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《第二军医大学》 2006年
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人脐血源肝干/祖细胞生物活性及移植的实验研究

王晨曦  
【摘要】:目的 研究人脐血单个核细胞在体外定向诱导分化为肝干/祖细胞以及脐血源肝干/祖细胞移植于体内的生物活性。方法一、从脐血中分离出脐血单个核细胞,在肝细胞生长因子(HGF)、干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子-1(FGF-1)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、制瘤素(OSM)、白血病抑制因子(LIF)的共同作用下,诱导分化为肝干/祖细胞,观察细胞形态学的变化,RT-PCR定量测定hALBmRNA,细胞免疫化学检测ALB、CK18、CK19的表达。二、对肝损伤和肝损害SCID鼠模型,进行人脐血源肝干/祖细胞体内移植,分别在不同时期检测SCID鼠外周血中的hCD45水平,肝脏组织中hALBmRNA和hALB蛋白的表达,以及ALB的免疫表达情况。结果一、体外诱导培养的细胞呈肝细胞样分化,RT-PCR检测到hALBmRNA,细胞免疫化学显示部分细胞CK18、CK19、ALB呈阳性。二、可见大体肝脏:体积略有增大,肝脏表面可见有粟粒状突起,约芝麻大小;流式细胞仪在外周血中检测到有hCD45表达,6周水平最高,10周后基本测不到;RT-PCR检测到肝脏组织hALBmRNA的表达及Western-blot检测到hALB蛋白的表达随移植时间的延长而增强;免疫组织化学肝脏中ALB表达阳性,免疫荧光显示绿荧光。结论一、脐血单个核细胞在定向诱导下有分化为肝干/祖细胞的能力,可以考虑作为肝干/祖细胞和肝细胞新的细胞来源。二、脐血源肝干/祖细胞可以通过肝实质移植在体内进一步分化,对肝损伤修复和再生有一定的促进作用,为肝细胞移植和肝再生与修复提供了一定的理论基础。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R457.1

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【参考文献】
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