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《第二军医大学》 2003年
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大鼠脊髓半横切伤损伤机制及恢复机理研究

田纪伟  
【摘要】: 大鼠脊髓半横切伤损伤机制及恢复机理研究 脊髓半横切伤表现为典型的Brown Sequard综合征,为进一步认识这一病理过程的发病机理和发展、恢复过程,探寻这一损伤过程中病理、生化、分子、基因变化关系,本研究根据胥少汀教授对脊髓半横切伤(hSCI)的描述,创立脊髓半切伤模型。取大鼠颈5~7部颈髓阶段,胸8~11部胸髓阶段直径1/2脊髓半切(从正中沟插入,刀刃向横断之半侧,经中央管至前裂,先横断切开),术后不同时间观察脊髓组织学变化,并纪录脊髓神经功能综合评分(CBS)。结果:光镜下半切脊髓远端侧索和灰质神经变性坏死,术后24h、1周实验组CBS评分与假手术组有显著意义(P<0.05),且脊髓腹角运动神经元与假手术组比较明显变化,行为表现为大鼠运动和感觉功能障碍。结论:颈髓5~7半切模型死亡率低,安全可靠。 本实验采用免疫组织化学染色定位与半切伤后不同时相点内皮素-1的分布变化,图像分析半定量测定伤点远近端的内皮素-1的含量。分别应用原子吸收光谱法和图像分析法测定hSCI后1、4、8、24、72和168h脊髓组织的Ca~(2-)和ET-1光密度值。通过免疫组织化学技术观察大鼠颈脊髓半切伤综合征(Brown-sequard's sydrome)不同时期神经组织中S-100蛋白的分布变化。采用原位末端标记法,对大鼠半切伤后的不同时间的凋亡细胞数目和部位进行观察分析,并作正常对照。研究脊髓半切伤(hSCI)后脊髓远端组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的意义,并探讨反应性胶质化在脊髓半切伤中的作用。探讨大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性和脊髓半切伤的关系。评价ALT和AST活性变化与脊髓半切伤严重程度的关系。检测损伤后30min、2h、4h、8h、24h、48h 72h、6w脊髓组织,探讨P_(53)蛋白在脊髓半切伤中的作用。 本实验采用临床上广泛使用的GM-1和甲基强的松龙作为治疗大鼠半切伤的药物,并采用基因检测手段探讨甲基强的松龙对脊髓半切伤后c-fos基因表达的影响,评价单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM-1)对脊髓半切综合征的治疗效果。观察伤后1h、6h、24h、1w、6w时各取损伤组合治疗组大鼠各2只伤区颈髓组织送光镜和电镜检查,并进行Rivlin斜板试验以评价大鼠运动功能。并对治疗前后观察脊髓半切伤后病理、脊髓灰质血流、运动诱发电位、运动变化规律及其相互关系。在不同时相点测定大鼠运动功能,运动诱发电位、伤部脊髓灰质血流量及观察光镜电镜变化。为观察嗅神经鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对颈髓轴突再生及神经功能恢复的促进作用。对下肢功能评价、运动诱发电位(MEP)检测、组织血和免疫组织化学检查。结果发现:试验组及对照组动物生存率分别为87.5%、81.25%。试验组12只动物下肢功能不同程度的改善,其中5只可以主动爬行;上述12只动物左下肢可纪录到MEP;组织学检查见轴突变性、少量通过断端,瘢痕形成。OECs移植后可在脊髓 中产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生及神经功能部分恢复。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R651.2

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