收藏本站
《第二军医大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

GILZ对巨噬细胞功能的影响及其在小鼠肝脏缺血再灌注中的保护作用

谢江平  
【摘要】:目的:GILZ具有炎症抑制、上皮细胞钠通道的调节等多项作用,目前认为是GCs发挥作用的重要介质。siRNA自被发现就誉为基因研究史上的革命性突破,其对靶mRNA的抑制作用具有特异性和高效性的特点,是特异性抑制基因表达的强效方法。本实验通过体外条件培养获得足够数量和纯度的小鼠腹腔巨噬细胞,应用已构建的编码小鼠GILZ基因的质粒载体和GILZ特异性siRNA体外转染小鼠腹腔巨噬细胞,检测GILZ基因的mRNA和蛋白表达水平,建立GILZ的高表达和沉默模型,为下一步研究巨噬细胞中GILZ基因特性奠定实验基础。方法:体外培养获得足够数量和纯度的小鼠腹腔巨噬细胞,法国Polyplus-transfection公司的INTERFERin~(TM)和jetPEI~(TM)转染试剂分别将siGILZ和GILZ转染至小鼠腹腔巨噬细胞中,干扰试验分为空白对照组、无关序列siC组、siGILZ组,分别取处理后1小时、3小时、6小时、12小时和24小时作为观察点。GILZ基因转染试验分为空白对照组、空质粒AAV组、GILZ组,也分别取处理后1小时、3小时、6小时、12小时和24小时作为观察点。RealtimePCR法检测各处理组细胞GILZ的mRNA水平的表达,Western-blot检测各处理组细胞GILZ的蛋白水平的表达。结果:干扰试验中与对照组和无关序列siC组相比较,siGILZ组明显降低6小时后GILZ的mRNA水平和蛋白水平的表达(p0.05);GILZ基因转染试验中,与对照组和空质粒AAV组相比较,GILZ组明显升高GILZ的mRNA水平和蛋白水平的表达(p0.05),其中6h组表达最高。结论:GILZ的高表达和沉默模型成功构建,可以转染试剂处理6小时作为GILZ干扰和转染的处理时间。 目的:巨噬细胞是固有免疫系统中重要的细胞组成部分,具有包括吞噬作用、抗原提呈及分泌细胞因子等功能,在不同微环境中,巨噬细胞主要分为M1型和M2型,M1型巨噬细胞可直接吞噬和杀伤病原微生物和肿瘤细胞、分泌促炎性细胞因子,专职呈递抗原参与正向免疫应答;M2型巨噬细胞表现为较低的抗原呈递能力,并通过分泌抑制性细胞因子IL-10和TGF-β等下调免疫应答。本实验试图探讨GILZ能否通过促进腹腔巨噬细胞转变为M2型巨噬细胞而发挥负向调控作用。方法:以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,试验分为空白对照组、DEX组、GILZ处理组、siGILZ处理组。RealtimePCR法检测各处理组M1和M2标志性分子表达情况、ELISA法进行细胞因子的检测,流式检测处理后巨噬细胞的吞噬能力,Western-blot检测各组TLR4信号通路分子的表达。结果:与对照组相比较,Dex组与GILZ处理组高表达M2标志性分子Arginase-1、FIZZ-1和Ym-1,低表达M1标志性分子i-NOS;抑制促炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-12的表达,而提高抗炎症因子IL-10的表达,抑制腹腔巨噬细胞的吞噬能力,下调TLR4、IRAK1、IRAK2和TRAF6等TLR4信号通路分子的表达;而siGILZ却低表达M2标志性分子Arginase-1、FIZZ-1和Ym-1,高表达M1标志性分子i-NOS;促进促炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-12的表达,而抑制抗炎症因子IL-10的表达,提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力,上调TLR4、IRAK1、IRAK2和TRAF6等TLR4信号通路分子的表达(p0.05)。结论:GILZ促进M2型巨噬细胞的产生,抑制促炎症因子的表达,而促进抗炎症因子IL-10的表达,并可能是通过抑制TLR4信号通路分子的机制。 目的:肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科疾病中常见的病理生理过程,地塞米松通过直接抑制中性粒细胞的氢过氧化物生成和中性粒细胞游出,阻止磷脂酶A2和花生四烯酸代谢,从而抑制中性粒细胞介导的缺血再灌注损伤。本实验探讨GILZ是否可通过促进腹腔巨噬细胞转变为M2型巨噬细胞来降低肝脏缺血再灌注损伤。