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《第三军医大学》 2002年
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NOV基因对大鼠神经干细胞增殖分化及移植治疗脊髓损伤的研究

李成仁  
【摘要】: 肾母细胞瘤过度表达基因(Nephroblastoma Overexpression gene,NOV)是1991年发现的一种原癌基因,其所编码产物(NOV蛋白)是一种胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factor,IGF)结合蛋白(IGF-binding proteins,IGFBPs),属于IGF家族的成员。NOV基因是神经系统发育的一个调控因子,近年来有资料表明NOV基因与动物CNS的损伤和修复之间存在一定的关系,提示其可能参与CNS损伤后的再生和修复过程。脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后的再生问题一直是困扰神经科学工作者的大难题。科学工作者对此进行了许多研究,取得了一些成果。神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)作为细胞移植材料用于治疗SCI损伤前景可观,将NSCs移植入SCI部位后,NSCs可以与宿主组织融合在一起,然后分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,使神经组织损伤区域得以修复,并能促进脊髓功能的恢复。基因治疗也是一种促进脊髓损伤再生的有希望的措施,基因修饰NSCs移植则是结合了两者的优点。为了确定NOV对NSCs增殖分化的影响以及NOV基因工程化NSCs对SCI再生和功能修复的影响,本文就此进行了系列研究。(1)含NOV基因的全长序列的真核表达载体的构建和表达;(2)观察NOV基因对NSCs的增殖分化的影响;(3)观察NOV基因对神经元和星形胶质细胞的间缝隙连接通透性的影响;(4)将NOV基因修饰NSCs移植到大鼠脊髓全横断模型的损伤部位,观察移植物能否促进脊髓功能的恢复,来阐明NOV基因修饰NSCs在SCI恢复中所起的作用。希望通过移植物(NOV基因修饰NSCs)恒定表达NOV,使移植 区具有高浓度的**V,通过NSCs和NOV的人问作川,-。JW能为SCI再生 修复提供更合适的微环境。主要结果如下: l、利用 RTPCR的产物,采用定向克lq的方法,成功地将 NOV CDNA 全长序列克隆到 PCDNA3.l/MyC-HIS卜)/IcuZ真核表达质粒上,对克隆的 CDNA片段进行核酸测序,证明获得的重组f完全闩’合设计要求。在此基 础上,将重组质粒转染到 COS-7细胞和 NSCS中,用免7ic细胞化学技术和 Western Blot方法检测到 NOV的表达。 2、收集培养NOV/COS、7细胞的条件培养液(NO-CM),发现NOV-CM 能明显促进 NSCSsH1dR的摄入,且其作用存在一定的量效关系,提示 NOVCM能刺激NSCS的增殖;在NSCS分化时,NOV.CM可以促进NSCS 向神经元方向分化,分化出来的细胞中,神经元的比例增高。转染了NOV 基因也可以促进NSCS向神经元方向分化。 3、NOVCM能明显促进培养星形胶质细胞的‘H-TdR摄入和 GFAP的 表达,且作用存在一定的量效关系,提示NOV-CM能刺激星形胶质细胞的 增殖和活化。NOVCM能明显减弱培养是形胶质细胞和神经元的缝隙连接 的通讯能力,表现为细胞间的染料偶相和构成缝隙连接的连接蛋白43 mRNA表达的下降。 4、将 NSCS和 NOV基因修饰 NSCS移植入大鼠脊髓全横断处,结果 显示 NSCS和 NOV基因修饰NSCS能在宿主脊髓内存活和整合,并使脊髓 形态学结构达到部分恢复,HRP逆行示踪显示脊髓横断上段出现标记神经 元;行为学检测和电生理学检测显示大鼠脊髓运动功能和传导功能得到部 分恢复,其中移植NOV基因修饰NSCS使大鼠的功能恢复更好一些。 5、脊髓全横断后,大鼠坐骨神经和胳肠肌萎缩,运动终板数目减少, 移植NSCS和 NOV基因修饰NSCS入大鼠脊髓全横断后,使坐骨神经和跳 肠肌的得到部分恢复,运动终板数目有所增加。 综上所述,我们成功的构建了含NOV基因全长序列的真核表达载体。 进一步研究显示NOV可以促进NSCS向神经元方向分化;NOV促进星形 胶质细胞的增殖与活化,抑制神经元和星形胶质细胞的缝隙连接的通透性: 6 移植 NOV基因修饰 NSCS可以促进大鼠脊髓损伤后功能})15意的部分恢 复,与移植单纯NSCS相比较,移植NOV基因修订他<I放人上略微巨著一些。 结果提示*OV基因有可能具有促进脊髓损伤后山’L和功能重建的作用, 为临床治疗脊髓损伤提供线索。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R651.2

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陈德英,程赛宇,肖燕,何扬涛;神经元尼氏染色法在坐骨神经损伤研究中的应用[J];创伤外科杂志;2001年S1期
2 陈德英,程赛宇,肖艳,何扬涛;坐骨神经损伤修复过程中髓鞘变化的形态学研究[J];创伤外科杂志;2002年03期
3 刘仕勇,张可成,杨辉,蔡文琴,何家全;成年大鼠纹状体区神经干细胞的分离培养[J];解剖学报;2000年01期
4 陈秉耀,游思维,刘惠玲,李耀宇,王颖,焦西英,鞠躬;大鼠脊髓切断术后神经纤维残留量与运动功能恢复的关系[J];解剖学报;2001年02期
5 李巍,蔡文琴,吴康,秦茂林;人胚胎大脑皮层神经干细胞的分离培养[J];解剖学报;2002年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
3 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
4 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
