收藏本站
《第二军医大学》 2001年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

单核细胞衍生的巨噬细胞应用IFN-γ和Lps处理的抗肿瘤实验研究

黄志强  
【摘要】:单核/巨噬细胞是一类重要的免疫效应细胞,在人体抗肿瘤免疫中发挥重要作用。目前国外已有单核/巨噬细胞Ⅰ期临床试验的报道,而国内关于人体单核/巨噬细胞基础临床及动物实验方面的资料尚系空白。本实验以外周血为原料,首次观察了人体单核/巨噬细胞的体外分离、纯化、增殖、激活及体内体外抗肿瘤效应,比较了单核/巨噬细胞与LAK细胞的体内抗肿瘤活性差异,检测了单核/巨噬细胞培养上清中及细胞中TNF-α及IL-12的含量,并观察了单核/巨噬细胞培养上清对荷瘤小鼠的体内抗肿瘤效应。旨在对单核/巨噬细胞的抗肿瘤功能作一基础性研究,为今后单核/巨噬细胞的临床应用打下一定的理论基础。 实验方法:我们采用CS-3000 Plus血细胞分离机采集了7位肿瘤病人经化疗及G-CSF动员后的外周血单个核细胞,以密度梯度离心及贴壁法分离及纯化外周血单核细胞,以GM-CSF1000U/ml作单核/巨噬细胞对比增殖实验;以台盼蓝染色法检测细胞活率;以非特异性酯酶染色法鉴定单核细胞;以流式细胞技术检测单核/巨噬细胞表型以判断细胞分化程度;以透射电镜对培养8天单核/巨噬细胞进行形态学观察:以[’H]TdR掺合法检测单核/巨噬细胞对K562靶细胞的体外静止细胞毒活性;采用皮下预先注射的方法以观察激活巨噬细胞对接种K562靶细胞的生长抑制作用;采用瘤内注射法观察单核/巨噬细胞对菏瘤小鼠的体内抗肿瘤活性并与LAK细胞比较;采用Elisa法检测单核/巨噬细胞培养上清中TNF-α及IL-12的浓度;以Western-blot法检测单核/巨噬细胞中TNF-α及IL-12的含量;以激活巨噬细胞培养上清对菏瘤小鼠行腹腔注射观察细胞培养上清的体内抗肿瘤活性。 结果:1、采用CS-3000 Plus血细胞分离机可大量采集外周血中的单核细胞,在采血量为10000-12000ml时,平均每次单核细胞采集量为5.8×108[(0.83-11.75)×108],其数量可满足实验要求。2、GM-CSF可刺激单核/ 第二军医大学 博士学位论文 巨噬细胞轻度增殖,单核/巨噬细胞经GM(sF刺激后可扩增5乃倍(P<o.05人 3、台盼蓝染色法证明培养第2天及第8天的单核l巨噬细胞活串均大于90%。 4、非特异性酯酌染色显示外周血贴壁细胞胞浆广泛深染,并有棕褐色颗粒, 证明贴壁细胞为单核细胞。5、流式细胞表型检测显示外周血贴壁细胞高表 达*D14抗原,培养吕天及经过1*冲YO00*偷1)和u9*咖u联合刺激后 大部分己经分化成熟。6、培养吕天的单核l巨噬细胞透射电镜观察显示胞浆 内丰富的内质网、线粒体及溶酶体,显示细胞活跃的吞噬和分泌功能。7、 单核/巨噬细胞体外静止细胞毒试验证明单核l巨噬细胞具有明显的抗肿瘤活 性,其抗肿庙效应存在剂量一效应依赖关系,在效/靶比=8:1 时其抗瘤活性 达到最大值:!FN·丁a00*八n1)和**8山glinlm!)均可活化单核J巨噬细胞,增强 其抗肿瘤活性(P功.05入 其对巨噬细胞的活化作用两者之间无显著差异 (P叩刀5hWNWN.可+*PS 联合刺激可进一步提高巨噬细胞抗肿瘤活性 (P<o.01)。吕、激活巨喧细胞的预防注射可显著减少肿瘤的发生(P<o.05)。 9、单核/巨噬细胞及LAK细胞均有明显的体内抗肿盾活性,以微活巨噬细胞 及活化LAK细胞瘤内注射的菏瘤小鼠组肿瘤平均面积及瘤重均显著小于对 照组(P<0刀1及P<0刀5):在同一效/M比条件下,激活巨噬纫胞抗肿鹰活性 强于**K细胞(P<o.05);病理切片显示巨噬细胞组庙结广泛坏死,残留肿 瘤组织很少,伴弥漫性淋巴细胞浸润;LAK细胞组瘤结有轻到中度坏死,局 部淋巴细胞浸润:而对照组瘤结肿瘤细胞呈旺盛生长态势,伴点状坏死,无 淋巴细胞浸润。10、Elisa法测定细胞培养上清中 TNF a及 IL.12浓度显示 LPS0ug/ml)可显著增强单核/巨噬细胞对WP山及IL12的分泌,LPS组细 胞上清中TNF·Q及IL-12浓度显著高于对照组(P<0.of及P<0.05)。IFN.Y (200U/m)对单核/巨噬细胞的此种刺激作用不明显,但和LPS*U咖l)有协同 作用,可强烈刺激单核 l巨噬细胞分泌 iF a及 ILd,IFN·Ya00Ulml)+ LPSOuglml)联合处理组细胞上清中TNF a及IL12浓度显著高于对照组 (P<0.00)。11、Western.blot法测定单核l巨噬细胞中 hF.