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《第三军医大学》 2003年
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高分化胰腺癌多药耐药机制及靶向逆转的初步研究

汪涛  
【摘要】: 目的:从多药耐药膜转运蛋白角度探讨高分化胰腺癌的耐药及调控机制;研究阻断体外培养的人高分化胰腺癌细胞株SW1990 IGF-ⅠR环路对多药耐药蛋白MRP表达的调节作用;评价IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染对SW1990胰腺癌细胞株化疗敏感性的影响。 方法:1、收集2000.4-2001.12月间四家医院的高分化胰腺癌手术切除病理标本26例,每个标本作连续切片,采用免疫组化SP法分别检测三种多药耐药膜转运蛋白P-gp、MRP、LRP和IGF-ⅠR在胰腺癌组织和癌周组织中的表达,并作对比研究和相关性分析;2、采用自行设计的混合骨架IGF-ⅠR反义寡核苷酸,在非脂质体配方的FugeneTM6试剂介导下转染体外培养指数期生长的高分化胰腺癌细胞株SW1990,在转染后12、24、48、72、96小时连续观测IGF-ⅠR的水平变化,了解该序列IGF-ⅠR反义寡核苷酸对IGF-ⅠR表达的干预效果;同时,免疫组化、Wester-blot和RT-PCR检测转染对MRP在蛋白和mRNA水平表达的影响。3、在前面研究的基础上,采用不同剂量IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染SW1990细胞,高效液相色谱仪比较转染前后5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、Gemcitabine三种不同结构化疗药物在细胞内蓄积浓度的变化;四氮唑蓝法、流式细胞仪和AO荧光染色检测转染联合化疗对胰腺癌细胞杀伤效应、细胞周期和凋亡易感性的影响。设立空白转染、DMEM假转染和IGF-ⅠR正义寡核苷酸转染作为对照组。 结果:1.1、在高分化胰腺癌组织中,三种多药耐药膜转运蛋白呈差异性表达:MRP最高(76.9%),P-gp次之(42.3%),LRP仅7.69%;而癌旁组织中,其表达亦不均衡:P-gp为34.6%,MRP7.69%,LRP未检测到表达;MRP在胰腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P0.05),但P-gp和LRP在胰腺癌和癌旁组织的表达则无明显差异(P>0.05);1.2、IGF-ⅠR在高分化胰腺癌组织中过度表达(73.1%),而在癌周基本不表达,相关分析显示,IGF-ⅠR与MRP在高分化胰腺癌组织中的表达明显正相 WP=10 关(rs=0.711,P0.02)。2.1、体外培养的SW1990胰腺癌细胞呈典型的上皮样细胞生长特征,高表达IGF-ⅠR和MRP,免疫组化显示表达部位主要位于细胞的胞浆和胞膜,而部分胞核也可着色;2.2、IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染后,SW1990胰腺癌细胞的IGF-ⅠR在蛋白和mRNA水平均明显下降,与对照组相比差异显著(P0.05):免疫组化显示IGF-ⅠR蛋白的阳性表达率在空白对照组为84.2%,转染后12、24、48、72、96小时分别为51.3%、22.6%、19.7%、38.8%和62.4%;RT-PCR显示各时相点IGF-ⅠR mRNA的表达量分别是空白对照组SW1990胰腺癌细胞表达水平的60.6%、34.2%、26.3%、45.8%和76.5%;2.3、IGF-ⅠR反义寡核苷酸能显著下调SW1990胰腺癌细胞MRP在蛋白和mRNA水平的表达(P0.05),且与IGF-ⅠR变化规律一致:在转染12、24、48、72、96小时,MRP的表达量分别是空白转染组的83.6%、52.6%、39.3%、62.6%和91.8%(免疫组化SP);58.3%、38.6%、29.5%、54.4%和81.1%(Western-blot);52.6%、30.9%、25.5%、48.3%和76.8%(RT-PCR)。3.1、IGF-ⅠR反义寡核苷酸能明显提高化疗药物在SW1990胰腺癌细胞内的蓄积浓度,与对照组比较差异显著(P0.05),蓄积浓度随反义寡核苷酸转染剂量的升高而增加;3.2、单纯IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染对SW1990胰腺癌细胞有低水平的杀伤效应,而转染联合化疗对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强,显著高于单纯化疗组和转染组(P0.05),并分别随转染剂量和化疗给药浓度的增加而增强;3.3、流式细胞仪检测发现,给予单纯化疗干预或反义寡核苷酸转染,细胞周期均出现相同变化:G0/G1期细胞比例上升,G2、M期比例下降;而反义寡核苷酸转染联合化疗,则对SW1990的细胞周期抑制作用更为明显,无论与单纯反义寡核苷酸转染还是化疗相比,G0/G1期细胞比率均有显著上升;3.4、AO荧光染色显示,指数期生长的人胰腺癌细胞株SW1990自然凋亡率极低,仅为0.72%左右;在与化疗药物共同孵育后,出现典型的凋亡表现,凋亡率随化疗浓度升高而增加;在IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染后,可出现SW1990细胞凋亡的显著增加(P0.05),两者有量效关系;但在IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染联合化疗时,细胞凋亡率只在较低转染水平和化疗浓度时呈上升趋势,而在较高的转染水平和化疗浓度时反而下降。 