方法:通过invivojetPEI~(TM)转染试剂构建GILZ体内转染于小鼠肝脏缺血再灌注模型,试验分为空白对照组、Dex组、AAV空质粒处理组、GILZ处理组,取再灌注4小时作为观察点。检测ALT和AST情况、HE染色看病理学变化,ELISA法进行细胞因子的检测。结果:与对照组和AAV空质粒处理组比较,Dex组和GILZ处理组明显降低ALT和AST的表达(p0.05),较明显减少小鼠肝脏缺血再灌注的组织损伤,抑制促炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-12的表达,而提高抗炎症因子IL-10的表达(p0.05)。结论:本实验从体内研究环境发现GILZ通过诱导M2型巨噬细胞产生,保护缺血再灌注肝脏的肝功能的作用,降低炎症因子的表达,进而保护缺血再灌注的肝脏的结构相对完整。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R657.3

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王耀峰;马全祥;袁向山;杨杰;吴敏;杨志军;文小军;;八氯代二苯并二噁英致小鼠肝脏病理损伤及Caspase-3的影响[J];毒理学杂志;2011年05期
2 肖树华;;曼氏血吸虫病小鼠用4-异硫氰基-4′-硝基二苯胺(CGP4540)治愈后其肝脏的药物代谢能力的恢复情况[J];国际医学寄生虫病杂志;1979年04期
3 郑葆芬,单易非,陈伟俊,吴正泉,吕妹珍,程立,黄春妹;小鼠L6565白血病病毒的分离及其性质[J];复旦学报(医学版);1980年01期
4 张芳荣;范维珂;;H_(796)腹水癌细胞的染色体核型及带型研究(摘要)[J];四川生理科学杂志;1982年02期
5 王淑芬,时云林,郭保忠,高徐生;不同品系小鼠对约氏疟原虫-斯氏按蚊系统敏感性的观察[J];动物学杂志;1983年03期
6 刘淑华,雷伦君,李志旺;照射小鼠骨髓基质对造血干细胞支持功能的观察[J];中国医学科学院学报;1985年06期
7 王绮如,袁维道;老年小鼠的造血机能[J];中南大学学报(医学版);1986年02期
8 张覃沐,林晨,王绵英;乙双吗啉(AT-1727)对小鼠L_(1210)细胞周期的影响[J];科学通报;1986年10期
9 严玉辰,刘学礼,贾克丽,张方振,刘俊,赵荣辉,刘国敏;肾综合征出血热病毒灭活疫苗的研究——Ⅰ.疫苗病毒株选择的研究(摘要)[J];中国媒介生物学及控制杂志;1986年04期
10 李笠,张谅魁,杨坚,赵曼华,沈明洪;~(125)I标记HBsAg在孕鼠及胎鼠体内分布的实验观察[J];山东大学学报(医学版);1986年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾丹兵;李乃民;刘珊;李春杰;张永丰;;参姜锁阳益气片的急性毒性实验研究[A];中国中西医结合学会诊断专业委员会2009’年会论文集[C];2009年
2 张伟;冯娟;陈炜;张小娟;袁树民;廉虹;张连峰;;系统表达HB-EGF转基因小鼠的建立[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年
3 宋根娣;柴保国;赵卫东;李春丽;郑振宇;;卵子突变基因在小鼠早期胚胎发育过程中作用机理研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
4 闵静;;竹节参皂苷抗炎作用的实验性研究[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
5 陈福伟;杨国宇;李宏基;郭豫杰;鲁维飞;;小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的研究[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 刘向前;吴少庭;秦莉;袁仕善;黄达娜;雷明军;潘晖榕;林绮萍;张仁利;高世同;刘能保;;几种SARS DNA疫苗对Balb/c小鼠重要器官影响的组织病理学研究[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
7 李文丽;梁欣;海春旭;;光气诱导小鼠肺水肿的凋亡相关基因表达[A];2008陕西省环境与健康论坛论文集[C];2008年
8 张玉仙;王文利;陈耀星;王子旭;李然;张凡健;;不同浓度大蒜溶液对小鼠小肠黏膜免疫相关细胞数量变化影响的研究[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
