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《第二军医大学》 2002年
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阵列文库及阵列文库消减杂交用于肝癌相关基因筛选、表达和转录调控的初步研究

满晓波  
【摘要】: 原发性肝癌的研究在我国基础和临床医学研究中占有重要的地位,肝癌相关基因的克隆、鉴定、表达检测和转录调控对于从基因水平认识肝细胞的生长、分化、再生和恶变的分子机理、阐明其信号转导过程和途径,不仅具有重要的研究意义,而且对于肝癌的早期基因诊断和治疗具有重大的临床应用价值和经济利用价值。本文建立了基于DNA阵列的阵列文库消减杂交技术(Arrayed Library Subtraction Hybridization,ALSH)。以此技术结合基因芯片技术用于cDNA文库的大规模高效基因筛选,将之应用于肝脏cDNA文库的小规模的验证性研究得到了相当数量的已知基因、已知EST和一个新基因克隆;结合肝癌表达谱检测进行了肝癌相关基因的差异表达研究。阵列文库消减杂交结合体内染色质免疫沉淀可以进行全基因组尺度内的转录因子调控序列检测,我们进行了较小规模的验证确定了这一平台的有效性和实用性,进行了肝癌细胞经丝裂霉素处理后核转录因子NFкB的表达和结合位点检测,获得NFкB在此状态下的结合位点序列克隆的阵列文库,得到一些新的受NFкB调控的下游基因的启动子结合序列。 第一部分 阵列文库及阵列文库消减杂交用于肝癌相关基因筛选和差异表达的研究 利用平均插入子大小1.60kb的真核表达载体pcDNA3.1正常肝脏质粒文库制备阵列文库,利用BioRobotics TAS多功能基因芯片点样仪进行肝脏阵列文库消减杂交。利用阵列文库和经消减杂交筛选的基因制备基因芯片用于肝癌表达谱检测。制备了大鼠原发性肝癌模型用于基因表达检测。 结果显示,肝脏阵列文库消减杂交得到了相当数量的已知基因和一个新基因片段,利用单链环化反向巢式PCR进行5’RACE得到一个极低丰度的新基因 搏士学位论文 阵列文库及阵列文库消减杂交用于 中文摘要 —— 拙W。肝癌表达谱基因芯片检测发现一个肝癌中相对癌旁组织特异性高表达的 mxr7基因和肝癌中不表达的CypZel基因。大鼠原发性肝癌模型模拟了从肝脏化 学性炎性损害、肝硬化、肝癌早期和肝癌晚期的各个阶段。mxr 7基因的大鼠同 源基因OCi-5在正常大鼠正常肝脏中表达极低,在大鼠肝癌组织中OCi-5表达急 剧升高,随着肝癌的进展表达逐渐上升,在肝硬化阶段OCi-5的表达高于正常肝 脏,在整个肝癌的发生发展过程中oci巧的表达是逐渐升高的。CypZel基因在人 肝硬化中的表达低于正常肝脏,而在肝癌中则几乎是完全不表达,在大鼠肝癌发 生发展过程的变化同OCi.5相反,表达明显下降直至几乎完全不表达。 结果提示,阵列文库消减杂交的方法可以高效筛选CDNA文库,得到文库中 的所有基因克隆。可以用极低的人力物力和财力达到同整个文库随机测序相同的 结果,利用阵列文库消减杂交从某种特定的生物、组织或细胞的CDNA文库中 筛选全部表达基因具有极大的应用价值,不但可以应用于本项目的肝脏和肝癌文 库筛选,还可以广泛地应用于其他领域的基因克隆工作。小规模的验证性研究中 得到了一个新基因m丁,这个基因是一个低表达基因,正在进行进一步的研究。 mxr7的大鼠同源基因oci-5基因同肝癌的演化关系密切,并且在肝癌早期已经发 挥其相应的功能,在肝癌的癌前病变时期即肝脏的炎性损害阶段和肝硬化阶段的 表达说明OCi-j基因表达上调在肝癌发生之前尤其是严重肝硬化时就己经发生, 提示OCi-5基因不但可以作为肝癌的诊断指标,也可以作为肝癌癌前病变的指标, 能够在肝硬化时期作出肝癌高危人群的预警。CypZel在肝癌细胞中可能是完全关 闭的,并且也随着肝硬化和肝癌的进展而逐渐降低。mxr沏dociJ基因和 CypZel基因与肝硬化和肝癌的发生发展密切相关,在肝癌的演化和进展过程中起 重要作用,并且提示可能会具有重要的诊断和理论研究价值。 第二部分 阵列文库消减杂交结合染色质免疫沉淀方法用于基因转录调控的 研究 转录调控是基因功能研究中的重点,转录因子对靶基因的结合和调控是转 录调控中的主要研究内容,染色质免疫沉淀方法可以进行体内转录因子的结合序 列的状态与变化的检测的新的强有力工具。结合我们的阵列文库消减杂交技术可 以在包括人类在内的复杂基因组中进行全基因组尺度内的大规模转录调控序列 的研究。我们建立了这样一个研究平台,进行了较小规模的验证确定这一平台的 有效性和实用性,同时进行了肝癌细胞 SK-HEP经丝裂霉素刺激后 NF出的表 达和结合位点检测,从而探讨其在肝癌化疗药物耐药中的作用,得到一些NFth 在此状态下的结合位点和受调控的下游基因。 结果显示,50冷ml丝裂霉素使 NF。B进入细胞核,而且在 8 /J’时细胞内 5 博士学位论文 阵列文库及阵列文库消减杂交用于 中文摘要 肝癌相关基因筛选、表达和转录调控的初步研究 NF。B总量增加,提示 NF。B自身的表达增加。Western Blot检测丝裂霉素处 理后不同时间内总蛋白中的 NF K B含量升至较高水平,RTPCR方法检测 NF。 B的基因表达
