收藏本站
《第三军医大学》 2001年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人肺腺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆与初步鉴定

陈杰  
【摘要】: 肺癌细胞的多药耐药(MDR)是药物治疗失败的重要原因,突破多药耐 药障碍,提高药物治疗肺癌的效果,是肺癌基础和临床研究的重点。 目前与肺癌多药耐药有关的机制主要有以下几个方面:1.发生在细胞 膜水平的药物摄取减少和外排增多,引起细胞内药物的绝对浓度降低,如 由P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)引起得耐药。2.发生在细胞质和细胞器水 平的药物亚细胞分布的改变,使药物无法接近起作用靶点,引起药物有效 浓度降低,如由多药耐药相关蛋白(MRP)引起的耐药。3.肺耐药相关蛋白 (LRP)对化疗药物的胞吐作用。4.乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的耐药。但 是,有研究表明一些肺癌耐药表型并不表达P-gp、MRP、和LRP,经典 的多药耐药路径难以圆满解释这种现象,提示肺癌耐药性的形成可能另外 的机制,因此我们认为,随着分子生物学和相关学科的飞速发展,基因克 隆策略和技术的不断更新,利用有效的基因克隆技术,发现新的肺癌多药 耐药相关基因已成为可能。 本研究采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方式,以顺铂为诱导 药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,经过192d的诱导,建立了 人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP。MTT结果表明该细胞系对顺铂、 5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱、和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药 性。生长曲线、倍增时间、形态学和常规染色体检测显示SPC-A-1/CDDP 细胞性状稳定,是可靠的人肺腺癌多药耐药细胞系,可应用于下游实验, 同时提示大剂量冲击和逐步增加剂量相结合可缩短药物诱导时间。 在成功诱导建立肺腺癌多药耐药细胞系的基础上,应用抑制消减杂交 (SSH),以肺腺癌多药耐药细胞SPC-1-A/CDDP cDNA为实验方(Tester), 以肺腺癌细胞 SPC刁 CDNA为对照方①),结合 T/A克隆技术构建了 肺腺癌多药耐药细胞差异表达消减 CDNA文库,经斑点杂交筛选获得 21 个SPC-A4/CDDP细胞差异表达CDNA片段。测序和同源性分析表明16 个CDNA片段与已知基因有93%叫%的同源性,2个CDNA片段为新序 列(分别为 337hP 牙 494hP),在 GenBank中末发现同源性,可能代表了某 个新基因序列,Northern杂交验证结果表明。DNA片段在SPC-AJ/CDDP 细胞上高表达,为肺腺癌多药耐药细胞差异表达cDNA片段。我们的研究 表明SSH技术是筛选新基因的有效方法,2个新的CDNA片段是寻找肺腺 癌多药耐药相关基因的良好候选者,对其功能的进一步研究,有利于从另 外一个角度了解肺癌多药耐药形成的机制。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R734.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 钱桂生;呼吸系统疾病研究进展与展望[J];第三军医大学学报;2001年02期
2 胡义德,钱桂生,陈维中,肖桃元;人肺腺癌A_(549)多重抗药细胞株生物学特性变化[J];第三军医大学学报;1997年05期
3 李羲,郭先健,钱桂生,黄桂君;人肺腺癌多药抗药细胞系LC-3/CDDP细胞周期及DNA含量变化[J];河南肿瘤学杂志;1997年02期
4 刘军,袁自强,刘建东,钱晓茵,钱旻,杨金水;应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因[J];科学通报;2000年13期
5 张强,张志文,龚侃,辛殿旗,那彦群,郭应禄;应用抑制性消减杂交技术克隆鉴定肾癌特异表达基因[J];科学通报;2000年16期
6 蔡鹏,刘叙仪,韩复生,王萍;耐顺铂人肺腺癌细胞系A_(549)DDP的建立及耐药机制[J];中国肿瘤临床;1995年08期
7 戴越盟,林琦远,严律南,林萍,智星,雷松,屈艺;阿霉素诱导人肝细胞癌细胞SMMC-7721耐药性的产生及其机理的研究[J];中华肿瘤杂志;2000年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋东霞,杨胜利,何琳;恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期
2 何琳,张巧,胡杰英;抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期
3 刘烈刚,刘恭平,姚平,郝丽萍,杨雪峰,孙秀发,朱清华;维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox-3.5 mRNA表达与胚胎发育关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年03期
4 安兰敏,杨军,徐兵;铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对P53基因表达影响的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
5 何志颖,江千里,姚玉成,温丽敏,李建秀,王新民,胡以平,王健民;RFP标记的YCD基因在HeLa细胞中的表达及其介导的细胞毒性[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
6 单保恩,李俊新,张静,梁文杰,李宏芬;中药香加皮与其易混品体外抑瘤效果研究[J];癌变.畸变.突变;2005年05期
7 朱启星;马泰;涂登云;沈彤;丁锐;;银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞NO合成的影响[J];癌变.畸变.突变;2006年06期
