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《南方医科大学》 2010年
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流式微球技术检测特发性血小板减少性紫癜患者血小板糖蛋白自身抗体的方法建立及临床应用

李金霖  
【摘要】: 研究背景 特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP)是一组免疫介导的血小板过度破坏所致的出血性疾病。以广泛黏膜及内脏出血、血小板减少、骨髓巨核细胞发育成熟障碍、血小板生存时间缩短及血小板膜糖蛋白特异性自身抗体出现等为特征。其免疫机制主要是由于患者体内产生针对血小板和巨核细胞膜表面糖蛋白的自身抗体,导致血小板免疫性破坏过多、外周血中血小板减少的出血性疾病,从而引起自发性出血,血小板减少,出血时间延长和血块收缩不良。ITP患者血小板糖蛋白(glucoprotein, GP)特异性自身抗体通常针对Ⅱb/Ⅲa或Ⅰb/IX,针对糖蛋白特异性自身抗体的检测方法如单克隆抗体俘获血小板抗原技术(monoclonal antibody immobilization of platelet antigen technique, MAIPA)、放免微球技术(Radioactive immunobead assay,RIA)有很高的特异性(78%-93%),但是其敏感性偏低(49%-66%)[4],因而在临床上的广泛应用有一定限制。流式微球技术(cytometric bead array, CBA)是基于流式细胞仪发展起来的新技术,它以聚苯乙烯微球为反应界面,利用特异性单克隆抗体包被后即可俘获一些小分子物质,通过检测微球的“放大”作用对一些小分子物质进行检测。近年来,CBA正越来越多的应用于种小分子物质的检测。 目的 建立流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体的方法,比较该方法和改良间接MAIPA方法在特发性血小板减少性紫癜实验室诊断价值及其在ITP与非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值。 方法 1、病例及正常对照选择:ITP患者67例,非免疫性血小板减少患者35例(包括急性髓系白血病18例:M03例;M2b5例,M37例:Msa3例。再生障碍性贫血患者5例。慢性白血病5例。淋巴瘤5例。骨髓增生异常综合症2例),共102例。(两组患者采血时血小板计数均低于100×109/L,且近二月内未接受输血)。正常志愿者30例,均无输血或妊娠史,性别、年龄与病人组相匹配。2、方法:分别应用抗人血小板GPⅡb/Ⅲa单抗(CD41a)、GPⅠb/IX (CD42)包被微球,分离血样中的血小板,将血小板裂解后与包被过的微球孵育,之后加入PE标记的羊抗人IgG多克隆抗体,流式细胞仪分析。同时应用改良间接MAIPA检测血浆中游离GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb/IX自身抗体。比较两种检测方法的敏感性及特异性,并比较检测单种抗体与联合检测多种抗体对ITP的诊断价值的不同。 结果 将标本的平均荧光强度值(mean fluorescence intensity, MFI)与正常对照(三个不同正常人的血样)MFI的均值比较,计算比率。GPⅡb/Ⅲa单抗该比率均值及上下限在ITP组为6.52(0.22-30.20);非免疫性血小板减少组1.20(0.32-3.04);正常对照组1.19 (0.23-3.51)。GPⅠb/IX单抗该比率均值及上下限在ITP组为4.91(0.56-22.00),非免疫性血小板减少组1.24(0.33-3.56),正常对照组1.31(0.23-2.84)。非参数检验得无论是GPⅡb/Ⅲa单抗还是GPⅠb/IX单抗ITP组荧光强度比率与非免疫性血小板减少组及正常对照组均存在显著差异(P0.01)。若将正常对照组上限作为界值,GPⅡb/Ⅲa比率大于3.535、GPⅠb/IX比率大于2.855定为阳性,则流式微球技术联合检测两种抗体诊断ITP的敏感性为82.09%,特异性为95.38%,阳性预测值为94.83%,其敏感性高于改良间接MAIPA (P0.05)。由ROC曲线得流式微球法区分ITP与正常人的鉴别效度GPⅡb/Ⅲa为0.856,GPⅠb/IX为0.916。 结论 流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体,耗时短、重复性好,敏感性高于改良间接MAIPA,对提高ITP的实验诊断水平及指导临床治疗有一定的价值。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R554.6

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