口及肌.12含量 4 第二军医大学 博士学位论文 同样显示LPS*ug/ml)可显著刺激单核/巨噬细胞对该两细胞因子的合成,IFN- m仅00U/ml)单独刺激作用不明显,但和 LPS有协同作用,可明显提高细胞中 TNF a及 IL-12的含量。12、激活巨噬细胞培养上清有明显抗肿瘤作用,腹 腔注射激活巨噬细胞培养上清组小鼠瘤重显著小于对照组(P<0刀5),生存时 间显著高于对照组(P<0刀5)。 结论:l、采用 CS-3000 PISS血细胞分离机可大量采集外周血中的单核 细胞,为单核/巨噬细胞的实验研究提供了一条行之有效的细胞采集方法。二、 GMcSF可刺激单核/巨噬细胞轻度增殖。3、单核/巨噬细胞具有明显的抗肿 瘤效应。4、IFN-mC00U/ml)及 L
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R73-36

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王春连,刘久山,李建国,彭华生;肺癌患者可溶性白细胞介素2受体的研究[J];癌症;1995年04期
2 罗慧玲,蔡体育,陈巧伦,梅承恩,李永强,黄民权;石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究[J];癌症;2000年12期
3 陈小冰,吕江清,李德宪,陈志宏,谭毅刚;三种药物腔内注射治疗恶性胸腔积液临床分析[J];癌症;2001年12期
4 陈治文,夏俊,刘爱国,何天源;肿瘤浸润性淋巴细胞的体外培养及对肿瘤细胞的杀伤作用[J];蚌埠医学院学报;1997年02期
5 陈治文,夏俊,刘爱国;脐血淋巴细胞的体外培养及对肿瘤细胞的杀伤作用[J];蚌埠医学院学报;1997年04期
6 张秋业,邹巧云,袁桂芬,王学华,耿新杰,王守亮;新生儿脐血可溶性白细胞介素-2受体的检测[J];青岛医学院学报;1994年03期
7 强新,于王交,宋修歧,丁守怡;CD_3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究[J];青岛医学院学报;1998年03期
8 许瑞吉,王国洪,张中书,施益群,赵技文;儿童肾脏病患者血清白介素-2、白介素-6和胰岛素样生长因子-Ⅱ检测及其临床意义[J];标记免疫分析与临床;2003年04期
9 黄国伟,孙晓光,吴元芳,张雨龙,陈可靖,周瑞菊,庄道玲;白细胞介素2的放射免疫分析研究[J];标记免疫分析与临床;1996年02期
10 Tomoyuki Kawada;;The Mechanism of Organophosphorus Pesticide-Induced Inhihition of Cytolytic Activity of Killer Cells[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 王志华;;Interleukin 12抗肿瘤免疫研究的新进展[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
2 王炳旭;丛志强;;重症肌无力患者血清可溶性白细胞介素-2受体的研究[A];职工医院医学理论与实践[C];1998年
3 唐承汉;阎春霞;刘明俊;;细胞免疫与慢性人体阿片依赖[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 熊鹏;血清细胞因子与精神分裂症的关系以及在诊断中的应用研究[D];云南大学;2011年
2 韩凤娟;海马生髓丸对妇科恶性肿瘤减毒增效、抗肿瘤免疫机理的研究[D];黑龙江中医药大学;2001年
3 赵广兴;通络助孕方对炎性不孕大鼠输卵管作用的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2002年
4 李学农;大肠癌HGF/SF-met信号通路转录诱导基因表达谱及阻断作用研究[D];第一军医大学;2002年
5 王琳琳;白细胞介素-2的心血管效应及其机制[D];浙江大学;2003年
6 马春全;益生菌制剂的研制及其对雏鸡免疫学影响和机理的研究[D];中国农业大学;2004年
7 淳泽;八珍汤对小鼠造血功能影响的机制研究[D];四川大学;2004年
8 马玲娣;中药苦参碱抗肿瘤作用的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
9 万文菊;剑尾鱼HSP70家族两成员的分子克隆及溶藻弧菌感染与免疫对其基因的诱导表达[D];山东农业大学;2006年
