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《第二军医大学》 2000年
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血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对胶质瘤血管生成的抑制作用和效果的实验研究

李维方  
【摘要】:实体瘤的生长和转移是依赖于血管生成的,临床上可探测出的任何 实体瘤实际上都己有肿瘤血管系统的形成。胶质瘤这一人脑内最常见的 恶性肿瘤,在临床确诊时已浸润到远处,由于目前脑外科手术仅局限于 肉眼范围内的切除,常规的综合治疗方法疗效仍不能令人满意。目前治 疗肿瘤的各种药物主要是针对抑制或杀灭肿瘤细胞本身进行的,但是从 恶性肿瘤生长和转移中依赖丰富的血管提示,通过抑制肿瘤新生血管生 成可望阻止肿瘤的生长与转移,为肿瘤治疗开辟了新的途径。实验证明血 管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿 瘤血管生成中发挥了重要作用,其他的生长因子大多通过VEGF直接或间 接的发挥作用。因此,阻断VEGF的作用能抑制绝大多数的肿瘤血管生成 作用。阻断VEGF的表达不仅直接抑制了肿瘤血管生成还能有抑制其它血 管生长因子的协同作用。故VEGF是抗肿瘤血管生成的良好靶标。胶质瘤 是一富含血管的恶性肿瘤,它的恶性程度是以明显的血管生成多少为特 征,所以胶质瘤属最适合抗血管生成治疗的一种实体瘤。反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide)能阻断靶细胞内特异基因的表达。基 于此,我们应用与VEGF互补的反义寡核苷酸,实验观察对大鼠脑胶质瘤 细胞离体和在体的VEGF表达和内皮细胞生长及血管生成的抑制作用。进 而观察研究临床脑胶质瘤标本肿瘤恶性程度、肿瘤增殖细胞核抗原 (PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管密度(MVD)的关系。为 进一步深入研究VEGF在胶质瘤中的作用和反义寡核苷酸临床应用提供实 验基础和依据。本实验分为离体实验、在体实验和临床实验三大部分。 一.离体实验部分 VEGF反义寡核苷酸抑制C_6胶质瘤细胞VEGF表达和作用 的实验研究 3 目的:实验观察VEGF反义寡核昔酸对C6胶质瘤细胞VEGF的表达和 内皮细胞生长的抑制作用。 方法和结果: (一)在含 IX 10‘C。胶质瘤细胞的 96板内分别布人 5、10、20Ulllol/L 的VEGF反义、正义、错义寡核昔酸,制备条件培养基,观察各条件培养 基对内皮细胞生长的抑制作用。实验发现含反义寡核昔酸处理过的条件 培养基对内皮细胞生长有明显的抑制作用,而且抑制作用存在浓度依赖 性。而正义、错义寡核昔酸及对照组没有明显的抑制作用。说明反义寡 核昔酸能有效的抑制内皮细胞的生长。 (二)应用免疫荧光流式细胞技术检测反义寡核昔酸对C。胶质瘤细 胞VEGF表达抑制作用定的量实验。显示VEGF反义寡核昔酸对C6胶质瘤 细胞VEGF的表达有明显的抑制作用,反义寡核昔酸三个浓度组(5 p mol/L、10 u mol/L、20 u。of卜)与对照组均有明显的差异,而且反义g 核昔酸对C。胶质瘤细胞VEGF的表达有明显的浓度依赖性。但正义寡核苦 酸和错义寡核昔酸与对照组的C。细胞VEG卜的表达没有明显的差异。 (三)应用细胞免疫化学方法检测反义寡核昔酸对C。胶质瘤细胞 VEGF表达抑制作用定性实验显示反义寡核昔酸 20 11 mol/卜对 C。胶质瘤细 胞VEGF的表达有明显的抑制作用。对照组和正义寡核昔酸、错义寡核昔 酸组的VEGF表达呈强阳性(染色阳性细胞>75%)。反义寡核昔酸组的VEGF 表达呈阴性(染色阳性细胞<5%),故VEGF反义寡核昔酸对C。胶质J留细胞 的VEGF表达有明显的抑制作用。虽然各组的VEGF的表达程度不同,但 是胶质瘤细胞的生长状况大致相同。说明VEGF反义寡核昔酸能有效的抑 制C。胶质瘤细胞VEGF的表达。但对胶质瘤细胞自身生长没有明显的抑制 作用。一方面说明VEGF反义寡核苦酸较特异作用于胶质瘤细胞的VEGF 靶基因,另一方面说明寡核昔酸的非特异作用较小。 结论:反义VEGF A核昔酸通过抑制C。胶质瘤细胞VEGF的表达,进?
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R739.41

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【参考文献】
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