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.7

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 蔡学君,张学庸,樊代明;胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验[J];第四军医大学学报;1994年02期
2 蔡静莉,李昌本,赵寿元;鉴别差异表达基因的新方法──抑制消减杂交法(SSH)[J];生命科学;1998年03期
3 梁永钜,周昕熙,潘启超,冯启胜;肝癌体外药物敏感性试验[J];肿瘤;2001年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 佘美华,陈蓓蓓,王西明,何善述;褪黑素对小鼠肝癌H22细胞抗增殖和促凋亡的p53依赖性机制研究[J];癌症;2004年07期
2 袁庶强;周志伟;梁永钜;符立梧;陈功;Rajiv Prasad Keshari;张丽仪;;三维培养药敏实验测定的胃癌药物敏感性与多药耐药基因蛋白表达的关系[J];癌症;2009年04期
3 袁庶强;周志伟;梁永钜;符立梧;陈功;邱海波;张丽仪;;三维培养药敏实验测定的结直肠癌化疗敏感性与多药耐药基因蛋白表达的关系[J];癌症;2009年09期
4 卞伟;戴勤弼;童建国;阮健;;59份人脑胶质瘤组织体外培养的药敏分析[J];重庆医学;2010年18期
5 关宏伟;陈丹;时畅;唐建武;;胃癌细胞SGC7901/ADR耐药相关蛋白质分子的差异展示[J];大连医科大学学报;2009年04期
6 丁雅明;方廖琼;周兰;张弘;白晋;王智彪;;不同孕期小鼠羊水对小鼠肝癌细胞H_(22)增殖和凋亡的影响[J];第三军医大学学报;2008年12期
7 姚学清,卿三华,杨洋,秦斌,袁玮,夏琼;人大肠癌多药耐药细胞LoVo/5-FU的建立及其生物学特性的初步研究[J];第一军医大学学报;2001年01期
8 马清霞;周相华;刘守媛;赵娟;何玉乾;;抑制性消减杂交技术在动物疫病防控中的应用[J];动物医学进展;2010年05期
9 李垚,吴坤;细胞凋亡的效应器[J];国外医学(卫生学分册);2001年01期
10 张永亮;化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡和相关因子的调控[J];国外医学.遗传学分册;2002年03期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张琍;罗格列酮抑制胃癌细胞系的增殖、侵袭与逆转耐药机制研究[D];南华大学;2011年
2 王辉;柑橘黄龙病昆虫介体—柑橘木虱的研究及九里香感染黄龙病菌后的差减文库构建[D];华中农业大学;2011年
3 罗璇;大豆胞囊线虫不同生理小种的致病性及其分子基础研究[D];沈阳农业大学;2011年
4 王新;胃癌SGC7901细胞多药耐药相关新蛋白和基因的筛选及鉴定[D];第四军医大学;2001年
5 李慎菁;gpc3/mxr7基因在肝癌发生、发展中的生物学功能研究[D];第二军医大学;2002年
6 韩全利;Ss-A/Ro核蛋白60KD亚单位在胃癌多药耐药中的功能及机制研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 张宇梅;转录相关锌带蛋白基因ZNRD1在胃癌耐药细胞中的表达和功能分析[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 杜静平;PrP~C和RPL6/Taxreb107与胃癌多药耐药的相关性及其作用机制的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 马洁;六神丸诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因的影响[D];天津中医学院;2003年
10 马洪明;栉孔扇贝血细胞形态学研究和抗病功能基因的克隆[D];中国海洋大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李娜;败酱有效部位PHEB抗肿瘤作用及其作用机理的研究[D];浙江中医药大学;2010年
