HGF基因转染骨髓间质干细胞联合Fn预涂支架体外构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

刘洪涛

【摘要】： 目的:观察HGF基因转染和支架预涂Fn对骨髓间质干细胞与支架相互作用的影响。方法:(1) HGF基因重组腺病毒载体Ad.HGF的构建;(2)骨髓间质干细胞(BMSCS)的分离、培养及Ad.HGF转染BMSCS后HGF蛋白表达和分泌;(3)预涂Fn和HGF基因转染联合应用对细胞与支架之间相互作用的影响。结果: Ad.HGF转染BMSCS 2天后HGF蛋白明显表达、分泌。Fn蛋白预涂联合应用HGF基因转染BMSCS后,HGF以时间依赖性模式促进BMSCs与Fn蛋白的粘附。对构建物进行组织学观察,第2周表面见大量细胞覆盖,第3周表面见松散细胞层,第4周表面见单层融合细胞,第6周出现二层结构,第8周呈现三层结构。免疫组化分析,第8周构建物中出现内皮细胞和肌成纤维细胞。整体构建的TEHV经受体外脉动高速流体冲刷后,内皮细胞仍保留较完整。结论:预涂Fn联合HGF基因转染BMSCs能促进种子细胞在去细胞猪主动脉瓣膜上的粘附、再内皮化和组织重建。

【关键词】：组织工程 心脏瓣膜 纤维连接蛋白 肝细胞生长因子 基因转染 骨髓间质干细胞
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R318.0
【目录】：

摘要4
英文摘要4-6
英文缩写6-7
详细摘要7-17
前言17-24
一、研究背景17-19
二、课题总体设计19-24
第一部分：HGF 基因重组腺病毒载体Ad.HGF 的构建24-53
材料25-27
方法27-38
结果38-44
讨论44-53
第二部分：BMSCs 的分离、培养、鉴定及Ad.HGF 转染BMSCs 后HGF 蛋白表达、分泌53-77
材料54-56
方法56-64
结果64-71
讨论71-77
第三部分：预涂Fn 及转染HGF 基因联合应用对BMSCs 与支架材料相互作用、再细胞化以及组织重塑的影响77-98
材料78-79
方法79-84
结果84-91
讨论91-98
全文总结98-99
文献综述组织工程心脏瓣膜研究进展99-122
致谢122-123
在读期间撰写及发表论文情况123

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前1条

1	朱德星;宋莉;;肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞的研究进展[J];南昌大学学报(医学版);2012年04期

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前4条

1	王晓伟,徐志云,张宝仁,黄盛东,韩林,张裕东,叶福林;组织工程心脏瓣膜体外脉动反应器的初步研制[J];第二军医大学学报;2003年10期
2	黄盛东 ,刘晓红 ,杨立信 ,龚德军 ,刘延玲 ,徐志云;血管内皮细胞生长因子基因转染诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为内皮细胞[J];第二军医大学学报;2003年12期
3	侯广杰;徐志云;黄盛东;龚德军;;组织工程心脏瓣膜生物反应器的改建及初步应用[J];第二军医大学学报;2007年01期
4	张宝仁;我国心脏瓣膜外科的发展与展望[J];中华外科杂志;2003年04期

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1	徐志云,张宝仁;组织工程心脏瓣膜的研究现状与展望[J];第二军医大学学报;2003年03期
2	王晓伟 ,徐志云 ,张宝仁 ,黄盛东 ,韩林 ,叶福林;人脐静脉内皮细胞用于构建组织工程心脏瓣膜的实验研究[J];第二军医大学学报;2003年12期
3	姚祖武,梅举,黄盛东,邢建洲,龚德军,徐志云;人骨髓间充质干细胞体外应力培养构建组织工程心脏瓣膜[J];第二军医大学学报;2005年04期
4	徐驯宇,黄盛东,陆方林,崔勇,鲍春荣,张宝仁,徐志云;Ad.VEGF转染自体骨髓基质细胞移植治疗猪慢性缺血性心脏病[J];第二军医大学学报;2005年04期
5	邢建洲,张宝仁,徐志云,黄盛东,姚祖武,李志刚;新一代组织工程心脏瓣膜体外预适应脉动仪的研制[J];第二军医大学学报;2005年09期
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8	黄敏;四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯对百草枯致大鼠肺损伤的干预作用[D];复旦大学;2011年
9	张大勇;Wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞衰老的作用及其机制研究[D];复旦大学;2011年
10	张正;PCLA-PEG-PCLA温致水凝胶的合成、多肽包裹与修饰及其医学应用[D];复旦大学;2011年

