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《第二军医大学》 2001年
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肿瘤特异性增殖型腺病毒携带白细胞介素-12基因治疗大肠癌的实验研究

刘连杰  
【摘要】:尽管近十年来肿瘤基因治疗在实验动物中取得巨大进展,但其临床研究进展 仍十分缓慢,其主要障碍是传统的基因治疗方案采用非增殖病毒或物理化学方法, 这种方案基因转染率低、表达量低,对肿瘤细胞不能靶向治疗,从而达不到治愈 肿瘤的目的。最近,一种肿瘤细胞特异性增殖型病毒治疗方案在肿瘤治疗上取得 了重要进展,它利用肿瘤 细胞与正常细胞的某种差 异,如P53基因突变与否, 使病毒在肿瘤细胞中特异 性增殖,而在正常细胞内 不增殖,从而特异性杀灭 肿瘤细胞,如图1。其中 最引人注目的肿瘤特异性 增殖型病毒是美国ONYX 药物公司研究的E1b 55Kda缺陷的增殖型腺病 毒(ONYX-015)。应用于两 图 10NYX-015在肿瘤细胞内特异性增殖 组常规疗法均无效的头颈部肿瘤患者身上,结果有1/3的病人肿瘤缩小了50%, 在与化疗结合使用的十个病人中有两个肿瘤完全消退,7个缩小50%以上,这是至 今为止应用于临床的最有效的生物治疗。为此我们设想应用这种肿瘤特异性增殖 型腺病毒携带某种对肿瘤治疗有明确疗效的抗癌基因,利用病毒在肿瘤细胞内特 异性增殖及复制,而在正常细胞内不增殖,从而使抗癌基因在肿瘤细胞内特异性 高效表达,如图2。这种结合病毒治疗与基因治疗优点的新型治疗方案称为基因 病毒治疗法。它克服了传统基因治疗转染率低、表达量少及靶向性弱等缺点。 3 第二军医大学 中 文 摘 要 博士学位论文 倍,对于HT29则可增殖数—,-MeWWeqffngtlNps)ec-’----M 千至数万倍,对于SW620、__”_囚冈回匕释踞婉篷;凿 辟 则可增殖数十万至百万——-”、、。 赖掺贿滋酚沈问阀回键羽用回翻 倍。对于同一种大肠癌细-’-M大憋人店溯圃辫 一j凶酪 胞,ONYX-015增殖作用明’穆巅踢广\摔刀回阑回口口回蹈憋 显强于*h几-12,可能与。、—。;。_:__一鹰褡《翘酚y赡回圈囫口回回回回邀蹬 Mh几-12中n区病毒基-”,--.:__风脉缀廖 憾圆回回回口回口回回圈回 因缺失有关。Ad’mILIH.。A回勋稻颖额、一。回回团口口回回回回回回 在三种大肠癌细胞中均有_____酚圈幽翻濒镶酚\耀工圃蹬瞪回愚缀回m憾上 大量IL-12 蛋白表达。__。、。__、_WHtasNwrs----ruH---- HT29、SW620细胞培养上 刃圃圈械濒圃趟圃n卜措瞧酸攀毅炒--了\飞鞠 清蛋白表达量明显高于 一一澜髓圈圈猫圃圃凶回回回圃螂d7e,___ 06细胞。兔疫组化和电 图;病毒在盯”大。肿瘤细胞核内大量复制(UXI。皿〕 镜检查证明Ad’mIL-12在 人大肠癌细胞中确实能够完成正常增殖周期,能脱壳进入细胞核并大量复制,能使 目的基因在肿瘤细胞内大量拷贝;如图3。 3.肿瘤特异性增殖型腺病毒携带mIL-12基因治疗大肠癌的体内实验研究 ONYX-015对BALB/C小鼠C26大肠肿瘤有较弱的治疗作用,使肿瘤生长减缓; 对于应用人的大肠癌细胞株HT29、SW620建立的荷瘤裸鼠有一定的治疗作用,肿瘤 生长明显减慢。肿瘤特异性增殖型腺病毒载体携带IL-12基因可使基因在人大肠癌 动物模型中大量扩增,外周血 IL-12蛋白表达量数千倍提高。在 BALB/C小鼠大肠 癌模型中增殖力较弱,但IL-12蛋白表达也明显增高。三组动物实验组以荷C26大 肠癌的BALB/C小鼠治疗效果最好,在高剂量治疗组达到肿瘤全部消退。肿瘤特异 性增殖型腺病毒载体携带几-12基因治疗大肠癌可产生双重协调作用,发挥病毒扩 增杀伤肿瘤细胞作用,IL-12则可调控机体免疫功能。在BALB/C小鼠大肠癌模型 中,主要治疗作用源于几-12。在裸鼠大肠癌模型中,治疗作用是病毒扩增杀伤和 几-12蛋白抗肿瘤双重作用,但由于T淋巴细胞缺陷,IL-12调节免疫功能不能充 分发挥。如果应用于人体大肠癌的治疗,病毒治疗和几-12治疗将同时充分发挥作 用。肿瘤特异性增殖型腺病毒载体携带几-12基因治疗仍然不能完全达到靶向性基 因治疗效果,高滴度治疗则有严重副作用,因而有必要进一步进行基因表达的调控 研究。 5第]军医大学 中 文摘要 I4十学位论文 一 本研究成果和结论如下: 1.完成mIL刁 融合基因的构伎 完成肿瘤特异性增殖型腺病毒载体的构建。 2 完成肿瘤特异性增殖型腺病毒携带mIL-12基回即Ad’mIL-12的重组。 3.体外实验表明Ad’m1L-12对大肠肿瘤细胞感染力、增殖能力、杀伤力均较 ONYX-015稍弱,可能与Ad’mIL-12中 E3区病毒基因缺失有关。 4.体外实验证明Ad’m1L-12在人的大肠癌细胞中能够大量复制,增殖可达百 万倍,mIL-12蛋白表达量可提嵩上干倍。增殖型腺病毒载体系统类似于体 内工厂,能大量提高蛋白表达量。 5.体内实?
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R735.34

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【参考文献】
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【共引文献】
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