2 何利华;鸭梨采后多酚氧化酶(PPO)同工酶及基因与果实褐变关系的研究[D];石河子大学;2010年
3 颜克兰;肿瘤药敏试验及其临床意义的研究[D];广西医科大学;2011年
4 王维;罗格列酮诱导人胃癌多药耐药细胞裸鼠移植瘤中胃癌细胞凋亡的作用及其机制[D];南华大学;2011年
5 李德锋;罗格列酮抑制耐药人胃癌裸鼠移植瘤血管生成的作用及机制[D];南华大学;2011年
6 孙凌;肺癌、乳腺癌患者外周血淋巴细胞体外MTT法药敏试验的研究[D];石河子大学;2009年
7 任晓亮;虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)闭壳肌积累类胡萝卜素相关基因的筛查[D];中国海洋大学;2011年
8 马煜;p53、p16、bc1-2及bax在胃癌中的表达及其临床意义[D];浙江大学;2001年
9 王靖雪;转移野生型p53基因治疗血液肿瘤细胞株K562的体外研究[D];重庆医科大学;2002年
10 苏伟;香蕉采后果实成熟特异表达基因的分离与鉴定[D];华南热带农业大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 梁永钜,潘启超,麦伟源,闵华庆;鼻咽癌体外药物敏感性试验方法的初步研究[J];癌症;1996年03期
2 俞悦,文跃进,郑肇巽;多药耐药基因MDR1在原发性肝癌组织中表达的意义[J];肝胆外科杂志;1998年01期
3 康毅滨,柴建华;人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望(续前)[J];生物工程进展;1996年01期
4 傅建民,张伟,彭向红,金顺钱,赵东兵,冯强,邵永孚;多药耐药相关蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义[J];中华普通外科杂志;1999年01期
5 宋述梅,毛永荣,周济兰,张先林;P-糖蛋白在肝脏病变中的表达及其临床意义[J];肿瘤防治研究;1999年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 焦辉;郭春良;;血管生成素及受体-2对肝癌血管新生的作用[J];武警医学院学报;2007年01期
2 张力图;黄少珍;郭建霞;张丽生;;肝癌高发区不同饮食类型人群的外周血淋巴细胞染色体畸变分析[J];广西医科大学学报;1993年01期
3 张启南,陆培新,王金兵,吴燕,陆振宏;原发性肝癌高危人群前瞻研究[J];肿瘤研究与临床;1996年02期
4 白咸勇,贾秀红,成令忠,顾云娣,刘同慎;c-fos蛋白在大鼠肝癌发生中的表达及意义[J];滨州医学院学报;1997年04期
5 路建平;肝细胞生长因子与肝癌[J];肝脏;1999年04期
6 张江灵,王崇国;干扰素和白细胞介素-2治疗乙型肝炎甲胎蛋白异常升高者对降低肝癌发生率的前瞻性研究[J];实用肝脏病杂志;1999年01期
7 俞顺章,穆丽娜;乙型肝炎与肝癌[J];上海预防医学杂志;2005年09期
8 周峥珍,章宗籍,钱忠义,张华献,申丽娟,谢桂先;DEN诱发大鼠肝癌模型的实验病理研究[J];昆明医学院学报;2005年03期
9 叶新平;彭涛;黎乐群;;毒物代谢酶、DNA修复基因多态与肝癌遗传易感性[J];卫生研究;2006年06期
10 傅锦波;王效民;;DLC-1与肝癌关系研究[J];现代生物医学进展;2007年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郑树森;;肝癌的预防和治疗[A];第十三届中国科协年会第18分会场-癌症流行趋势和防控策略研究研讨会论文集(补充)[C];2011年
2 曹骥;卢晓旭;胡艳玲;李瑗;朱伶群;杨春;唐艳萍;欧超;张春燕;;利用基因富集及元分析初步筛选影响肝癌发生发展的关键基因[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
3 吴同玉;;中医“治未病”思想在肝癌防治中的运用[A];第十二届中国科协年会22分会场——“中医药在重大公共卫生事件中的地位和作用论坛”论文集[C];2010年
4 徐昌志;孙韩艳;黄蓓;;低剂量藻毒素MC-LR促肝癌发生作用及机理探讨[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
5 袁文丹;王东;;VEGF与细胞周期启动在肝癌发生发展过程中的作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