9 赵刚;倪娅;徐云丹;;一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法[A];基因开启未来:新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年
10 刘玉龙;周剑影;王国权;戴宏;段莹莹;郭晓葵;李元;;人重组白细胞介素-8(rhIL-8)对受照小鼠抗放作用的实验研究[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全中国青年学术交流会论文摘要汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报实习 生金平 本报记者 张咏晴;“乙肝小鼠”成人类替身[N];文汇报;2005年
2 奇 云;单亲小鼠可能打开潘多拉魔盒[N];大众科技报;2004年
3 记者 刘恕 刘霞;利用皮肤细胞培育出健康小鼠[N];科技日报;2009年
4 何德功;小鼠实验证明小脑严重缺乏亦能存活[N];医药经济报;2005年
5 宿健桃;药用植物多糖类成分药理作用综述[N];中国中医药报;2002年
6 周松;TRPM8是“冷”蛋白[N];中国医药报;2007年
7 甘勃;后基因组时代看小鼠继续“开天”[N];大众科技报;2008年
8 陆家训;P-53蛋白质有两面性[N];健康报;2002年
9 陈军梅;用粉色颠覆IT产品设计规则[N];中国质量报;2008年
10 吴洣麓;小鼠医院:老鼠为我们而病[N];北京科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谢江平;GILZ对巨噬细胞功能的影响及其在小鼠肝脏缺血再灌注中的保护作用[D];第二军医大学;2011年
2 刘琰;五羟色胺对小鼠社会行为的影响[D];北京协和医学院;2008年
3 马宁;小鼠神经行为测试组合建立及邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠学习记忆影响的研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
4 王芳;应激和丰富环境及1-脱氧野尻霉素对小鼠衰老相关行为改变的影响[D];安徽医科大学;2012年
5 张斌;适于微米切片的小鼠全脑标本制备方法研究[D];华中科技大学;2011年
6 许袖;谷胱甘肽过氧化物酶3在小鼠围着床期子宫中的表达、调节与功能[D];东北农业大学;2011年
7 冯秋婷;PDK1在小鼠心血管发育过程中的作用和机制研究[D];南京医科大学;2011年
8 张松林;诱导受体产生一氧化碳减轻小鼠移植心缺血再灌注损伤和排斥反应的机制研究[D];华中科技大学;2010年
9 杨冬;Peroxiredoxin 6对细菌脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的作用及机制研究[D];复旦大学;2009年
10 王志军;寡聚脱氧核苷酸对小鼠急性酒精性肝损伤的影响[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 熊会海;针灸中药对肿瘤模型小鼠细胞免疫功能影响的实验研究[D];天津中医学院;2003年
2 杨炜曦;新肌纤生成调节因子MR-1基因功能的初步探讨[D];吉林大学;2004年
3 赵学明;双重套式PCR对小鼠桑椹胚OPS法冷冻后性别鉴定[D];中国农业大学;2005年
4 代小华;醋酸棉酚对小鼠精母细胞中染色体配对行为的影响[D];河南大学;2005年
5 井小会;人参皂甙Rg3治疗小鼠恶性腹腔积液的实验研究[D];昆明医学院;2007年
6 廖海艳;一氧化氮对小鼠胚胎植入的影响[D];湖南农业大学;2008年
7 曲玉秀;两种遗传工程小鼠的检测、鉴定与种质保存方法的研究[D];南京农业大学;2003年
8 顾克菊;免疫抑制宿主Toll样受体表达及对烟曲霉菌感染免疫应答[D];第四军医大学;2005年
9 陈永卫;肝癌微波治疗后残留肿瘤生物学特性的变化及对机体的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
10 刘玉香;二氧化硫对小鼠几种脏器超微结构及细胞因子水平的影响[D];山西大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026