收藏本站
《第二军医大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究

涂宏钢  
【摘要】:研究背景: 隐球菌病是新生隐球菌感染所致的全身感染性疾病,好发于细胞免疫功能低下患者。近年来隐球菌感染发生率呈明显上升的趋势,突出表现在爱滋病人群中,成为AIDS患者最常见的并发症之一,也是AIDS患者死亡的首要原因。 2000年3月启动的新生隐球菌基因组计划由斯坦福大学基因组技术中心(SGTC)和美国国家基因组中心(TIGR)联合于近期完成,为我们下一步的研究奠定了坚实的基础。但破解基因组的序列只是一个起点,许多毒性相关基因的确切致病机理仍有待研究。 要对某一基因的功能进行研究,按照经典的分子遗传学方法,就必须应用同源重组的方法将该基因敲除,得到人工突变株,在此平台基础上,我们才可以通过该转化子的形态、结构、功能、传代过程和生理生化表现及其毒力的改变深入地研究该基因的功能。不过应用基因同源重组进行相关基因敲除来研究其功能,耗时费力且成功率低,为全世界科研工作者所遇到的共同难题。 而近年来兴起的RNA干扰技术(RNAi),即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,·RNA干扰技术作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具,正在功能基因组学领域掀起一场真正的革命,并将彻底改变这个领域的研究步伐,即如果在实验设计中,在靶细胞中引入长双链RNA中有与靶基因所转录的mRNA同源的序列,即可触发“扳机”,引起特定的转录后基因沉默,使该基因功能丧失或部分丧失,从而明确其功能。 研究目的: (1) 构建RNA干扰质粒Pcnlacl-tel,正义RNA质粒Pcnlacl-S-tel,反义RNA质粒Pcnlacl-A-tel的构建 (2) 摸索隐球菌转化的条件,进行一整套转化体系的构建 (3) 应用RNA干扰技术研究酵母的基因功能,建立了一套完整的酵母基因功能研究体系及技术平台,进一步推广至其它酵母的基因功能研究。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R379.5

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋燕;张宇;李伟;杨博;;利用a凝集素在酿酒酵母表面展示CALB及工业化培养基发酵条件优化[J];安徽农业科学;2010年17期
2 沈雁;陈霞;陈燕;龚毅;陈宇光;;耐盐基因Hal1的克隆及表达载体的构建[J];现代农业科技;2009年07期
3 张新国,胡振英,尚若锋,杨林西,罗超应,罗永江;富铁酵母的实验制备[J];中国草食动物;2004年06期
4 郭秀军,廖万清,任大明,王荫榆,霍克克;新生隐球菌CAP64荚膜缺陷株ura5突变株的筛选和鉴定[J];第二军医大学学报;2004年04期
5 梁景耀,黄功华,刘新光,梁念慈;酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建[J];广东医学院学报;2004年04期
6 李劲松,宋诗铎,祁伟,魏殿军;常见深部念珠菌感染快速基因诊断[J];中国感染控制杂志;2004年03期
7 牟禹;何晶;付凤玲;李晚忱;;转酿酒酵母海藻糖合成酶基因(TPS1)玉米植株的获得[J];核农学报;2007年05期
8 李剑敏,雷小勇,孙文清,张晓红,唐圣松;用于酵母双杂交的M-CSF诱饵载体的构建和鉴定[J];南华大学学报(医学版);2005年02期
9 陈文吟 ,饶桂荣 ,粟宽源 ,邓宁,余宙耀;重组毕赤酵母菌高密度表达人源抗-HBs Fab抗体的研究[J];解放军医学杂志;2004年09期
10 刘斌,郑文岭,邓海,马文丽;鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1在酿酒酵母中的同源重组及初步鉴定[J];解放军医学杂志;2005年09期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱咏华;Gpi17p—一酵母糖基磷脂酰肌醇(GPI):蛋白质转酰胺基酶复合物亚基的功能研究[D];湖南农业大学;2002年
2 李新鸣;WEB2基因在酿酒酵母S期检查点调控机制中的作用[D];中国医科大学;2002年
3 郭秀军;新生隐球菌荚膜相关基因的实验研究[D];第二军医大学;2003年
4 李劲松;深部念珠菌的基因诊断、分子分型及耐药机制研究[D];天津医科大学;2004年
5 廖志华;紫杉醇前体生物合成的分子生物学和抗癌萜类吲哚生物碱的代谢工程[D];复旦大学;2004年
6 曹月青;鉴定不同基因组之间差异序列的新方法研究[D];重庆大学;2005年