8 朱京童;白玉;司文秀;刘洪喜;任曲辉;;中药白头翁提取物抗肿瘤活性的体外实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
9 刘俊康;吴小兰;章荣华;徐启旺;;小鼠EP瘤细胞株建立的初步研究[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
10 赵文红;庄颖;赵红;张鼎;;胆固醇诱导内皮细胞凋亡及抑制细胞增殖的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐义流;张绍铃;;梨活体花柱内花粉RNA的降解[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 郝冬海;曹珂;刘检;张予阳;;细胞损伤模型在化合物抗脑缺血活性筛选中的应用[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
3 刘俊;赵荣祥;丛品;洪钱江;;哺乳动物内耳再生毛细胞前体细胞来源的研究[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C];2009年
4 洪胜辉;张军;张蕊;王来娣;邵丹;张宜辉;董飚;段修军;龚道清;;鹅原代肝细胞的简易、高纯分离及培养[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
5 冯婷;涂文伟;黄娟;李晋蓉;殷仲伟;范营营;李虹;;流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 李新民;党琦;;天佛参口服液(TFS)诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及机理探讨[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
7 张华鹏;张剑峰;刘俊莹;王聪聪;;马铃薯病毒(PVY、PVS和PLRV)的三重RT-PCR检测[A];马铃薯产业与科技扶贫(2011)[C];2011年
8 陈秀蓉;杨成德;贾迎春;;西瓜细菌性果斑病菌的分离鉴定[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
9 王德文;王炜;左红艳;姚华;常公民;王瑞娟;高亚兵;王水明;董波;张志毅;彭瑞云;;不同波段电磁辐射对淋巴细胞的损伤效应[A];第十二届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2008年
10 周亚君;刘富中;陈钰辉;连勇;;抑制性差减杂交(SSH)技术在植物基因表达研究中的应用[A];中国茄子大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
2 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
3 李振东;东祁连山高寒草地优势植物内生细菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
4 李坤寅;橘荔散结丸有效部位对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及相关因子表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年
5 姚小磊;基于TGF-β1与Bcl-2的抗干眼症中药高通量筛选体系的建立[D];湖南中医药大学;2010年
6 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
8 钟兴;hNIS转染鼻咽癌介导放射性核素显像和治疗的实验研究[D];暨南大学;2010年
9 王猛;马尾松抑制消减文库的构建及抗病性相关基因的克隆[D];中南林业科技大学;2010年
10 温武军;鲤抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山东师范大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑瑜;银杏核心种质构建初探[D];华中农业大学;2010年
2 罗蓓蓓;苎麻茎皮差减文库的构建及纤维发育相关基因的筛选[D];华中农业大学;2010年
3 曹晶;风疹病毒(RV)包膜糖蛋白E1特异基因片段的原核表达[D];南京医科大学;2009年
4 王正茂;单纯疱疹病毒糖蛋白哺乳动物细胞表达系的建立、纯化鉴定及免疫原性分析[D];南京医科大学;2010年
5 施六霞;富血小板血浆对不同条件下人牙周膜成纤维细胞功能的影响[D];南京医科大学;2010年
6 罗素娟;家蚕细胞周期依赖性蛋白激酶家族(CDK)的研究[D];浙江理工大学;2010年
7 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
8 刘静;家蚕BmycaCR基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
9 葛红秀;家蚕钙磷蛋白(BmCAPS)的原核表达及定位分析[D];浙江理工大学;2010年
10 梁莉惠;家蚕BmCH基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 胡义德,钱桂生;人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成[J];第三军医大学学报;1994年02期
2 胡义德,钱桂生,金一尊;丁硫氨酸亚砜胺逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理的研究[J];第三军医大学学报;1995年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李佳平,李英勇,周洪贵,唐良萏,卞度宏;bcl-2基因与人卵巢癌细胞多药耐药机制的研究[J];四川肿瘤防治;2005年01期
2 周中军,林晨,陈凤,魏慧娟,罗贤懋,李佩菌,王越;人肺癌细胞阿霉素耐药株的生物学特性[J];张家口医学院学报;1994年03期
3 胡砚平;头颈肿瘤的多药耐药[J];口腔医学纵横;1999年01期
4 陈莉,许小平,王健民,李瑶,许宏,吕书晴,费新红,黄正霞;裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系基因表达谱变化分析[J];中华肿瘤杂志;2005年04期
5 曾恒,杨彩虹,陈安民;阿霉素冲击诱导人骨肉瘤多药耐药细胞模型[J];中国矫形外科杂志;2003年05期