6 乔鹏;钦伦秀;;TNFAIP3基因的高表达肝癌的转移复发存在相关性[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年
7 陈燕;林莺莺;胡敏华;;甲胎蛋白异质体在肝癌早期诊断和预警作用研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 张帆;朱源荣;孙宗棠;;乙肝病毒x基因在高发区肝细胞癌中的作用[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
9 曾小云;余红平;仇小强;纪龙;李龙嫚;;XRCC1基因多态性与肝细胞癌的病例对照研究[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
10 龚健;李荣成;杨进业;李艳萍;方孔雄;农艺;毕胜利;沈立萍;梁晓峰;;乙肝和肝癌高发的农村贫困地区实施新生儿乙肝疫苗普种22年保护效果[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 解放军302医院 刘士敬;四成肝癌酒精泡出来的[N];健康时报;2010年
2 通讯员 肖鑫 记者 陈青;发现肝癌预防判断潜在靶标[N];文汇报;2011年
3 戴欣 李伯安 记者 唐先武;新型肝癌检测试剂成功应用于临床[N];科技日报;2011年
4 张鹏 记者 唐先武;尽快建立完善肝癌规范化治疗方案[N];科技日报;2011年
5 中国科学院院士、上海东方肝胆外科医院教授 吴孟超;肝癌防治 中医药确有独到之处[N];健康报;2011年
6 吴志军 郝成涛;我国发现新的肝癌易感基因[N];中国医药报;2010年
7 记者 张晶;中美科学家携手发现肝癌抑癌基因[N];科技日报;2011年
8 指导专家 重庆医科大学附属第二医院感染病科教授 张大志 记者 苏云丽;AFP升高肝癌发生“第一信号”[N];医药导报;2009年
9 记者 徐琪忠 通讯员 肖鑫;肝癌生物治疗有了新靶标[N];中国医药报;2011年
10 新欣;乙肝表面蛋白有望“预告”肝癌发生率[N];医药经济报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张洪新;肝癌生物标本库的建立及应用[D];第四军医大学;2010年
2 李园;李佩文教授治疗肝癌的临床经验整理研究[D];中国中医科学院;2012年
3 朱政;肝癌干细胞表面标志物的鉴定与特性研究[D];复旦大学;2009年
4 瞿利帅;乙型肝炎病毒感染预后的危险因素研究[D];复旦大学;2011年
5 任传路;转录因子GATA4在小鼠肝脏发育和肝癌发生中的作用及相关机制探讨[D];第二军医大学;2005年
6 赵莹珺;乙酰胆碱酯酶在肝癌中的功能及其分子作用机制的研究[D];复旦大学;2010年
7 宋志;抑癌基因Tg737在肝癌发病机制中作用的初步研究[D];第四军医大学;2010年
8 李长煜;肝癌化疗栓塞术前后血清蛋白质组学研究[D];复旦大学;2010年
9 李聪;遗传变异和外科治疗策略与HBV相关性肝癌生存的关联研究[D];北京协和医学院;2014年
10 唐喆;索拉菲尼联合射频消融治疗肝癌的临床和实验研究[D];浙江大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩敏辉;NF-κB,Gadd45γ蛋白在肝癌中的差异表达及其意义[D];第四军医大学;2010年
2 黄文锋;HJURP基因多态性与HBV相关性肝癌遗传易感性的关联研究[D];广西医科大学;2011年
3 何平;广西肝癌高发区人群HBV复制水平、基因型及亚型与肝癌家族聚集性关系的研究[D];广西医科大学;2010年
4 姚家久;养阴抗毒法防治肝癌射频治疗术后反应的实验研究[D];第四军医大学;2010年
5 姚家久;养阴抗毒法防治肝癌射频治疗术后反应的实验研究[D];第四军医大学;2010年
6 刘忠山;咖啡因提高了同位移植LM3肝癌的放疗敏感性[D];吉林大学;2010年
7 吴二斌;TKTL1、TUM2-PK、PFKFB3在肝癌中的表达及临床意义[D];苏州大学;2010年
8 杨芬;肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立及其辐射效应研究[D];河北医科大学;2010年
9 许福源;gp78和KAI1在胃癌和肝癌中的表达及相关性研究[D];第三军医大学;2010年
10 黄菊香;基于功能模块计算的肝癌AFP、RRM2、NUSAP1和ACTN2分子网络构建及分析[D];北京邮电大学;2011年
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