10 姜晓峰;核苷转运抑制剂6011W-A和大黄素抗肿瘤作用的研究[D];中国协和医科大学;1998年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王芍;葡萄籽糖蛋白的提取纯化及免疫活性研究[D];西北大学;2011年
2 黄志宏;安络小皮伞镇痛有效部位的药效筛选研究[D];广州中医药大学;2011年
3 郭宁宁;肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及T细胞功能的研究[D];广东药学院;2011年
4 王彦超;当归不同炮制品多糖含量的比较及其对血虚模型鸡造血机能的影响[D];河北农业大学;2012年
5 吴维光;紫杉醇对淋巴细胞作用的基础和临床研究[D];第一军医大学;2001年
6 张俊才;不同佐剂对卡介苗的特异性体液免疫与非特异性细胞免疫的免疫增强作用的研究[D];新疆农业大学;2001年
7 高峰;1.白细胞介素-2的中枢心血管效应及其机制探讨 2.延髓最后区对大鼠心血管功能的调节[D];浙江大学;2002年
8 徐炳森;草鱼白细胞介素-2基因克隆、序列分析及其在原核细胞中表达的研究[D];浙江大学;2001年
9 李勇;围手术期应用槐耳颗粒诱导的食管癌肿瘤细胞凋亡及对患者免疫功能影响的研究[D];河北医科大学;2002年
10 史云;盆炎方对肾虚血瘀型慢性盆腔炎免疫学影响的临床与实验研究[D];山东中医药大学;2002年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭畹华;大脑皮质神经组织体外培养的初步观察[J];新医学;1973年01期
2 王文兴;补体系统的研究进展[J];安徽医科大学学报;1974年02期
3 涂洪章;;组织细胞病[J];国外医学.内科学分册;1974年03期
4 赵玉骅;急性硬化性全脑炎病例(SSPE)时细胞免疫功能的研究[J];国际流行病学传染病学杂志;1976年04期
5 夏佩莹;巨噬细胞对人恶性细胞的破坏作用[J];蚌埠医学院学报;1978年S1期
6 马佳毓;刀豆素A(ConA)对低浓度小鼠脾淋巴细胞的刺激——腹腔渗出细胞的作用[J];国际免疫学杂志;1983年05期
7 叶文源;自身免疫性溶血性贫血[J];中国医师进修杂志;1987年06期
8 何成雄;;中毒性表皮坏死松解症病理中的巨噬细胞[J];国际皮肤性病学杂志;1987年01期
9 尚红生,丁桂凤,邓玉兰,邓鸿业,龙振州;P388D_1传代细胞株产生IL-1效应的初步探讨[J];中国免疫学杂志;1988年01期
10 于一,郭艳茹,孟繁菁,岳旭;巨噬细胞在激活过程中形态和功能的改变[J];解剖学杂志;1988年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 柴婵娟;杨志明;康玉明;肖传实;;核因子-κB信号途径介导血管紧张素Ⅱ诱导THP-1巨噬细胞基质金属蛋白酶-9的表达[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
2 吴南屏;常秀春;姚航平;李丹;冯磊;;RANTES蛋白对SARS病毒感染巨噬细胞的抑制效应及机制[A];2006年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2006年
3 梁华平;韩健;吴丹;徐祥;王正国;;创伤小鼠腹腔巨噬细胞自噬活性降低[A];全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2007年
4 尤胜义;寇丽;费乃昕;马春蕾;;重症急性胰腺炎大鼠脾脏巨噬细胞Toll样受体4的表达与内毒素耐受[A];中华医学会第十一届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2006年
5 刘星光;姚鸣;李楠;王春梅;郑媛媛;曹雪涛;;钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ通过结合并活化TAK1和IRF3加强巨噬细胞中TLR配体诱导的炎症因子和Ⅰ型干扰素的产生[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
6 张伟;周寿红;凌宏艳;姚起鑫;亓竹青;胡弼;;槟榔碱抑制氧化性低密度脂蛋白刺激巨噬细胞炎症因子的表达及其机制的初步探讨[A];湖南省生理科学会2008年度学术年会论文摘要汇编[C];2008年
