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《第三军医大学》 2003年
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中药地黄中寡糖的提取分离及灌胃给药对实验性糖尿病大鼠的药理作用

王晓莉  
【摘要】: 前 言 糖尿病是一种常见的内分泌疾病,由胰岛素分泌绝对或相对不足引起,主要表现为机体糖、蛋白质、脂肪及水电解质的代谢紊乱,目前尚无彻底根治的措施。因其晚期常伴发多种严重并发症,死亡率在非传染性疾病中仅次于肿瘤和心血管病居第三位,已成为威胁人类健康的全球性公共卫生问题。在我国,随着人民生活水平的不断提高,糖尿病的发病人数呈逐年上升之势。目前临床用于治疗糖尿病的药物主要有磺脲类、双胍类口服降糖药、胰岛素和胰岛素增敏剂等,这些药物降糖作用肯定,但长期应用可出现较多不良反应,且其疗效在胰岛素抵抗的患者均受到限制。迄今的研究表明,胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要发病机制,而2型糖尿病占所有糖尿病患者的90%以上。因此,寻找开发针对胰岛素抵抗的安全有效的抗糖尿病药物一直备受各国医药科技工作者的重视,是全球医药研究的热点之一。 传统中医药是祖国的医学宝库,中医药治疗糖尿病(消渴病)具有悠久的历史,经长期的临床实践证明确有疗效且安全性高,其中地黄即为一味主要的药物。近年采用实验性糖尿病模型大鼠的研究发现,地黄化学组成中含量较高的寡糖(Rehmannia glutinosa oligosaccharides, ROS)组分腹腔注射可明显降低血糖,并对去胸腺大鼠神经内分泌调节网络失调状态下的糖代谢紊乱有较好的恢复调整作用。由于地黄寡糖为非消化性糖类,经口服给药后是否仍具有降糖作用并不清楚,同时采用常规的水提方法对地黄寡糖提取的影响如何也未见报道。因此,本文选择地黄寡糖中的一种成分,以HPLC分析方法考察寡糖部位的水提取分离工艺,并对获得的地黄寡糖部位采用四氧嘧啶糖尿病模型大鼠进行药理学研究,以期明确地黄治疗糖尿病的有效成分,为进一步开发利用中药地黄奠定基础。 研究分三部分进行: 一、地黄降糖活性部位的提取分离工艺研究。 二、地黄提取部位灌胃给药的降糖作用筛选研究。 三、地黄降糖活性提取部位作用机制的初步研究。 WP=8 实验方法 一、采用常规水煎煮提取工艺,通过正交实验考察提取次数、提取时间和溶媒用量对水提取物及组分的影响;并以地黄寡糖中的主要成分水苏糖为标志,采用高效液相色谱法进行含量测定。 二、采用离子交换树脂和活性炭柱层析,进行地黄寡糖组分的初步纯化分离。 三、采用禁食及不禁食正常大鼠、葡萄糖及肾上腺素致高血糖大鼠,观察地黄不同提取部位灌胃给药对血糖的影响。 四、采用四氧嘧啶诱导糖尿病模型大鼠,观察地黄活性部位对大鼠血糖、体重及胰腺组织结构的影响。并从给药前后大鼠血胰岛素水平、糖脂代谢(肝糖原、血脂)、肠道菌群等方面对地黄寡糖组分抗糖尿病的机制进行初步探讨。 实验结果 一、地黄寡糖组分的水提取工艺条件 正交实验研究表明,以地黄水提物重量考察,影响提取的因素依次为提取次数B>提取溶剂量A>提取时间C,最佳提取条件为A3B3C2,即每次15倍溶剂体积,提取1小时,提取3次;以水提物中水苏糖含量进行分析,影响因素为C>B>A,最佳条件为A2B3C3,即溶剂体积10倍,提取1.5小时,提取3次,地黄水提物重量与地黄水提物中水苏糖含量不呈正比关系。而对地黄中水苏糖提取率的考察显示,影响地黄中水苏糖提取率的主次因素依次为B>A>C。最佳提取条件为A2B3C3,即溶剂体积10倍,提取1.5小时,提取3次,与对地黄水提物中水苏糖含量考察所得的最佳条件一致。综合正交实验结果分析,确定地黄寡糖组分的理想提取条件为A2B2C3,即每次10倍溶剂体积,提取1.5小时,提取2次。 二、寡糖组分水苏糖的HPLC分析方法 建立了寡糖组分水苏糖的HPLC分析方法,标准曲线的回归方程为Y = 15586.31+26128.71X, r=0.997,浓度范围1.25(20mg/ml;精密度RSD=0.16%、日间RSD=0.12%、平均回收率为99.67%,RSD 2.29%,表明该方法稳定可靠。 三、地黄寡糖组分的初步纯化 采用阴、阳离子交换树脂和活性炭柱层析,分别用水、5%、10%、20%乙醇洗脱得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四个部位。其中以部位Ⅲ的得量最高,达16.89%,HPLC分析表明含寡糖组分最高,杂质较少。 四、地黄不同提取部位的降血糖作用 采用葡萄糖高血糖模型大鼠灌胃给予地黄不同提取部位的实验结果证明,主要含地黄寡糖组分的部位Ⅲ具有较强的降血糖作用,且急性毒性试验显示几乎无毒性。 WP=9 五、部位Ⅲ的降糖作用研究 1. 部位Ⅲ可显著降低葡萄糖、肾上腺素诱发的高血糖和四氧嘧啶糖尿病模型大鼠的血糖水平,并对损伤的四氧嘧啶糖尿病模型大鼠胰岛组织结构具有明显的修复作用,作用无明显的剂量-效应关系。 2. 部位Ⅲ(200 mg·kg-1)可使四氧嘧啶糖尿病大鼠血清胰岛素浓度及肝糖原含量增加,血中胆固醇及甘油三酯含量下降,肠道菌群中双歧杆菌、乳杆菌等优势菌群的数量明显增加。 结 论 一、水提取地黄寡糖组分按A2B2C3,即每次10倍溶剂体积,提取1.5小时,提取2次的工艺条件较理想。 二、所建立的寡糖组分水苏糖的HPLC分析方法简便、稳定、可靠。 三、主要含地黄寡糖组分的部位Ⅲ是地黄降糖作用的主要活性部位,其中的寡糖组分可能是主要的有效成分。 四、地黄寡糖组分抗糖?
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R285

【引证文献】
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