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3	郑月涵;烟草浸润液对人成骨细胞在钛板上黏附增值的影响[D];北京协和医学院;2010年
4	张帆;天然高分子基三维多孔支架的制备、表征及其电化学矿化[D];东华大学;2011年
5	王艳;柞蚕丝丝素骨仿生复合材料的制备与研究[D];中原工学院;2011年
6	李想;复合rhBMP-2磷酸钙骨水泥骨修复材料对缺损骨再生的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
7	李威娜;小鼠骨髓间充质干细胞对免疫损伤卵巢的修复[D];暨南大学;2011年
8	陈洪林;壳聚糖接技聚已内酯/聚已内酯复合纤维支架的制备及其在组织工程中的潜在应用[D];华东师范大学;2011年
9	刘春晓;人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞共培养构建组织工程骨颗粒的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
10	张宴达;人骨髓间充质干细胞体外向内皮细胞诱导分化及内皮样细胞的特性研究[D];郑州大学;2011年

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1	温茜;周超颖;周明乾;罗微;马骊;;肝细胞生长因子基因转染5-aza诱导后的骨髓基质干细胞及其表达、分化的研究[J];南方医科大学学报;2010年07期
2	苏津自;林茂海;林美萍;;移植转染ADM或HGF基因的骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死[J];基础医学与临床;2010年02期
3	边莉;郭子宽;艾辉胜;王华;孟二红;吴祖泽;王立生;;HGF基因修饰增强间充质干细胞的免疫抑制作用[J];军事医学科学院院刊;2006年04期
4	陈丽;崔洁;侯军霞;贺莉;郑淑梅;曾维政;蒋明德;;上调hHGF促进人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化[J];免疫学杂志;2011年01期
5	张诚;哈小琴;刘毅;金丽娟;吕同德;;肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞异体移植修复烧伤创面[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年51期
6	宫恩年;商丰元;郭子宽;楼晓;;肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头坏死(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年28期
7	苏津自;蔡文钦;林美萍;林茂海;林明;;基因修饰的骨髓间充质干细胞静脉移植对心肌病心力衰竭大鼠心功能和心脏纤维化的影响[J];中国应用生理学杂志;2009年04期
8	哈小琴;董芳;吕同德;;肝细胞生长因子基因对BMSCs的修饰及活性观察[J];中国修复重建外科杂志;2010年05期
9	朱金海;陈燕凌;;慢病毒介导人肝细胞生长因子基因感染BMSCs的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2010年08期
10	哈小琴;尹强;董芳;贾庆华;吕同德;;BMSCs联合携带肝细胞生长因子的重组腺病毒促进糖尿病大鼠创面修复的研究[J];中国修复重建外科杂志;2010年12期

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1	苏冠华;肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植的促血管新生作用[D];华中科技大学;2010年