6 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
7 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
8 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
9 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
10 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 黄家强;卜夏;李卓娅;龚非力;;人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
4 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
5 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
6 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG2基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
7 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
8 唐小江;马争;黄建勋;黄汉林;李来玉;牛侨;;正己烷引起红细胞膜血影蛋白交联的研究[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
9 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
10 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
2 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年
3 陈其华;前癃通胶囊治疗良性前列腺增生症临床观察及其对间质细胞作用的实验研究[D];湖南中医药大学;2011年
4 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
5 孟步亮;BDNF转基因成纤维细胞移植促进脊髓可塑性的分子信号通路研究[D];昆明医学院;2011年
6 许雷;大青杨纤维素合酶基因的克隆与遗传转化的研究[D];东北林业大学;2011年
7 李俣;非巴比妥类静脉全身麻醉药对大鼠皮层星形胶质细胞表达凝血酶敏感蛋白1及神经元突触数目影响的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
8 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
9 王金鹏;4α糖基转移酶环化活性定向控制及其大环糊精产物的分离及应用研究[D];江南大学;2011年
10 程光平;巴马繐唇鲃生物学及遗传学研究[D];中国海洋大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
2 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
3 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
4 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
5 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
6 李静;父源性HLA-A基因与子痫前期相关性研究[D];郑州大学;2010年
7 张燕松;肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究[D];郑州大学;2010年
8 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
9 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
10 陈操;日本七鳃鳗抗增殖蛋白Prohibitin1研究及类B淋巴细胞免疫调节初探[D];辽宁师范大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 刘仕勇,张可成,杨辉,蔡文琴,何家全;成年大鼠纹状体区神经干细胞的分离培养[J];解剖学报;2000年01期
2 佟向军,陈建国,翟中和;神经丝的结构与功能[J];细胞生物学杂志;1998年02期
3 韩久卉,张英泽,许秀兰,田德虎;睫状神经营养因子对周围神经损伤后再生的影响[J];中国骨伤;2000年10期
4 罗永湘,方煌,庞清江,马金忠;神经生长因子对周围神经运动纤维再生的影响[J];中华手外科杂志;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋海涛,贾连顺,陈哲宇,沈强,路长林,强华&&;胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后功能和体质量的影响[J];第二军医大学学报;2000年11期
2 彭亦良,吴梅英,崔大勇;同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤[J];第三军医大学学报;2000年07期
3 弓立群,徐洪海,常彦海,马战胜;脊髓损伤早期药物治疗临床观察[J];陕西医学杂志;2000年09期
4 汤宇,胥少汀;脊髓损伤与基因治疗[J];中华创伤杂志;2000年02期
5 胥少汀;人体脊髓损伤的病理与临床联系[J];中华骨科杂志;2000年11期
6 李亚非,巩西启,李青,时述山,姚建华;脊髓损伤后髓内内皮素-1的表达与继发性脊髓损伤的关系[J];中华实验外科杂志;2000年05期
7 谭华绣,左勤学;急性胸腰段脊柱脊髓损伤诊断中多神影像的互补作用[J];郴州医专学报;2000年02期