7 王瑞琳;SARS冠状病毒分离鉴定、疫苗构建及免疫血清制备研究[D];吉林大学;2006年
8 黄志立;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达[D];华南理工大学;2001年
9 郝俊光;低蛋白酶A啤酒酵母菌株构建的研究[D];江南大学;2007年
10 陈桂生;一个FALS突变SOD1相互作用蛋白筛选及鉴定[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林玮;酿酒酵母MAPK途径及VPS家族基因对镉离子耐受调节的鉴定[D];天津大学;2010年
2 贾翠英;离子注入法对高产苹果酒酵母菌的诱变研究[D];河南农业大学;2002年
3 金洪涛;抗HIV-1单链抗体基因的表达及重组毒素的构建[D];中国人民解放军军需大学;2002年
4 吴静;Aspergillus niger N-2植酸酶phyA基因的克隆及其在Pichia Pastoris中的高效表达[D];山东农业大学;2004年
5 周小玲;粗糙脉孢菌一种新植酸酶基因的克隆、鉴定和重组酶的生化特性[D];江南大学;2004年
6 王丽威;原生质体融合构建增香型猕猴桃酒酵母的研究[D];西北农林科技大学;2004年
7 杨会强;盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶基因在Pichia pastoris中的表达和功能研究[D];四川大学;2004年
8 于湘莉;紫杉醇生物合成上游途径中重要酶基因克隆[D];天津大学;2004年
9 赵有玺;产甘油假丝酵母GPD和GPP基因的克隆及其在酿酒酵母和烟草中表达[D];江南大学;2005年
10 赵博;SARS病毒核衣壳蛋白的表达及其疫苗的免疫原性研究[D];吉林大学;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 万小荣;莫爱琼;杨妙贤;余土元;;植物基因沉默机制研究进展[J];安徽农业科学;2011年17期
2 刘婷;秦国华;张建珍;马恩波;;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶RNA干扰效率研究[J];应用昆虫学报;2011年04期
3 杜宝顺;程振国;;PTTG基因对人垂体瘤细胞侵袭能力的影响[J];科技信息;2011年15期
4 崔勇;陈静;王君玉;王麒;胡国汉;骆纯;卢亦成;;AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];现代生物医学进展;2011年08期
5 付晶晶;罗达亚;万福生;;靶向PUMA的siRNA对缺氧/复氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年07期
6 黄良宗;钟科阳;王淑敏;司兴奎;马春全;顾万军;;RNA干扰抑制猪繁殖与呼吸综合症病毒N基因表达及病毒复制[J];广东农业科学;2011年11期
7 钟翔;李兴美;李伟;黄雪新;张莉莉;王恬;;肠上皮细胞RNA干扰Hsp70基因转染条件的研究[J];生物技术通报;2011年09期
8 陈妮;左国伟;潘玥;赖国旗;杨根岭;向廷秀;韩建红;黄云;;小鼠CHD5基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];西南大学学报(自然科学版);2011年08期
9 李延辉;吴伟;于艳秋;;siRNA干扰HIF-1α表达对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2011年03期
10 刘春亮;林丹丹;徐岚;姜智;吴士良;;慢病毒介导的RNA干扰ppGalNAc-T2基因表达抑制Jurkat细胞增殖和迁移(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张辉;于力;朱龙英;万延慧;朱为民;;Hair-pin RNA介导的番茄抗TYLCV效果初步研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
2 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
3 闫虎斌;陆智明;;基于RNA干扰的植物抗病毒育种原理及研究进展[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
4 赵午莉;邵荣光;;MR-1基因在白血病K562细胞中的功能研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
5 陈始明;陶泽璋;肖伯奎;;RNA干扰hTERT基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究[A];湖北省抗癌协会头颈肿瘤专业委员会第四次学术会议资料汇编[C];2005年