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1	徐志云,张宝仁;组织工程心脏瓣膜的研究现状与展望[J];第二军医大学学报;2003年03期
2	叶福林,徐志云,张宝仁,韩林,黄盛东;猪主动脉组织工程瓣膜制备的初步研究[J];第二军医大学学报;2003年03期
3	王晓伟,徐志云,张宝仁,黄盛东,韩林,张裕东,叶福林;组织工程心脏瓣膜体外脉动反应器的初步研制[J];第二军医大学学报;2003年10期
4	姚祖武,梅举,黄盛东,邢建洲,龚德军,徐志云;人骨髓间充质干细胞体外应力培养构建组织工程心脏瓣膜[J];第二军医大学学报;2005年04期
5	邢建洲,张宝仁,徐志云,黄盛东,姚祖武,李志刚;新一代组织工程心脏瓣膜体外预适应脉动仪的研制[J];第二军医大学学报;2005年09期
6	康凯,谭震,蒋树林,谢宝栋,韩振,田伟忱;体外构建组织工程心脏瓣膜动物实验初步研究(英文)[J];哈尔滨医科大学学报;2005年03期
7	刘波,姜宗来,张炎,刘艳春,覃开荣,杨向群;血管体外应力培养系统:一种新的血管生物力学实验模型[J];医用生物力学;2001年04期
8	冯滨;刘迎龙;晏明全;朱晓东;谢宁;阮英卯;;体外构建的同种生物组织工程瓣脉动流培养的实验研究[J];中华胸心血管外科杂志;2006年01期
9	杨立信;徐志云;黄盛东;刘延玲;张宝仁;;骨髓诱导分化内皮细胞构建组织工程心脏瓣膜的实验研究[J];中华胸心血管外科杂志;2006年01期
10	朱六龙,戴克戎,汤亭亭,郁朝锋,徐旻,徐小良,楼觉人;骨形成蛋白-2基因转染人骨髓间质干细胞诱导异位成骨的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2003年02期

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1	郭秀英;骨髓间质干细胞[J];国外医学.输血及血液学分册;1998年05期
2	陈志伟;许惠玉;徐荣春;;几种动物骨髓间质干细胞的培养技术及问题探讨[J];中国比较医学杂志;2005年06期
3	姚晓黎,张成,卢锡林,张为西,冯善伟,柳太云;成人骨髓间质干细胞体外分化为神经元样细胞[J];广东医学;2004年05期
4	李爱梅,邓钢;骨髓间质干细胞体外分化为胰岛细胞的研究进展[J];介入放射学杂志;2005年04期
5	黄志锋;张翼;郑青;李校堃;;碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间质干细胞的作用[J];江苏药学与临床研究;2006年02期
6	吉光荣,王岩松,韩剑峰,林欣,王立春,石义刚,刘枫晨,刘建宇;Ad-BMP-2促进兔骨髓间质干细胞成骨转化的研究[J];基础医学与临床;2004年01期
7	陈莉娜;王颖;张艳艳;关伟军;;骨髓间质干细胞的分离培养、生物学特性及应用[J];黑龙江畜牧兽医;2007年11期
8	张丽蓉,项鹏,夏文杰,陈振光,张秀明,李艳,李树浓;人骨髓间质干细胞分离和培养扩增方法的研究[J];广东药学院学报;2002年02期
9	徐正云;任国珍;马爱群;;骨髓间质干细胞多向分化及其机制的研究进展[J];医学综述;2006年04期
10	季正剑;许小媛;杨丽华;邢华;;骨髓间质干细胞的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2010年17期

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1	张建保;M Bratbach;BK Fleischmann;;骨髓间质干细胞电压依赖性离子通道[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年
2	周小莹;暨明;王先酉;田晶;王峰;赵菲;谭孟群;;rAAV2介导TPO基因修饰的骨髓间质干细胞对巨核系细胞生成的促进作用[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
3	陈少强;吴碧莲;贾小力;;移植骨髓间质干细胞在损伤脊髓内向神经元的定向分化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
4	景黎君;贾永林;鲁晶晶;韩瑞;王舒阳;李尽义;彭涛;贾延劼;;MicroRNA-9-1慢病毒载体的构建及其对小鼠骨髓间质干细胞诱导分化为神经细胞的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年
5	韩崇旭;许文荣;;Cyclin I基因在骨髓间质干细胞诱导致瘤过程中的作用[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
6	何国雄;李飞;李海标;梁志忠;潘志信;利玉欢;黄锦桃;;移植成人骨髓间质干细胞在脑梗死模型鼠的分化及功能恢复研究[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
7	谭浩翔;高毅;张会迎;王琼;;受体骨髓间质干细胞在大鼠原位肝移植中对免疫排斥的影响[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年
8	孔雅娴;王宏;王淑玲;李长勇;姜向明;李丽英;;在肝纤维化模型中骨髓间质干细胞的示踪研究[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
9	郑扬;李林凤;周作红;关伟军;马月辉;;北京鸭骨髓间质干细胞的分离培养及诱导分化的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
10	谭浩翔;高毅;王琼;张会迎;;受体骨髓间质干细胞在大鼠原位肝移植中对生存期的影响[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年

