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《第二军医大学》 2009年
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槐耳清膏诱导肝癌小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

刘学军  
【摘要】: 【背景】 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因,是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明,全世界每年新发肝癌病例约45%在我国大陆。近20年来,我国肝癌死亡率增加了41.7%,可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻[1]。研究发现,中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌,具有明显改善临床症状及体征,提高生存质量,延长生存期等作用[2]。近年来,加大了对中药的开发力度,从中药中筛选提纯出有形成份,如中药多糖,进行抗肿瘤实验,取得了一定的进展,为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌——槐栓菌(Trametes robiniophila Murr),其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品——金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道,槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗,并取得了一定的疗效:1、消化系统肿瘤:槐耳配合常规化疗方案,能显著提高胃癌术后的5年生存率[3];槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能,减轻化疗毒性,改善造血功能[4];2、呼吸系统肿瘤:槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能[5];3、血液肿瘤方面:单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达80%[6];4、其它肿瘤:槐耳对乳腺癌肿瘤[7]也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面,也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明,槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡[8],本实验将在此基础上,进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 【目的】 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌SMMC-7721细胞株的生长抑制作用; 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。 【方法】 1、MTT法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞SMMC-7721细胞株的抑制率; 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用皮下注射H22小鼠肝癌细胞,造荷瘤小鼠的模型,分为A组(空白对照组)、B组(5-Fu组)、C组(槐耳清膏组)、D组(槐耳清膏+5-Fu组),用药结束后,称瘤重,计算抑瘤率;HE染色,观察瘤组织的病理学改变;TUNEL法检测各组肿瘤组织凋亡率;用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 【结果】 1、体外抑制细胞增殖实验:槐耳清膏对肝癌SMMC-7721细胞有明显的抑制作用,且随浓度增加而上升,呈剂量-效应关系,10 mg/ml槐耳清膏组与5 mg/ml槐耳清膏组的48 h抑制率分别达到65%和55%。 2、体内抑制肿瘤生长实验:A组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于B组(5-Fu组)、C组(槐耳清膏组)和D组(槐耳清膏+5-Fu组)(P0.05,P0.05,P0.05),B,C,D组抑瘤率分别为31.2%,27.1%,47.5%,提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用;且D组抑瘤率明显高于B,C组,差异有统计学意义(P0.05),提示槐耳清膏联合5-Fu用药,可提高5-Fu抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示,凋亡率由高到低依次为:槐耳清膏联合5-Fu组、槐耳清膏组、5-Fu组、对照组,差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白Bcl-2的测定,免疫组化结果显示:对照组的Bcl-2阳性表达率为43.02±2.05%,明显高于5-Fu组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合5-Fu组的阳性表达率,差异有统计学意义(P0.05),表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞Bcl-2蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白Bax的测定,免疫组化结果显示:槐耳清膏联合5-Fu组的Bax阳性表达率87.88±9.72%,高于对照组、5-Fu组、槐耳清膏组,差异有统计学意义(P0.05);对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05),表明槐耳清膏联合5-Fu可增强Bax蛋白的表达。 【结论】 1、槐耳清膏在体外对肝癌SMMC-7721细胞有抑制其生长的作用; 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长; 3、槐耳清膏可下调Bcl-2基因蛋白表达,联合5-Fu上调Bax基因蛋白表达作用明显,认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡,抑制肿瘤生长。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5;R735.7

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