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《第二军医大学》 2003年
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大鼠胰岛细胞门脉内移植及免疫抑制剂对胰岛细胞影响的实验研究

蔡锦全  
【摘要】: 研究目的:1.探讨胰岛细胞分离、纯化方法及胰岛细胞移植物质量的鉴定方法。 2.通过体外人和大鼠胰岛细胞培养及糖刺激胰岛素释放试验,探讨免疫抑制剂对 人和大鼠胰岛细胞的毒性作用,旨在筛选适用于胰岛细胞移植的免疫抑制剂。3. 建立大鼠胰岛细胞门脉内移植模型,在体外实验的基础上,选用对胰岛细胞无毒 性作用的免疫抑制剂进行体内实验,旨在探讨应用于胰岛细胞移植的新型无激素 免疫抑制剂治疗方案。为临床移植提供理论依据。 研究方法:1.采用胆总管内逆行灌注胶原酶方法消化、分离胰岛,Ficoll400间断 密度梯度方法纯化胰岛。2.采用DTZ染色、AO—PI双色荧光染色法及糖刺激胰 岛素释放试验鉴定胰岛细胞移植物的纯度、活率和功能质量。3.通过人和大鼠胰 岛细胞与不同免疫抑制剂分别共培养后的糖刺激胰岛素释放试验,ELISA检测培 养液中胰岛素含量比较,以探讨免疫抑制剂对胰岛细胞的毒性作用。4.建立药物 性大鼠糖尿病模型和大鼠胰岛细胞门脉内移植模型,应用新型免疫抑制剂 FTY720和Rapamycin、常规免疫抑制剂FK506和MMF预防排斥反应,通过移 植物存活期和维持正常血糖时间的比较探讨其对胰岛细胞移植的作用。 结果:1.大鼠的胰腺经消化分离纯化后胰岛产量为450~720个胰岛/胰腺,平均 为562±110个胰岛/胰腺,平均活率在95%以上,纯度在80%以上。胰岛素释 放试验显示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖的5.45倍,表明胰岛细胞功能良好。 2.高浓度MMF和FK506均引起人和大鼠胰岛细胞胰岛素分泌明显减少,与对照 组比较,具有显著性差异,p<0.05。中低浓度MMF和FK506对人和大鼠胰岛细 胞胰岛素释放无明显抑制作用。FTY720和Rapamycin对人和大鼠胰岛细胞胰 岛素分泌无明显影响。3.FTY720+Rapamycin联合应用或中低剂量MMF和 FKS06联合应用于大鼠胰岛细胞移植,均能明显延长胰岛细胞存活时间和正常血 糖维持时间,与对照组比较,具有显著性差异,p<0.05。 结论:1.胶原酶胆管内逆行灌注消化、Ficoll400间断密度梯度纯化方法是分离大 第二军医大学硕士学位论文 鼠胰岛细胞的较好方法。2.DTZ染色、AO一PI双色荧光染色和糖刺激胰岛素释放 试验三者相结合是鉴定胰岛细胞移植物质量的一种简单、可靠方法。3.中低剂量 MMF和FKSO6不影响人和大鼠胰岛细胞胰岛素的分泌,高剂量MMF和FK506 明显抑制胰岛素的分泌。4.FTY72O和Rapamycin对人和大鼠胰岛细胞胰岛素的 分泌无明显影响。FTY720十Rap田mycin联合应用于大鼠胰岛细胞移植,能显著 延长大鼠胰岛细胞的存活时间和正常血糖维持时间,表明FTY720和Rapamycin 是胰岛细胞移植较理想的免疫抑制剂。FTY720和Rapamycin有可能作为临床胰 岛细胞移植的主要免疫抑制剂使用。5.中低剂量MMF和FK506联合应用于大鼠 胰岛细胞移植,亦能显著延长大鼠胰岛细胞存活时间和正常血糖维持时间,表明 胰岛细胞移植时可使用中低剂量MMF和FK506。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R657.5

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