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《第二军医大学》 2009年
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T-bet/GATA3信号通路与银屑病中医证型的相关性及中药治疗的机制研究

汪五清  
【摘要】: 银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮病,目前多数学者倾向于银屑病是在遗传易感性的基础上,自身免疫功能失调所致以Th1型反应为特征的自身免疫性疾病。银屑病患者中存在Th1及其细胞因子和Th2及其细胞因子的不平衡,这种不平衡与疾病的发生发展有关。T-bet/GATA3比率较单一T-bet或GATA3的水平更客观地反映Th1/Th2分化。因此调节T-bet/GATA3的转录可能是治疗Thl/Th2相关性疾病新的靶位。 消银汤是我们临床治疗银屑病的有效方剂,本研究从Thl/Th2及转录因子T-bet/GATA3调节作用的角度探讨其可能的作用机制;验证消银汤的临床疗效、安全性;分析Th细胞失衡、T-bet、GATA3及相关信号分子与银屑病不同中医证型的关联性,有助于银屑病中医证型的规范化、客观化研究;并运用药物血清作用于HaCaT细胞后,观察其对细胞增殖分化的影响及差异蛋白的表达去探讨消银汤治疗银屑病的可能作用机制。 第一部分:T-bet/GATA3信号通路与银屑病中医证型相关性研究 目的:探讨T-bet/GATA3信号通路与银屑病中医证型相关性。 方法:寻常型银屑病患者45例,其中血热型20例,血燥型13例,血瘀型12例,健康对照组10例,。抽取银屑病患者及健康对照者外周血,运用RT-PCR检测T-bet mRNA、GATA3mRNA的表达及T-bet/GATA3,以及运用ELASI测定IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10值。 结果:1.T-bet血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别11.032,4.730,10.133,P0.01),血燥组与正常组、血瘀组有统计学意义(q值分别为6.086,4.775, P0.01),血瘀组与正常组有统计学意义(2.138, P0.01);2.GATA3血热组与正常组、血燥组、血瘀组有统计学意义(q值分别2.344, 2.226,1.338, P0.01),血燥组、血瘀组及对照组间无统计学意义(P0.05);3.T/G血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别2.165, 1.989,2.137, P0.01),血燥组与正常组、血瘀组有统计学意义(q值分别4.029, 1.933, P0.01),血瘀组与对照组有统计学意义(q=2.021, P0.01);4.IL-2血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别为11.870,3.177, 5.350, P0.01),血燥组与正常组、血瘀组有统计学意义(q值分别为9.999,2.591, P0.01),血瘀组与正常组有统计学意义(2.118, P0.01);3.663;5.IFN-γ血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别为26.128,12.454, 16.496,P0.01),血燥组与正常组、血瘀组有统计学意义(q值分别为8.807,3.630, P0.01),血瘀组与正常组有统计学意义(q=4.189, P0.01);6.IL-4血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别为7.408,2.891,3.299 P0.01),血燥组与正常组比较有统计学意义(q=4.865, P0.01),血燥组与血瘀组间无差别P0.05),血瘀组与正常组有统计学意义(q=4.492, P0.01);7.IL-10血热组与正常组、血燥组、血瘀组相比有显著性意义(q值分别为10.619,2.190,2.437,P0.01),血燥组与正常组比较有统计学意义(q=9.001, P0.01),血燥组与血瘀组间无差别(q=0.437, P0.05),血瘀组与正常组有统计学意义(q=8.139, P0.01);8.T-bet与IL-2、IFN-γ呈正相关性,T/G与IL-2、IFN-γ呈正相关性,与GATA3呈负相关性。 结论:T-bet与Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)呈正相关性,T-bet/GATA3可能成为血热型银屑病与非血热型银屑病的客观辨证指标之一,并从转录因子和相关信号通路水平研究银屑病不同中医证型的物质基础。本研究不仅为银屑病中医辨证分型提供了一定客观依据,为中西医结合诊治寻常型银屑病提出了在微观层次上的结合点;同时也为中医药治疗免疫相关疾病研究提供了新思路。 第二部分消银汤对血热型银屑病患者的疗效及对外周血T-bet/GATA3、Th1/Th2细胞因子的影响 目的从消银汤对血热型银屑病患者的疗效、PASI评分的变化及血清中细胞因子影响,探讨消银汤治疗银屑病的可能作用机制。 方法观察20例寻常型银屑病患者治疗前后PASI评分、中医辨证评分的变化及外周血中T-bet/GATA3mRNA表达及TNF-α、IFN-γ及IL-4、IL-10水平变化,并对其水平与皮损严重度作相关分析。 结果:银屑病患者外周血T-bet及T-bet/GATA3、TNF-α、IFN-γ分别为0.1380±.06957、5.5528±0.9686、96.1370±12.2939、32.6410±6.2302,明显高于健康对照者(P0.01);银屑病患者外周血GATA3、IL-4、IL-10分别为.1540±.05910、12.8795±2.6554、12.7660±2.7021,明显低于健康对照者(P0.01)。