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《第二军医大学》 2000年
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核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用

王桂琴  
【摘要】:肝纤维化是多种慢性肝病共有的病理改变。近年来关于肝纤维化发生、发 展的机制及其治疗己从整体、细胞和分子水平进行了大量的研究,资料表明肝 细胞和肝星形细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化发生、发展中最重要 的细胞,肝细胞损伤是肝纤维化的重要启动因素,肝星形细胞激活是肝纤维化 发生的中心环节。肝纤维化是肝脏以胶原为主的细胞外基质合成和降解失衡的 结果。许多病因可以造成肝损伤,我国以病毒性肝炎为主要原因,当前对原发 病变仍无有效根治的措施,因此减轻和阻止纤维化反应是十分重要的治疗目 标。 Decorin主要由成纤维细胞合成,属于分泌型、小分子、富含亮氨酸蛋白 多糖(small,leucine-rich proteoglycans,SLRPs)基因扩展家族成员之一,在调 节细胞粘附、迁徙、增殖及胶原纤维形成中起重要作用。研究表明decorin在 防止肾小球、肺等组织纤维化中起作用,decorin cDNA最近被用作一种新的基 因治疗工具来治疗由TGF β增高引起的纤维性疾病。Decorin能够使Bleomycin 诱发仓鼠肺纤维化的各项病理指标显著降低,提示decorin在抗肺纤维化中的药 理作用。Decorin与肝纤维化的关系,国外学者通过免疫组化和原位杂交等技 术仅作了不同生理病理状态下decorin在肝脏各种细胞的定性定位研究。国内 关于decorin的研究很少,有关decorin与肝纤维化的研究尚属空白。我们进行 decorin对肝细胞和肝星形细胞影响以及细胞因子对decorin表达影响的体外研 究,以大鼠肝星形细胞株(HSC-T6)细胞和正常人肝细胞株(L-02)细胞为研 究靶细胞,从细胞和基因水平了解decorin在体外对肝脏细胞的调控作用,同时 选择 IFNγ、PDGF等细胞因子与 HSC-T6细胞作用,观察细胞因子对 decorin 表达的调节作用。旨在为探讨decorin在肝纤维化形成机制中的作用提供理论 依据,为肝纤维化治疗提供新思路。 一.Decorin对L-02和HSC-T6体外增殖的影响 互 中文纷召 Decorin是一种与生长抑制活性密切相关的蛋白多糖分子,能够控制多种 来源的细胞增殖。对肝脏组织细胞的作用尚未见报道。我们通过decorin与正 常人肝细胞株(L心2)及大鼠肝星形细胞株(HSC*6)体外共孵育,进行细 胞计数和心掺入量测定,观察decorin对这些细胞分裂增殖的影响,通过流式 细胞仪分析 DNA含量观察其对细胞周期的影响。结果表明 5叶 卜g/ml decorin 作用4—6天后,与对照组相比在相同培养条件下细胞增殖数量及速度降低,以 10 pg/ffil作用更强,并且随作用时间延长而明显(P<0刀1人作用48小时可使 细胞’*-*dR掺入量比对照组减少18.29%(P<O.05),’*-Leu掺入量无明显改 变,提示对细胞DNA合成有影响。Decorin作用后,G/G;期细胞百分率比对 照增加19石3%和29.08%(P<0刀1)石期细胞百分率比对照降低18.45%和Zo.98 %(P<0刀1X G。/M期细胞减少甚至消失。细胞经20ug/ml decorin作用 6天, 台盼蓝染料排斥实验表明细胞活力在 90%以上,说明 decorin在测试条件下对 所用细胞无细胞毒性作用,其细胞数量低于对照是由于细胞受decorin作用所 致。结果表明decorin能够抑制肝细胞和肝星形细胞的体外增殖,可能与细胞 G;期阻滞以及抑制细胞DNA合成有关。Decorin对细胞生长有负反馈调节作 用。 二.Decorin诱导L心2细胞和HSC16细胞词亡的研究 肝组织损伤启动HSC 由一种静止的富含维生素A的表型转化为活化的 肌纤维母细胞样(MFBLC),与静止状态细胞相比,后者具有更高的增殖活力 并能大量合成细胞外基质。逆转HSC的活化表型或减少HSC的数量可以减少 ECM成分的过度沉积。我们以decorin为诱导剂,观察decorin在体外对L.02 细胞和HSC16细胞凋亡的诱导作用。 我们的实验从多方面表明 decorin在 20-40卜g/ml浓度作用后可使 HSC16 和L-02细胞发生凋亡。Decorin与L-02和HSC16细胞体外共同孵育后,细 胞出现了凋亡特征性改变,贴壁细胞变圆、缩小、脱落,台盼蓝染料排斥试验 表明这些细胞是活细胞;染色质浓缩,聚集呈新月形或马蹄形,形成凋亡小体;
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