6 潘燚;李伟雄;杨素清;曾子君;林映如;郭爱林;;siRNA抑制肺癌细胞DNA-PKcs的表达与放射敏感性的关系[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
7 梁睿;罗庆;金先庆;;快速直视筛选结缔组织生长因子特异RNA干扰序列的研究[A];第八届全国儿童肿瘤学术会议论文汇编[C];2009年
8 韩之波;王晗;任贺;赵辉;刘拥军;韩忠朝;;RNA干扰沉默HIF-1α对人乳腺癌细胞功能的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 王子见;吴秀萍;邓洪宽;刘明远;;RNA干扰技术在动物寄生性线虫研究中的局限性[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
10 母连志;丁壮;丛彦龙;尹仁福;刘美;王昌庆;李少丽;邱蜜蜜;;靶向新城疫病毒P基因利用RNAi技术抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2 记者 王小龙;新生隐球菌自我保护机制揭开[N];科技日报;2009年
3 艳红;养鸽谨防脑膜炎[N];中国妇女报;2003年
4 艳红;养鸽谨防脑膜炎[N];保健时报;2003年
5 ;伊曲康唑与两性霉素B抗新生隐球菌临床分离株的实验研究[N];中国医药报;2003年
6 本报记者 何佳颐;养鸽子当心患上脑膜炎[N];健康时报;2003年
7 本报记者何佳颐;养鸽子注意啥?[N];健康时报;2003年
8 余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
9 李彬;今年技术发展呈八大趋势[N];科技日报;2005年
10 记者 吴伟农;世界十大科技突破[N];新华每日电讯;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李恭会;shRNA阻抑前列腺癌细胞雄激素受体和hTERT基因表达的研究[D];浙江大学;2005年
2 魏军民;RNA干扰逆转肿瘤多药耐药的实验研究[D];山东大学;2005年
3 王晓龙;小鼠骨骼肌细胞SelW基因的RNA干扰研究[D];东北林业大学;2006年
4 王静;转化生长因子-β1基因沉默对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞生物学行为的影响[D];第四军医大学;2006年
5 张守峰;狂犬病病毒的RNA干扰研究[D];吉林大学;2007年
6 王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年
7 谭兵;RNA干扰在体外、体内抑制TNF-α表达的实验研究[D];广州医学院;2008年
8 倪勤;shRNA表达框的快速制备及其在抗HBV相关研究中的应用[D];浙江大学;2004年
9 杨捷琳;腺样囊性癌高低转移细胞株基因表达差异性及B7-1、XAGE-1b与转移相关性研究[D];复旦大学;2005年
10 李朝阳;RNA干扰下调cyclin T1蛋白的表达及其对靶细胞和HIV-1的影响[D];武汉大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 涂宏钢;应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年
2 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
3 黄伟素;水稻穗颈伸长基因EU12的功能验证[D];浙江大学;2006年
4 贾勇圣;红霉素抑制成神经细胞瘤增殖机制的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
5 姚津剑;针对P基因的siRNA对HBV表达影响的实验研究[D];华中科技大学;2007年
6 李涛;抑制乳腺癌耐药蛋白表达逆转肝细胞癌多药耐药[D];重庆医科大学;2009年
7 马耀华;马铃薯PTOM1基因全长cDNA的克隆及其RNAi转基因植株的构建[D];广西大学;2004年
8 王维锋;腺病毒介导的siRNA抑制hTERT增强肝癌化疗敏感性的实验研究[D];第二军医大学;2004年
9 吕青;RNA干扰抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达[D];北京中医药大学;2005年
10 杨德华;端粒酶亚单位的siRNA对肝癌的作用[D];华南师范大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026