经消银汤治疗后,T-bet、T-bet/GATA3及Th1型细胞因子较治疗前明显下降,而Th2型细胞因子水平治疗前较正常人水平低,治疗后与治疗前改变无明显差异性。T-bet/GATA3、Th1型细胞因子水平和银屑病皮损严重程度呈正相关性。 结论:银屑病是以Th1型细胞因子水平升高,Th2型细胞因子水平下降为特点的Th1/Th2偏移的免疫性疾病,消银汤可能通过抑制Th1免疫反应相对地逆转银屑病的Th1/Th2反应失衡从而达到治疗银屑病的作用。 第三部分中药药物血清对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响 目的:探讨中药消银汤药物血清对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响 方法:以HaCaT细胞为靶细胞,观察中药消银汤药物血清对10ng/ml EGF信号刺激下HaCaT细胞生长曲线的影响;用MTT法检测细胞增殖情况;用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率变化。 结果:中药消银汤药物血清影响EGF信号刺激下HaCaT细胞的生长状态并抑制其生长速度;不同浓度消银汤处理的HaCaT细胞,48h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;高浓度组,48h和72h时的抑制率分别为59.47%和73.76%。与对照组相比,经消银汤作用48h后,细胞G1期比例显著增加,S期与G2期比例则显著下降,并可抑制G1 /G2期转换,但对细胞凋亡无影响。 结论:消银汤具有抑制EGF诱导的HaCaT细胞增殖及诱导其分化的作用。 第四部分消银汤药物血清作用HaCaT细胞后差异蛋白的表达 目的:通过中药消银汤药物血清作用HaCaT细胞后蛋白差异表达的比较,寻找中药药物血清对角质形成细胞作用机制的相关蛋白,为消银汤用于治疗银屑病提供理论依据。 方法:应用蛋白芯片技术,药物血清与HaCaT细胞培养后取上清,蛋白质抽提,蛋白质定量,细胞因子检测,X-射线胶片曝光后,将胶片上的图象用扫描仪扫描并转换为灰度TIFF格式的图片文件保存。运行ScanAlyze软件,将灰度TIFF格式图片的点阵转化为数字型数据,数据分析使用芯片配套软件GEArray Analyzer对原始数据进行去背景计算及比较运算。将同组实验的2张芯片的数据进行汇总,筛选出差异的蛋白。 结果:上调2倍以上的蛋白有ALK、ErbB4、EphA4、EphA2、CSK;下调的蛋白有ABL1、ACK1、AXL、BLK、EGFR、ERBB3、FGFR1、HGFR、IGF-1R、JAK3、LCK、MUSK、NGF、ROR1、ROR2、SCFR、TEC、TRKB、VEGFR2、VEGFR3。 结论:经查阅文献发现:目前认为与银屑病发病有关的蛋白分别为VEGF/VEGFR、IGF-1R、EGFR、NGF、JAK3及HGFR,为中药消银汤治疗银屑病提供理论依据。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R275

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【引证文献】
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3 崔露阳;欧盟批准阿达木单抗治疗银屑病性关节炎和早期RA[N];医药经济报;2005年
4 南方医科大学南方医院风湿科教授 李娟 本报记者 王雪敏 曾令浩 整理;TNF——α拮抗剂:改善银屑病症状“有功”[N];医药经济报;2011年
5 王彩娟;欧盟批准英利昔单抗用于蚀斑性银屑病[N];中国医药报;2005年
6 陆志城;时势造就英雄[N];医药经济报;2002年
7 编译 李勇;RA新药开发:突破局限 高度创新[N];中国医药报;2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨桂兰;银屑病患者趋化因子受体表达的研究[D];中国协和医科大学;2003年
2 孙良丹;中国汉族人银屑病易感位点的精细定位[D];安徽医科大学;2007年
3 陶苏江;388例银屑病住院患者的回顾性临床分析[D];第二军医大学;2004年
4 张永;凉血解毒法治疗银屑病的临床及实验研究[D];南京中医药大学;2009年
5 王再兴;六个新的寻常型银屑病易感基因的鉴定[D];安徽医科大学;2010年
6 李伟;银屑病表皮角质形成细胞糖皮质激素受体核质转运障碍的机制与功能研究[D];浙江大学;2012年
7 罗权;Th17细胞在银屑病发病中的作用及意义研究[D];南方医科大学;2010年
8 于晓静;降钙素基因相关肽/MAPK信号途径在银屑病发病机制中作用的研究[D];山东大学;2007年
9 黄青;复方黄连乳膏治疗银屑病血热证的临床和实验研究[D];北京中医药大学;2004年
10 汪五清;T-bet/GATA3信号通路与银屑病中医证型的相关性及中药治疗的机制研究[D];第二军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘凤年;健康教育对银屑病患者心理健康的影响[D];广州中医药大学;2007年
2 要少茹;银屑病的生物治疗进展[D];河北医科大学;2009年
3 史宝娜;大连地区352例银屑病的回顾性分析[D];大连医科大学;2010年
4 李卫红;银屑病的生物治疗新进展[D];郑州大学;2005年
5 谭美乐;127例首次住院银屑病病例临床分析[D];广西医科大学;2008年
6 廖苑津;银屑病合并症的回顾性分析[D];浙江大学;2011年
7 张伶;中药联合心理干预预防银屑病复发的观察[D];河北医科大学;2012年
8 杨娟;银屑病住院患者中西医治疗的临床回顾性分析[D];广州中医药大学;2013年
9 刘娜;铁及其络合物对银屑病治疗作用实验研究[D];山东大学;2008年
10 胡薇;亚硒酸钠与维生素C联合应用对银屑病治疗作用实验研究[D];山东大学;2009年
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