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《第二军医大学》 2007年
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长期失神经后环杓后肌形态学观察及相关因子表达的研究

张贤  
【摘要】: 目的:探讨长期失神经后环杓后肌肌萎缩、肌纤维化、肌组织中神经再生微环境的变化,为临床开展晚期喉神经修复时限的选择提供理论依据。方法:不同时限喉返神经损伤患者的环杓后肌标本按神经损伤时限分为4组:6-12个月(12例)、1-2年(10例)、2-3年(8例)及大于3年组(8例)。对照组为正常肌肉(12例)。通过MASSON三色染色、肌肉琥珀酸脱氢酶(SDH)染色和运动终板胆碱脂酶(AchE)染色进行环杓后肌形态学观察及图象分析。通过免疫组化荧光染色及图象分析观察长期失神经后环杓后肌肌细胞的再生潜力指标Myogenin、肌肉纤维化相关因子TGF-?1和神经营养因子GDNF及其受体GFR-α1表达的时间、空间及强度的变化趋势。以realtime PCR定量检测Myogenin mRNA的基因表达水平。结果:失神经后白肌细胞比例逐渐下降,红肌细胞比例逐渐上升。AchE染色的运动终板随失神经时限的延长而减少,失神经1年以上的环杓后肌未见运动终板结构。Myogenin免疫组化荧光染色显示失神经6-12个月组肌细胞核和肌卫星细胞核有较高水平表达,1-2年内表达最高,后显著下降,3年后基本无表达。各失神经组之间Myogenin表达的灰度值及阳性细胞表达率均有显著性差异(P0.01),失神经3年以上组与对照组相比,无显著性差异(P0.05)。Myogenin mRNA的real time PCR检测表明对照组无表达,失神经1-2年组比6-12个月组Myogenin mRNA表达高4倍、失神经2-3年组比6-12个月组Myogenin mRNA表达高64倍、失神经3年以上组仅为6-12个月组Myogenin mRNA表达的1/2。随着失神经时限的延长,肌纤维细胞逐渐萎缩,截面积减小,胶原纤维细胞逐渐增多,胶原纤维截面积增加。失神经0.5-2年内肌肉相对截面积/胶原相对截面积的比率下降最为明显,但失神经3年以上组肌肉相对截面积仍残留36%,为正常对照组的48%。TGF-?1免疫组化荧光染色显示失神经6-12个月组及1-2年组部分肌细胞的胞质有较高表达,失神经6-12月内表达最高,之后显著下降,失神经3年后基本无表达。失神经各组间TGF-?1表达的灰度值及阳性区表达率均有显著性差异(P0.01),失神经3年以上组与对照组相比,无显著性差异(P0.05)。免疫荧光双标记法显示:失神经6-12月组GDNF和GFR-α1表达明显,1年以后表达明显减低。2年后未见任何表达。结论:①失神经后环杓后肌肌纤维类型发生变化以适应失神经状况。②环杓后肌肌纤维化失神经后2年内程度最大,2年后纤维化进程减缓,但失神经3年后仍残留肌纤维相对截面积为正常对照组的48%,提示失神经2年内进行神经修复可能是阻止肌肉纤维化的最佳时期,但失神经3年后作神经修复仍有其肌肉形态学的基础。③失神经3年内环杓后肌肌纤维仍有较大的再生潜力。④失神经2年以内GDNF的功能状态较好。综上所述晚期失神经支配喉内肌的形态及相关因子的功能状态提示晚期神经修复时限以3年为佳,但3年以后神经修复仍有肌肉神经再生的形态及相关因子功能状态基础。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R767

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