雪旺细胞源性神经细胞粘附分子L1对损伤脊髓修复作用的研究
【摘要】：
神经细胞粘附分子L1（L1）是80年代发现的具有促进神经再生作用的物
质，它能介导神经细胞与神经细胞之间的粘附，在神经轴突的生长、聚集，神经
细胞的转移，纤维髓鞘的形成，神经通路的构建及信号的转导，抑制神经细胞的
凋亡甚至在免疫系统、肿瘤的发生等方面均具有非常重要的作用。L1最初是从
小鼠的小脑膜中发现，后来发现在有丝分裂后的神经元，髓鞘形成前及非形成髓
鞘的雪旺细胞等组织中同样存在。对于L1的研究，目前主要集中在分子生物
学、细胞生物学的方面，而对于其动物机体内的生物学效应情况研究则相对较
少。本实验的目的是利用Schwann细胞具有合成L1的特性，将通过细胞培养获
得的Schwann细胞经L1抗体封闭后移植于脊髓半横切损伤的部位，从形态学、
电生理学、免疫组化等方面进行观察，来了解雪旺细胞源性L1对损伤脊髓的修
复作用，以探索一个治疗脊髓损伤新的途径，并为其过渡到临床应用提供可靠的
实验依据。
本实验的主要研究内容及结果如下：
1、雪旺细胞的培养及免疫组化染色 利用新生S-D大鼠的坐骨神经成功地
分离、培养获得了纯度较高的雪旺细胞，并将雪旺细胞移植进入大鼠脊髓损伤创
面，饲养8周后经过S-100免疫组化ABC染色发现雪旺细胞在大鼠体内成活良
好并成簇排列。培养的雪旺细胞经过免疫组化法证实了雪旺细胞表面有L1的存
在。
2、动物模型的建立 实验成功地建立了脊髓半切损伤的S-D大鼠模型，经
过HE染色证实了动物模型是完全符合实验要求的。
3、行为学观察 通过改良Rivlin法斜板试验及BBB评分法从行为学角度对
脊髓损伤后不同处理条件下大鼠肢体功能的恢复情况进行观察，结果显示：雪旺
细胞移植组大鼠脊髓损伤后下肢功能恢复最为理想，抗体封闭L1后大鼠的肢体
功能恢复受到影响，但仍较空白对照组恢复好。
4、电生理学检测 利用电生理对大鼠的SEP及MEP等方面进行监测，结
贫二旱巨大学刃士学位协文
果显示脊髓半切损伤后，L！封闭组大鼠的 SEP及 MEP的潜伏期及波峰的恢复
与雪旺细胞移植组相比受到抑制。
5、神经纤维的兔疫组化染色 脊髓半切损伤后，经NF的免疫组织化学技
术染色显示：移植雪旺细胞可以促进神经纤维向脊髓损伤区域生长，抗体封闭
LI后神经纤维的生长受到抑制，再生神经纤维数相对减少，这从免疫组织化学
方面说明口对神经再生具有影响。
6、神经纤维的示踪 实验利用 Hop对神经纤维示踪能直观地显示出：脊髓
损伤部位移植雪旺细胞后，在8周时再生的神经纤维数相对较被＊被抗体封闭
组多而且集中，对照组未发现有再生神经纤维通过脊髓损伤区。
实验结果显示：LI具有促进损伤脊髓的修复、再生作用，雪旺细胞对神经
再生的促进作用部分是＊在起作用，缺少口作用的雪旺细胞其促进神经修复
的功能将受到抑制。此研究结果为曰的进一步深入研究打下了基础。
【关键词】：脊髓损伤 再生 雪旺细胞 神经细胞粘附分子L1 Rivlin斜板试验 BBB评分 MEP SEP NF HRP 【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R651.2
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2001.003242
【目录】：
- 英文缩写简表4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-10
- 前言10-14
- 第一部分 雪旺细胞的培养及免疫组化染色14-26
- （一） 雪旺细胞的培养14-21
- 实验材料14-16
- 实验动物16
- 雪旺细胞提取操作步骤16-17
- 细胞的培养及纯化17
- 种植细胞的提取及细胞计数17-18
- 实验及细胞形态观察结果18-19
- 讨论19-21
- （二） 神经细胞粘附分子L1的细胞免疫组化染色21-25
- 实验材料21-22
- 细胞标本制备22-23
- 免疫组化染色流程23
- 实验结果23
- 讨论23-25
- 参考文献25-26
- 第二部分 脊髓损伤模型的建立和标本的收集26-33
- （一） 模型的建立26-29
- 实验材料26
- 实验动物26
- 麻醉26
- 手术步骤26-27
- 结果27-28
- 讨论28-29
- （二） 标本的收集29-32
- 实验材料29-30
- 实验动物30
- 实验步骤30-31
- 标本固定操作注意点及讨论31-32
- 参考文献32-33
- 第三部分 神经细胞粘附分子L1对大鼠脊髓损伤后行为学影响33-41
- 实验材料33
- 实验动物33
- 实验方法33
- 评定方法及标准33-35
- 统计学处理35
- 结果35-37
- 讨论37-39
- 参考文献39-41
- 第四部分 神经细胞粘附分子L1对大鼠脊髓损伤后SEP及MEP的影响41-50
- 实验材料41
- 实验动物41
- 实验方法41-42
- 实验统计处理42
- 实验结果42
- 讨论42-45
- 参考文献45-50
- 第五部分 神经细胞粘附分子L1对脊髓损伤后脊髓的免疫组化改变50-56
- 实验材料50
- 实验步骤50
- 实验结果50-52
- 实验讨论52-54
- 参考文献54-56
- 第六部分 神经细胞粘附分子L1对脊髓损伤后的HRP示踪观察56-64
- 实验材料56-57
- 实验动物57
- HRP的注射步骤57-58
- 染色实验步骤58
- 实验结果58-61
- 讨论61-62
- 参考文献62-64
- 结论64-65
- 致谢65-66
- 综述66-73
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