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《第二军医大学》 2000年
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小鼠睾丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡及其机理的实验研究

刘阳  
【摘要】:组织移植是整形外科常用的治疗手段之一。目前整形外科临床 应用最多的是自体组织移植,但自体组织存在来源有限、损害供区、 增加患者痛苦等不足。异体(种)组织来源广泛,取材方便,形状 逼真,但免疫排斥反应的存在使其在整形外科的临床应用受到极大 的限制。 既往的研究表明,异体组织移植排斥反应的发病机理主要为T 淋巴细胞介导的免疫应答。尽管免疫抑制剂能够降低T淋巴细胞活 性,但应用后常常造成全身免疫状态低下、易发生感染等危险。因 此,如能单纯消除移植物周围局部浸润激活的T淋巴细胞,则能在 不损害全身免疫状态的情况下使移植物免受排斥反应而存活。近年 来对免疫赦免的研究结果为这一设想的实现带来了曙光。 人们很早就发现人体内存在着一些免疫赦免区如眼球、睾丸及 脑组织等。近来的研究发现这些部位的组织均能表达FasL,很可能 通过Fas/FasL途径诱导Fas~+的T淋巴细胞凋亡,从而形成局部无淋 巴细胞浸润的免疫赦免环境。在睾丸组织中睾丸足细胞持续表达 FasL。 上述研究结果启发人们能够应用FasL 或睾丸足细胞保护异体 (种)组织移植物,使移植物免受排斥反应的侵害,延长其在受体 内的存活。虽然目前对FasL保护异体(种)移植物的作用尚存有争 议:1、FasL延长异体(种)移植物在受体内的存活,2、FasL作为 前炎性分子,吸引并激活粒细胞,加剧而不是抑制移植排斥反应的 发生,但动物实验的结果却都显示睾丸足细胞与异体细胞混合移植, 延长了移植细胞在受体内的存活。然而对睾丸足细胞在此过程中的 具体作用机制及调控因素尚未完全阐明。 2 第二军医人学惭卜论义 中义摘要-3- 本研究的目的是: 1.观察体外条件下睾丸足细胞对成熟T淋巴细胞凋亡的影响。 2.探讨睾丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡的具体机制。 3.深入了解FasL在睾丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡过程中的作用。 4.探讨应用FasL及睾丸足细胞保护异体(种)移植物的可行性, 为应用翠丸足细胞及FasL保护异体(种)移植物的在体研究及 临床应用提供实验依据。 本研究包括以下主要内容: 一、体外联合培养条件下小鼠晕丸足细胞对成熟T淋巴细胞影响的 研究 目的:探讨体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞对成熟T淋巴 细胞凋亡的影响。方法:用TUNEL标记,核酸电泳、电镜、流式细 胞术检测对照组厂淋巴细胞卜A组厂淋巴细胞+培养睾丸足细胞24 h培养上清卜 B组厂淋巳细胞+睾丸足细胞乃组中小鼠成熟 T淋巴 细胞的凋亡及其量的变化。结果:3组细胞电镜下均可见部分细胞染 色质浓集,成块状或环状位于核膜内侧,核固缩,凋亡小体形成; TUNEL标记见部分细胞核染色呈深蓝色;核酸电泳均出现典型DNA 梯状带(ladder):流式细胞术检测 A、B两组 T淋巴细胞凋亡量均 明显高于对照组u<0刀1XB 组T淋巴细胞凋亡量显著高于A组 (尸<0刀1)。 二、晕丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡时FasL作用的研究 目的:研究 FasL在睾丸足细胞诱导成熟 T淋巴细胞凋亡过程中 的具体作用。方法:设计正义、反义及错配引物阻断宰丸足细胞FasL 3 第_军匝人学助1:论义 中义摘要-4- 的表达,建立转染FasL基因井持续表达的小鼠表皮细胞株,运用原 位杂交、免疫组化、Western blot 等检测上述细胞及其培养上清中 FaSL的表达,运用流式细胞学技术检测上述细胞与成熟 T淋巴细胞 混合培养后T淋巴细胞凋亡率的差异。结果:翠丸足细胞及其培养 上清中均有FasL的表达,转染FasL基因的表皮细胞有FasL的表达, 但其培养上清中则未检测到FasL蛋白的表达,反义引物作用后在睾 丸足细胞及其上清中基本检测不到FasL;转染与未转染的表皮细胞 诱导T淋巴细胞凋亡量无明显区别(尸>0刀5),经反义引物作用后睾 丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡量显著减少(P<0刀1)。 结 论: 1.体外条件下睾丸足细胞能够诱导成熟T淋巴细胞凋亡。 2.FasL是睾丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡过程中的主要因 素但不是唯一因素;睾丸足细胞主要是由于表达FasL从而诱导表达 Fas的成熟T淋巴细胞凋亡,这可能是形成睾丸免疫赦免的主要机制。 3.转染有FasL基因并持续表达的细胞不能有效地诱导成熟T淋巴 细胞凋亡;FasL诱导成熟 T淋巴细胞凋亡尚需其它蛋白的协同作用; 单纯转染FasL基因尚不能使同种异体移植物免受排斥反应的损害。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R392.4

【参考文献】
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