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《第二军医大学》 2002年
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1.家蚕细胞瞬时表达人生长激素基因组DNA 2.昆虫细胞抗微生物肽启动子的诱导活性的研究

张昕泂  
【摘要】: 人生长激素是人垂体前叶分泌的重要激素,具有刺激骨骼生长和促进体内代谢的重要作用,其血中浓度的维持对机体适应环境和正常成长极为重要。基因工程表达人生长激素的主要意义也在于其除了能治疗侏儒症等先天遗传性疾病外,在老年人垂体萎缩的情况下,可作外源性补充,提高逐渐下降的血中生长激素的浓度。与原核表达系统和哺乳动物细胞表达系统比较,昆虫细胞表达系统既有较强转录和翻译后加工修饰能力,又有高表达量等特点,可望成为基因产业中一种比较理想的外源真核基因表达系统。目前,一般基因表达采用的都是基因cDNA。但国外文献已经证实在转基因哺乳动物的研究中真核基因的内含子具有提高基因表达的能力,它能同时提高转基因鼠的成功率和基因表达的平均水平。此外,有实验进一步表明与对RNA的剪切和加工作用比较,内含子在转录调控方面作用显得更为重要。家蚕作为一种昆虫表达体系受到人们的重视,但是由于昆虫与高等哺乳动物在进化上相距较远,高等哺乳动物基因的内含子能否在昆虫细胞中正确剪切,内含子对此基因在昆虫细胞中表达影响如何,目前有许多的争论。为此,我们希望构建和探索一种能有效高表达含有内含子真核基因组的载体和能对内含子进行剪切加工的昆虫表达系统,以提高外源真核基因表达的有效性和可靠性。 我们直接将含有4个内含子和自身信号肽的2.4kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体pcDNA3.0,然后利用脂质体转染家蚕BmN细胞,瞬时表达hGH。在不同的时间,收集细胞上清。提取培养细胞总RNA反转录cDNA测序结果表明人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞内能正确转录,剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌hGH蛋白质。我们的结果表明在昆虫细胞中能够正确的表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q78

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