8 千怀兴;脊髓损伤人群中的自杀与功能状况的关系[J];国外医学(物理医学与康复学分册);2000年03期
9 王廷华;脊髓损伤的相关问题(英文)[J];昆明医学院学报;2000年01期
10 刘宏亮,吴宗耀;不同频率毫米波治疗脊髓损伤的实验研究[J];现代康复;2000年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 种清治;;中药治疗脊髓损伤的研究进展[A];第五届整脊医学学术会议论文集[C];2009年
2 许光旭;林枫;励建安;;脊髓损伤后心血管功能障碍与康复[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
3 孙天胜;;脊髓损伤临床及研究进展[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
4 张淑莲;赵宏伟;;脊髓损伤患者健康教育知识需求调查与对策[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
5 吴娟;廖利民;李丹;付光;李东;;骶髓下脊髓损伤患者泌尿系表现及康复[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
6 张志成;孙天胜;;胸腰段脊柱脊髓损伤的标准化评估[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
7 于铁强;冯世庆;郑永发;孙景城;雪原;王沛;郭世绂;;216例外伤性脊髓损伤住院患者流行病学分析[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
8 辛国强;袁绍纪;卢培刚;;脊髓损伤的药物治疗进展[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
9 彭敏;邹育庭;廖公平;;探讨康复对脊髓损伤患者生活自理能力的影响[A];中国康复医学会第七次全国康复治疗学术会议主题报告、学术交流论文汇编[C];2010年
10 刘宏亮;;不同频率毫米波治疗脊髓损伤的实验研究[A];第三届全国康复医学青年学术会议论文集[C];1999年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 于亚军;首届全国脊髓损伤外科治疗与康复研讨会在我市召开[N];呼和浩特日报(汉);2009年
2 ;北京:脊髓损伤发病率过高[N];健康时报;2003年
3 编译 于娜;早期脊髓损伤有新疗法[N];医药经济报;2009年
4 通讯员 陈亚伟 记者 徐丹鹿;我国每年脊髓损伤者数万人[N];光明日报;2003年
5 上海杨浦 朱群邦;脊髓损伤患者的家居环境改进[N];上海中医药报;2012年
6 上海浦东 陆至顺;脊髓损伤患者的心理特征[N];上海中医药报;2013年
7 ;脊髓损伤康复赶早[N];保健时报;2005年
8 郑颖璠;脊髓损伤研究的困惑与希望[N];健康报;2006年
9 陈亚伟;每年脊髓损伤数万人四分之一因错误救助加重病情[N];中国消费者报;2003年
10 本报记者 刘恕;点燃脊髓损伤患者新希望[N];科技日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙利波;脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1的免疫应答及调控因素[D];吉林大学;2009年
2 时素华;电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡相关因子及神经再生的影响[D];北京中医药大学;2011年
3 张新宇;脊髓损伤后一氧化氮合酶的表达特征及其反义核酸的应用研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
4 吴昊天;脊髓损伤的基础及腺病毒介导的胶质细胞源性神经营养因子转染促进脊髓损伤后神经功能恢复的实验研究[D];河北医科大学;2005年
5 郑得志;钙蛋白酶在脊髓损伤中的作用及相关机制的研究[D];吉林大学;2006年
6 陈银海;脊髓损伤康复的临床研究[D];第一军医大学;2007年
7 卢培刚;高压氧和低压缺氧预处理对大鼠脊髓损伤神经保护作用及机制的实验研究[D];第三军医大学;2008年
8 任长乐;滋补脾阴方药联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤影响的实验研究[D];大连医科大学;2009年
9 姚树智;骨髓间充质干细胞定向分化及其静脉移植治疗脊髓损伤机制研究[D];吉林大学;2010年
10 潘文明;大鼠脊髓损伤后细胞自噬的表达及作用的实验研究[D];苏州大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谢斌;自体骨髓基质干细胞移植联合电刺激疗脊髓损伤的实验研究[D];山东大学;2008年
2 王子田;大鼠脊髓损伤后小胶质细胞的激活与血脊髓屏障的变化的研究[D];第四军医大学;2008年
3 常小波;锂盐对脊髓损伤大鼠的治疗效果[D];同济大学;2007年
4 盛斌;医源性脊髓损伤危险因素的回顾性研究[D];中南大学;2009年
5 崔贵祥;自体骨髓单个核细胞治疗脊髓损伤的临床研究[D];山东大学;2009年
6 王楠;丙二醛在继发性脊髓损伤中的表达及其意义[D];中国医科大学;2010年
7 王慧;不同免疫状态对小鼠脊髓损伤后修复的影响[D];第四军医大学;2010年
8 倪翠萍;冰敷对大鼠脊髓损伤影响的实验研究[D];吉林大学;2011年
9 何永志;降纤酶对脊髓损伤后血管内皮生长因子的表达及细胞凋亡的影响[D];福建医科大学;2011年
10 成鹏;神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验性研究[D];兰州大学;2011年
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