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《第三军医大学》 2002年
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抗精子多肽抗体的制备和对人精子功能影响的实验研究

李玉艳  
【摘要】: 受精过程包括精子成熟、附着、结合、顶体反应、穿卵、融合、皮质反应、双方配子的带反应和核聚变等过程,而抗精子抗体可通过降低精子速度、减少顶体反应率、抑制精卵结合等途径来影响精子受精功能,导致免疫性不孕。利用精子抗原来制作避孕疫苗,已成为免疫避孕的研究热点。 精子蛋白SP17位于精子顶体部位,与精子顶体跨膜蛋白Cyritestin一样,均在精-卵透明带结合、精-卵膜结合和融合过程中发挥重要作用。本研究利用已经获得的含SP17和Cyritestin表位的人工合成35肽(P3肽)和抗P3肽兔血清,探讨抗P3抗体与人精子的结合和对受精过程的影响及其程度,评价人工合成的P3肽对人精子功能的影响,旨在对其生物学特性进行深入研究。 实验分两部分进行。第一部分运用试剂盒,将P3多肽通过EDC与KLH载体蛋白结合,免疫BALB/C小鼠,收获血清经过柱纯化,获得抗P3抗体,用FITC直接标记,通过流式细胞仪检测抗体与精子结合的阳性率,即抗体与人精子的结合率,用荧光显微镜观察抗体与人精子的结合部位,并且采用免疫组化方法,以抗Cyritestin单抗为阳性对照,观察含抗P3抗体的兔血清与人精子的结合部位。第二部分将人精子与含抗体血清共同孵育,利用CASA系统检测人精子活动力,用FITC-PSA法及考马斯亮蓝法检测顶体反应率,通过SPA法检测穿卵率,评价抗体对人精子功能的影响及其程度。 抗体经纯化、标记后与精子表面的结合率可达97.7%,抗体血清与人精子孵育后,用羊抗人IgG检测阳性率从49.2%降至36.4%,荧光显微镜见精子头颈部着色,部分见赤道板或顶端荧光增强,免疫组化染色见精子头部着深褐色,与阳性对照一致。抗体血清与人精子孵育后运动速度、各项运动精子百分率及其他各项指标均显著下降,并且与抗体浓度变化有一定关系, WP=7 精子顶体反应率及穿卵率也显著下降。 结论:P3肽在精子头部表面有表达,特异性抗P3抗体可与其高度结合;抗P3抗体可显著影响精子的活动力、顶体反应和穿卵率,可干扰精子受精功能,因此P3肽对人精子受精功能有影响,具有一定的开发前景。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R392

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【参考文献】
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