7 陈均法;郑智茵;孔英;郭艳荣;沈建平;叶宝东;林筱洁;高瑞兰;周郁鸿;;硼替佐米对THP-1源性巨噬细胞抗原提呈能力的影响[A];2011年浙江省血液病学术年会暨浙江省医学会血液病学分会成立50周年庆典论文汇编[C];2011年
8 杨晓彤;任文智;马伟超;杨明俊;糜可;冯慧琴;杨庆尧;;云芝糖肽(PSP)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的双向免疫调节作用[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
9 张玲;江远;何金洋;郭兴伯;;铁沉积于巨噬细胞对TGF-β_1、iNOS、TNF-α mRNA表达的影响[A];中华中医药学会全国第十四次肝胆病学术会议论文汇编[C];2010年
10 周勇;夏泠;周亚娟;何忠时;谢丛华;;电离辐射对RAW264.7细胞系MMP-9基因表达的影响[A];湖北省抗癌协会青年委员会成立大会暨第一届青年学术论坛资料汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年
2 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年
3 张中桥;白藜芦醇可抑制巨噬细胞释放细胞因子[N];中国中医药报;2007年
4 ;以临床实验治疗瘫痪新法[N];中国医药报;2000年
5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年
6 卢苏燕;艾滋病毒怎样钻进免疫“肚子”[N];新华每日电讯;2007年
7 卢苏燕;HIV破坏免疫系统机制被揭示[N];医药经济报;2007年
8 李东方;咖喱可预防早老性痴呆[N];中国中医药报;2007年
9 本报记者 杨珂;了解我们的体内“卫士”——免疫系统[N];中国消费者报;2001年
10 广东省农科院 黄忠 博士;猪群健康生产要靠什么?[N];中国畜牧兽医报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 章宏;1.人巨噬细胞金属弹性蛋白酶在胃癌细胞及胃癌组织中的表达及临床意义 2.胃癌和结肠癌患者二氢嘧啶脱氢酶基因多态性与5-FU代谢及临床意义探索[D];浙江大学;2006年
2 王玉珍;溶酶体相关的小G蛋白Rab7b负向调节巨噬细胞Toll样受体信号转导的研究[D];浙江大学;2006年
3 杨洋;DcR3干预肺纤维化动物模型及其转染人成纤维细胞的实验研究[D];吉林大学;2009年
4 刘灏;巨噬细胞再极化[D];重庆医科大学;2011年
5 肖卫华;过度训练及补充谷氨酰胺对大鼠腹膜巨噬细胞功能的影响及机制研究[D];上海体育学院;2012年
6 马翠卿;GAS下调巨噬细胞炎症因子的作用及机制研究[D];河北医科大学;2011年
7 鞠瑞;羧胺三唑的抗癌新机制抑制肿瘤相关巨噬细胞中促炎细胞因子的释放[D];北京协和医学院;2011年
8 高飞;年龄相关性巨噬细胞极化对骨修复再生作用的研究[D];华中科技大学;2013年
9 朱继峰;IL-7抑制巨噬细胞凋亡的机制研究[D];南京医科大学;2012年
10 尚嫄嫄;Tribble3在动脉粥样硬化巨噬细胞凋亡中的作用及其信号转导通路[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 余琦琦;壳寡糖与巨噬细胞结合特性的研究[D];浙江大学;2002年
2 冯洁;壳寡糖与巨噬细胞结合特性的研究[D];浙江大学;2004年
3 田美玉;复发性口腔溃疡粘膜组织中肥大细胞和巨噬细胞的研究[D];山西医科大学;2004年
4 龙飞;糖皮质激素对巨噬细胞快速非基因组作用的研究[D];青岛大学;2005年
5 徐启华;玉屏风散转化液对小鼠相关免疫功能影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2005年
6 武多娇;炎症细胞在自发性高血压大鼠心肌纤维化中的作用及苯那普利的干预研究[D];福建医科大学;2005年
7 徐宗华;胸苷磷酸化酶在人脑胶质瘤中的表达、分布及临床意义[D];四川大学;2005年
8 梅智谋;巨噬细胞与血管内皮生长因子在平滑肌肿瘤的表达及意义[D];武汉大学;2005年
9 杨维娜;子宫内膜异位症中单核—巨噬细胞分泌白介素-1α、β和干扰素-γ水平的研究[D];天津医科大学;2006年
10 李永军;糖基化终产物对巨噬细胞MMP-9表达与活性的影响及其机制的初步研究[D];中国医科大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026