结论:1、MRP是高分化胰腺癌组织中的“优势耐药蛋白”,在胰腺癌和癌周组织中的差异性表达提示它是肿瘤发生和行进过程中获得的一种新型耐药机制;2、IGF-ⅠR作为许多恶性肿瘤的共性标志物,是一种具有强大生物学活性的调节因子,在高分化胰腺癌组织中过度表达,可能参与多药耐药蛋白MRP的调控,是MRP的重要上游事件;3、体外培养的SW1990人胰腺癌细胞株同时高表达IGF-ⅠR和MRP,可作为研究原发性多药耐药的良好细胞模型;4、与前期的反义技术相比较,本研究所设计的IGF-ⅠR反义寡核苷酸对IGF-ⅠR的干预在起效时间、下调幅度和持续抑制上都有明显提高,这得益于IGF-ⅠR反义寡核苷酸靶序列的确立、活性基团的修饰和 WP=11 FugeneTM6试剂的辅助转染;5、IGF-ⅠR反义寡核苷酸可明显抑制胰腺癌细胞株SW1990的MRP表达,证实IGF-ⅠR对MRP的调控作用,即通过某种内在化机制在mRNA水平干扰MRP
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R735.9

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 潘启超,田晖;多种中药单体逆转肿瘤多药耐药性[J];科学通报;1995年20期
2 王升启;反义寡核苷酸的化学修饰[J];生物化学与生物物理进展;1995年06期
3 王宝成,郭军,狄剑时,师秋丽;榄香烯乳剂与肿瘤多药耐药的基础研究[J];中国肿瘤临床;1996年02期
4 徐勤生,王玉芝,黄志强,冯玉泉,周宁新;IGF-Ⅰ受体反义寡核苷酸对胰腺癌生长的抑制作用[J];中华普通外科杂志;1999年05期
5 许元富,杨纯正;细胞凋亡的抑制和肿瘤细胞耐药[J];中华血液学杂志;1997年06期
6 杨骅,王仙平,郁琳琳,郑树;榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞凋亡[J];中华肿瘤杂志;1996年03期
7 潘宏铭,胡汛,吴金民,郑树;大肠癌抗多药性细胞株SW1116/DOX的建立及茶多酚复合体的逆转作用研究[J];肿瘤;1997年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜娟;中药抗肿瘤免疫的研究进展[J];中医药临床杂志;2004年05期
2 王辉;;粗茶多酚中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的提取方法研究[J];安徽农业科学;2008年21期
3 刘顺珍;刘红星;张丽霞;黄燕敏;;金橘叶和金橘果皮挥发油成分的分析[J];安徽农业科学;2011年26期
4 张沐香;榄香烯对肺癌化疗增敏作用的临床观察[J];安徽医学;1997年01期
5 梁广;李校堃;刘敏;黄志锋;;莪术油的药学及临床应用研究概况[J];安徽医药;2006年12期
6 吴著群;胡建鹏;任慧慧;;中医药治疗肺癌的研究进展[J];安徽医药;2007年06期
7 林明雄,王发渭,窦永起;中药拮抗肿瘤多药耐药机制研究近况[J];安徽中医学院学报;2002年04期
8 许建华,范忠泽;MDR1/P-gp与大肠癌多药耐药及中医药研究概况[J];安徽中医学院学报;2004年05期
9 周林,艾中立,刘志苏,钱群,何跃明;复方苦参水溶液体外对人结肠癌细胞SW480的影响[J];癌症;2000年04期
10 王树滨,杨纯正;肿瘤化疗药物诱导细胞凋亡的研究进展[J];癌症;2000年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张梅;李平;;中医药干预肿瘤微转移的思路探讨[A];中医药理论与应用研究——安徽中医药继承与创新博士科技论坛论文集[C];2008年
2 石舒翔;杨华;;血管内栓塞与超选择动脉内化疗在胶质瘤治疗方面的临床应用[A];贵州省医学会神经外科学分会第七届学术交流会暨神经外科学新进展学习班论文集[C];2006年
3 王玉;张印红;;复方壳寡糖诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究[A];营养与食品——健康中国高级论坛Ⅱ论文集[C];2008年
4 柳晨;朱赛杰;黄容琴;裴元英;;硬脂酸聚烃氧(40)酯对P-糖蛋白和细胞色素P4503A4的影响[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
5 李杰;郭伟剑;;乳腺癌多药耐药性及其逆转的基础与临床研究[A];中国临床肿瘤学教育专辑(2002)——中国抗癌协会第六届临床肿瘤协作中心(CSCO)学术年会论文集[C];2002年
6 项柏康;;胃癌多药耐药基因研究的进展[A];第九届全国中西医结合普通外科学术交流大会暨胆道胰腺疾病新进展学习班论文汇编[C];2005年
7 张梅;李平;;中医药干预肿瘤微转移的思路探讨[A];第六次全国中西医结合中青年学术研讨会论文集[C];2008年
8 李玉玲;;肿瘤“血瘀证”及活血化瘀方药抗肿瘤作用的研究进展[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2000年
9 徐晓东;;中药治疗肿瘤的机理探讨[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年