6 杨仁池;多药耐药相关蛋白基因研究进展[J];中华血液学杂志;1995年07期
7 艾辉胜,杜耀斌,王桂林,楼方定,赖春宁,胡美茹,胡良平;三种方法检测急性白血病患者多药耐药基因表达[J];中华医学杂志;1997年11期
8 刘飞;胶质瘤细胞多药耐药研究进展[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1998年04期
9 李俐;Pgp与肿瘤的多药耐药性[J];中国肿瘤临床与康复;1998年01期
10 陈修煦;p53突变、微卫星不稳定性与多药耐药[J];国外医学.遗传学分册;1999年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘晓秋;韩英;赵阿津;;脉冲磁场对白血病细胞HL60/ADR多药耐药逆转作用及分子机制研究[A];第九届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2009年
2 费新红;许小平;陈莉;高磊;;小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
3 朱健铭;姜如金;吴康乐;王建敏;;多药耐药鲍氏不动杆菌菌株亲缘性分析[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
4 刘玉村;;应对多重耐药菌感染——措施与策略[A];中国医院协会第十六届全国医院感染管理学术年会资料汇编[C];2009年
5 陈信义;赵永晨;王继亮;刘清池;张文艺;;川芎嗪逆转急性白血病多药耐药临床研究[A];第六届全国中西医结合血液病学术会议论文汇编[C];2002年
6 杨永红;李惠芳;石永进;王逸群;张英;王奕嘉;朱平;;转mdrl基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
7 苏爱玲;陈宝安;陈宝安;丁家华;高冲;孙耘玉;程坚;赵刚;王俊;马燕;宋慧慧;;汉防己甲素对白血病细胞NF-κB表达的影响[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
8 翟宝进;邵泽勇;伍烽;王智彪;;超声波逆转肿瘤多药耐药的实验研究[A];庆祝中国超声医学工程学会成立20周年——第八届全国超声医学学术会议论文汇编[C];2004年
9 李冬云;陈信义;刘瑞娟;;单味中药成分逆转白血病多药耐药基础研究评述[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
10 白庆咸;王仲倩;陈协群;;纤维粘连蛋白在多发性骨髓瘤细胞多药耐药形成中的作用[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 衣晓峰 李晓丽;肠癌多药耐药判断有新说[N];健康报;2003年
2 记者 李天舒;纳米颗粒可对抗多药耐药菌[N];健康报;2010年
3 傅德明;红霉素逆转乳腺癌多药耐药[N];中国医药报;2001年
4 马武开 钟琴 刘正奇;中医药逆转类风湿多药耐药思路[N];中国医药报;2009年
5 记者 衣晓峰 靳万庆 通讯员 李晓丽;大肠癌多药耐药判断标准有新“尺度”[N];中国中医药报;2003年
6 宋安明;英模事迹敢人肺腑催人奋进[N];检察日报;2003年
7 论坛;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];北京科技报;2002年
8 陈汉桥;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];中国医药报;2002年
9 记者张涛;陈卫国英雄事迹感人肺腑[N];人民日报;2003年
10 殷景阳;琴声悠扬 感人肺腑[N];音乐周报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈杰;人肺腺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆与初步鉴定[D];第三军医大学;2001年
2 陈莉;白血病细胞多药耐药基因表达谱变化及其逆转策略的研究[D];第二军医大学;2002年
3 周晓冬;腺样囊性癌多药耐药机制的实验研究[D];天津医科大学;2005年
4 田彦璋;葡萄糖神经酰胺合成酶参与肝癌细胞多药耐药的实验研究[D];山西医科大学;2011年
5 王天晓;逆转肿瘤MDR的新药开发研究[D];吉林大学;2005年
6 王吉刚;TRAIL逆转白血病骨髓基质细胞粘附介导Jurkat细胞耐药的研究[D];第三军医大学;2005年
7 石琳熙;酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性的逆转作用及其机制研究[D];天津医科大学;2008年
8 赵燕秋;肿瘤耐药的分子机制研究[D];第四军医大学;2002年
9 郭杨;肺癌多药耐药的分子机制研究[D];河北医科大学;2004年
10 赵园园;三氧化二砷对人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM的耐药逆转作用及机制研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡江文;INF-γ和VPL联合逆转人肺癌细胞系HTB-56R耐药性及逆转机制的研究[D];苏州大学;2001年
2 尚东浩;蛋白激酶C(PKC)与肾细胞癌多药耐药相关性的研究[D];中国医科大学;2003年
3 姚学清;人大肠癌多药耐药细胞株LOVO/5-FU的建立及其生物学特性的研究[D];第一军医大学;2000年
4 闵婕;HBV感染与原发性肝癌生物学行为及多药耐药关系研究[D];第四军医大学;2005年
5 董会月;丹皮酚逆转人白血病耐药细胞系K562/ADM细胞多药耐药的作用研究[D];福建中医药大学;2010年
6 祝建勇;多药耐药相关蛋白1(MRP1)在梗阻性黄疸肝组织中表达及意义的初步研究[D];第三军医大学;2003年
7 梅朝蓉;溴泰君联合加温逆转MCF-7/ADM细胞株多药耐药的实验研究[D];四川大学;2005年
8 杨波;顺铂诱导人口腔腺样囊性癌多药耐药的形成及其机制的初步研究[D];第三军医大学;2004年
9 包明红;肺腺癌多药耐药细胞系的建立及耐药逆转剂的研究[D];安徽医科大学;2005年
10 朱丽波;大蒜素对胃癌细胞株SGC-7901 P-gp、GST-π表达的影响[D];中国医科大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026