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1	胡德荣;骨髓间质干细胞可向心肌细胞转化[N];中国医药报;2002年
2	;用自己的细胞造个心脏[N];健康时报;2004年
3	记者胡德荣;心肌细胞能体外培养[N];健康报;2002年
4	;动物实验显示骨髓干细胞可用于修复心脏损伤[N];中国高新技术产业导报;2003年
5	魏妍平;MSCs研究列入豫重大攻关计划[N];中国医药报;2004年
6	陈列欢;实验鼠干细胞再造人骨关节获新进展[N];医药经济报;2003年
7	记者　秦军　;“万能细胞”巧治心脏病[N];浙江日报;2004年
8	记者许晓岚　通讯员王飞;自治区首例颅内自体骨髓干细胞移植术获成功[N];内蒙古日报(汉);2010年
9	记者冯国梧;脊髓损伤患者有望站起来[N];科技日报;2003年
10	新华;骨髓干细胞可修复心脏损伤[N];保健时报;2003年

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1	朱伟;骨髓间质干细胞在肿瘤进展和肿瘤微环境中的作用及机制[D];江苏大学;2010年
2	徐会娟;骨髓间质干细胞对血吸虫性肝纤维化修复作用的研究[D];江苏大学;2012年
3	张勇;骨髓间质干细胞的生物学特性及对心肌缺血治疗作用的初步研究[D];浙江大学;2005年
4	张国福;补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗脊髓外伤性截瘫的实验研究[D];福建中医学院;2005年
5	韩崇旭;人骨髓间质干细胞诱导突变致瘤的分子机制研究[D];南京师范大学;2005年
6	房云海;人淋巴管的体外构建研究[D];山东大学;2007年
7	李显澎;生脉成骨胶囊配合髋外展支架治疗儿童股骨头坏死的实验与临床研究[D];广州中医药大学;2009年
8	金艳;骨髓间充质干细胞心肌分化过程中电生理特性及其心肌移植致心律失常机制的研究[D];南京医科大学;2005年
9	姜美子;静脉注射人骨髓间质干细胞对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响[D];延边大学;2007年
10	杨宏辉;VEGF转染对骨髓间质干细胞及对粥样硬化动脉TFPI的影响[D];中南大学;2007年

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1	施迎兵;脑源性神经营养因子对骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑出血的影响[D];遵义医学院;2011年
2	王翠琴;大鼠骨髓间质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达的变化及意义[D];郑州大学;2013年
3	王德亮;IGF-1基因转染骨髓间质干细胞移植对糖尿病大鼠骨折愈合的影响[D];山东大学;2012年
4	王留东;Caveolin-1在大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的作用[D];郑州大学;2010年
5	丁祥龙;人乳牙牙髓干细胞与骨髓间质干细胞成骨能力的比较研究[D];南方医科大学;2011年
6	陈昌华;青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞成软骨能力的研究[D];中山大学;2012年
7	张颖辉;小鼠骨髓间质干细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究[D];郑州大学;2006年
8	黄飞日;兔骨髓间质干细胞的成骨细胞、软骨细胞分化研究[D];遵义医学院;2012年
9	汪健;骨形态发生蛋白-2诱导骨髓间质干细胞成软骨分化的实验研究[D];第四军医大学;2005年
10	邬晓臣;载bFGF纳米缓释技术在组织工程瓣膜中的应用研究[D];第四军医大学;2009年

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