10 李学庆;王承;索丽霞;;中西药物治疗肿瘤的研究进展[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王银河;胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)下调对人骨肉瘤Saos-2细胞生物学特性的影响[D];南京医科大学;2009年
2 李明玉;硬骨鱼类IGF信号通路两个重要基因的结构和功能研究[D];中国海洋大学;2010年
3 刘明英;文昌鱼(Branchiostoma japonicum)Plgl和IGF基因的表达和功能[D];中国海洋大学;2010年
4 王惠娟;健脾祛瘀合剂联合胃镜下电凝电切术综合干预胃息肉的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
5 孟德连;精氨酸家族对肉鸡生长和脂肪代谢及肉品质相关基因转录表达水平的影响研究[D];西北农林科技大学;2010年
6 贺常亮;治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选及其作用机理研究[D];吉林大学;2011年
7 田铭;X射线和喜树碱对外周血淋巴细胞不同细胞亚群生物学效应的研究[D];华中科技大学;2011年
8 曹长姝;中药臭灵丹中HTMF体外抗肿瘤机制研究[D];暨南大学;2011年
9 刘卫海;新藤黄酸抗肿瘤作用及其机制研究[D];广州中医药大学;2011年
10 金晶;Pin1在人恶性黑色素瘤发生发展中作用研究 Pin1抑制剂的筛选及机制研究 XLN306的抗肿瘤作用及机制研究[D];北京协和医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王秀娟;藤梨根干预食管癌细胞Ec9706/cDDPpolβ的研究[D];河南中医学院;2010年
2 赵永杰;艾克达康颗粒对中期原发性肝癌患者CD4~+、CD8~+活性的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 杨丹;平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 程堃;理冲生髓饮对卵巢癌术后化疗患者减毒增效作用的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
5 李家曌;肺抑瘤合剂配合厄洛替尼治疗肺腺癌的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
6 徐军;大黄蛰虫丸配合化疗治疗胰腺癌血瘀证的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
7 鞠建峰;温莪术中β-榄香烯的分离鉴定及抑制肿瘤细胞增殖作用研究[D];山东中医药大学;2008年
8 张超;洋葱、莪术、川芎三种植物挥发性成分的提取和分析[D];华东理工大学;2011年
9 黄金;胃癌手术前后及榄香烯干预对细胞周期蛋白质cyclinD1、p16、p27的比较研究[D];山西医科大学;2011年
10 刘兆辉;苦参碱逆转T24/ADM细胞耐药性的研究[D];山西医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘燕,潘启超;钙通道阻滞剂对长春碱类抗癌药物的体内体外增效作用[J];癌症;1991年06期
2 傅乃武,全兰萍,郭永沺,时继慧;β-榄香烯的抗肿瘤作用和药理学研究[J];中药通报;1984年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨雅莹;易永芬;张晓燕;肖春卫;林晓;周文文;;Effect of MUC2 Antisense Oligodeoxynucleotide on Cell Proliferation,Adhesion,and Proteolytic Enzyme in Human Gastric Carcinoma in vitro[J];Chinese Journal of Cancer Research;2007年04期
2 ;Depressive Effect of the Antisense Oligonucleotides of C-myc and PCNA on the Proliferation of VSMC[J];South China Journal of Cardiology;2007年04期
3 陈涛;郭丽娜;蒋建伟;李海成;钱明;江勇;陈燕梅;钟球;;靶向蛋白激酶C-α的ASODN诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡[J];广东医学;2010年18期
4 贾红丽;冯珏;张秀梅;杨阳;李晓东;;脂质体包裹~(99m)Tc-HYNIC-Survivin ASODN的鸟嘌呤含量与启动子位置对显像质量的影响[J];中国医学影像技术;2011年03期
5 刘涛;谢民强;马栋;许熠铭;张宏征;张涛;;FA-MNP-MMP-9-ASODN复合物构建及其分子靶向研究[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2013年11期
6 王文喜;代凯;唐岚;;八聚精氨酸修饰的载ASODN脂质体的构建及体外评价[J];浙江工业大学学报;2014年03期
7 ;Survivin antisense oligodeoxynucleotide inhibits growth of gastric cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年08期
