗书斋;陈国勇;邢利;蔡文利;;肾移植受者148例死亡原因分析[J];郑州大学学报(医学版);2006年04期
【共引文献】
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1 徐新军 ,刘皋林 ,张正行;他克莫司治疗的监测方法[J];国外医药(抗生素分册);2001年05期
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1 田川;BTLA和ICOS早期预测肾移植术后急性排斥反应的临床研究[D];山东大学;2011年
2 刘占国;应用全血细胞因子谱评估肾移植受者免疫状态[D];南方医科大学;2010年
【同被引文献】
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1 马玉媛;郭逸;颜奇坡;叶小丽;张启模;郑霖;田克恭;章金刚;;猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立[J];中国预防兽医学报;2011年04期
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1 徐磊;猪瘟兔化弱毒细胞苗和脾淋苗细胞免疫效果的比较[D];福建农林大学;2009年
【二级参考文献】
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1 刘勇,杨亦荣,郑少玲,夏鹏,陈文伟,沈龙捷,吴存造,孙贤斌,徐自强,李澄棣;145例肾移植受者死亡原因分析[J];中华器官移植杂志;2004年04期
2 范连慧,刘龙,向军,杨宏伟,李昕,曹志强;187例肾移植受者死亡原因分析[J];中华器官移植杂志;2005年08期
3 曲青山,徐兆萍,王沛育,吕宇涛,陈国勇;连续性肾脏替代治疗在肾移植术后重症肺炎治疗中的应用[J];中华医院感染学杂志;2005年08期
4 王长希,陈立中,郑克立,刘龙山,费继光,邱江,吴培根,纪玉莲,朱兰英,沈清瑞,梅骅;中山大学附属第一医院两个阶段肾移植效果比较(附2562例报告)[J];中山大学学报(医学科学版);2005年01期
5 马文江,孙益兰,王雪芬,俞爱凤,潘稚芬,周建英;肾移植术后肺部感染的临床探讨[J];浙江预防医学;2003年04期
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1 ;基础疫苗学会议报告[J];中国生物制品学杂志;1989年01期
2 韦敏 ,张天宇;B_(16)-BL_6黑素瘤细胞因子基因转移的免疫生物学意义[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1995年01期
3 陈诗书;“瘤苗”——细胞因子转导人肿瘤细胞[J];生物工程进展;1999年04期
4 冯进波,许晓群,魏海明,刘文涛;脐血细胞因子基因表达的免疫学意义[J];临床输血与检验;2002年01期
5 宋仕玲,龚作炯;细胞因子及其网络对肝纤维化的作用[J];人民军医;2003年10期
6 余丹凤,沈盛晖,张庚,胡马洪,周颖;醒脑静注射液对重症颅脑损伤患者细胞因子及肺部感染的影响[J];中国中西医结合急救杂志;2005年05期
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1 侯桂华;;猪皮片移植对HLA-DR4转基因小鼠细胞因子产生的影响[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
2 林俊杰;邱颖婕;冯明亮;马庆;范华骅;钱开诚;;多合一浓缩血小板在保存期中的活化情况的研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
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4 庞勇;李雁;邹卓成;林军;何列涛;刘运珠;;益肾调督针法对脑梗塞恢复期细胞因子的影响[A];泛中医论坛·思考中医2006——经典中医的特色和优势论文集[C];2006年
5 张理涛;于广新;张玉环;卢桂玲;;牛磺酸对寻常性银屑病患者外周血单一核细胞产生细胞因子的影响[A];中华中医药学会皮肤科分会第四次学术年会;全国中医、中西医结合皮肤病诊疗新进展高级研修班论文集[C];2007年
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8 丁进;冯媛;朱平;;强直性脊柱炎患者单核/巨噬细胞分泌的细胞因子的研究[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
9 张玉环;廉信;邢艳玲;刘艳华;;雷公藤多苷对变应性接触性皮炎患者细胞因子表达影响的研究[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年
10 孙华;赵慧;张捷;包飞;魏镜;王道海;张云祥;;电针百会、足三里对抑郁症患者血清中炎性细胞因子水平的影响[A];中国针灸学会2009学术年会论文集(下集)[C];2009年
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1 吴一福;细胞因子与病理性瘢痕形成密切相关[N];中国医药报;2005年
2 赵喜明;儿童癫痫病因新解[N];中国医药报;2004年
3 杨慎峭 刘旭光 余曙光;艾灸治疗关节炎机制与细胞因子有关[N];中国医药报;2005年
4 许沈华;肿瘤基因疫苗已见端倪[N];家庭医生报;2007年
5 新言;中医证的本质是细胞因子吗?[N];科技日报;2005年
6 陈金伟;精浆中多种因子在CP的发病中起重要作用[N];中国医药报;2006年
7 科文;中科大肝脏天然免疫研究获新成果[N];中国医药报;2006年
8 正;干扰素/白介素可减弱细胞因子的抗抑郁作用[N];中国高新技术产业导报;2001年
9 仇逸;口服细胞因子治疗肿瘤将获突破[N];医药经济报;2009年
10 曹阳;痰热清注射液有效抑制多器官功能障碍综合征患者细胞因子[N];健康报;2007年
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1 戴钟铨;模拟失重条件下骨相关细胞因子对前成骨细胞的调控作用研究[D];第四军医大学;2011年
2 刘占国;应用全血细胞因子谱评估肾移植受者免疫状态[D];南方医科大学;2010年
3 宋春辉;模拟HCV HVR1免疫7肽对人不同免疫细胞分泌细胞因子影响的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
4 敬晓棋;乳腺炎细胞因子及T淋巴细胞亚群研究[D];西北农林科技大学;2013年
5 吕琼霞;运输应激对猪免疫机能的影响及其调控机理初探[D];南京农业大学;2009年
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1 何懿;人全血细胞因子在免疫抑制状态评估中的应用[D];南方医科大学;2010年
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5 王延春;扶正平消汤联合化疗对恶性肿瘤病人免疫功能影响的研究[D];山东中医药大学;2005年
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