8 ;Enhanced therapeutic effects for human pancreatic cancer by application K-ras and IGF-IR antisense oligodeoxynucleotides[J];World Journal of Gastroenterology;2008年33期
9 刘涛;谢民强;许熠铭;张宏征;张涛;;FA-MNP-MMP-9-ASODN纳米复合物对鼻咽癌的体外抑制研究[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2014年09期
10 罗华友,严律南,杨家印,刘自明,林琦远;ASODN逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因mdr1的体内实验研究[J];中国普外基础与临床杂志;2004年02期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 邵彦江;张振中;;靶向Lipo/PEI/ASODN复合物的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
2 ;Effects of survivin siRNA gene on prostate cancer cell lines PC3[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
3 张艳华;李佩玲;;脂质体介导的ILK—ASODN抑制卵巢癌细胞增殖的体外实验研究[A];东北三省第四届妇产科学术会议论文汇编[C];2008年
4 蔡海东;谯娱;袁雪宇;;以jetPEI-RGD为载体的~(125)I-(αV)ASODN投递对人肝癌细胞侵袭的抑制作用[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
5 程文;荆慧;张久维;;超声介导靶向微泡促进c-myc ASODN在肝癌细胞的表达[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年
6 蔡海东;谯娱;袁雪宇;;jetPEI-RGD介导的~(125)I-(αV)ASODN对人HCC细胞生长抑制作用的实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
7 江其生;任建平;王升启;;靶向PAI-1mRNA的新型溶栓反义药物研究[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
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1 李斌生;载端粒酶ASODN-t的壳聚糖纳米粒的制备和对肝癌HepG-2细胞的转染[D];中南大学;2007年
2 高凯;c-myb在胶质瘤细胞中的表达及~(125)IUdR-ASODN对C_6胶质瘤细胞增殖的影响[D];中国医科大学;2006年
3 陈志涛;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人肺癌细胞A549侵袭力抑制作用的实验研究[D];山东大学;2011年
4 陈余清;肺癌的Survivin基因表达及其靶向治疗的研究[D];复旦大学;2004年
5 蒋绍博;PCNA反义寡核苷酸对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖抑制机制的研究[D];山东大学;2005年
6 曹永倩;紫杉醇及survivin反义寡核苷酸对恶性黑色素瘤细胞作用的实验研究[D];山东大学;2010年
7 汪涛;高分化胰腺癌多药耐药机制及靶向逆转的初步研究[D];第三军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐越;脑胶质瘤端粒酶反义寡核苷酸纳米微粒的制备及治疗研究[D];南方医科大学;2008年
2 石群;ASODN逆转人胃腺癌SGC7901/ADM细胞多药耐药的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
3 杨敏;MK-ASODN增强绒毛膜癌细胞对5-FU化疗敏感性的研究[D];中南大学;2012年
4 邓长弓;ASODN转染骨肉瘤细胞对Survivin与VEGF表达的影响[D];重庆医科大学;2008年
5 魏玮;Bcl-2ASODN及bax联合转染增强人宫颈癌Hela细胞放射敏感性的实验研究[D];山东大学;2007年
6 陈涛;PEI介导的PKC-α ASODN对SMMC-7721肝癌细胞的生物学作用[D];暨南大学;2008年
7 于芳;反义寡核苷酸抑制LA-N-5细胞VEGF表达及生物效应的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
8 顾文东;HIF-1α ASODN对人肺癌裸鼠移植瘤HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达的影响[D];苏州大学;2008年
9 王蕾艳;联合转染VEGF和PCNA-ASODN对实验兔血管成形术后再狭窄的影响[D];山东大学;2011年
10 王璐璐;血管内皮生长因子受体3和神经纤毛蛋白2的反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响[D];重庆医科大学;2012年
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