收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

斯氏按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系及信号调控机制研究

杨松  
【摘要】:黑化包裹是按蚊抗疟原虫的一种特异的防御机制,可能是疟原虫表面分子与可溶性模式识别受体结合而触发,并激活丝氨酸蛋白酶(serine protease,SP)级联,最终导致前酚氧化酶(PPO)的分解激活酚氧化酶(PO),PO和其它蛋白质发生交联而黑化包裹疟原虫。但还不知道PPO是如何到中肠组织内的,如何发生蛋白酶级联的,以及如何参与雌按蚊内疟原虫卵囊黑化过程的。疟原虫在按蚊中肠内外经历了配子体、合子、动合子和卵囊4个阶段,卵囊成熟后,子孢子逸出最后到达唾液腺而发育为感染期。斯氏按蚊是约氏疟原虫的易感媒介,卵囊很少黑化,本文利用斯氏按蚊吸饲硝喹乙酸盐(Nitroquine acetate,NA)诱导产生约氏疟原虫卵囊黑化模型,在血细胞或中肠差异表达的黑化相关蛋白或基因分析基础上初步探讨诱导黑化及其信号调控机制。 1.我们利用光镜和透射电子显微镜观察到用药诱导后的约氏疟原虫卵囊黑化颗粒,中肠代谢和超微结构异常改变,细胞间隙增宽。 2.利用Bradford法测定不同食源条件下斯氏按蚊雌蚊血淋巴和中肠蛋白浓度差异。统计学分析发现,NA组血淋巴蛋白浓度显著下降,而IB和NA组间中肠蛋白浓度无显著性差异。 3.血淋巴SDS-PAGE显示NA、IB、NB和S组均可见到数十条蛋白带,分子量在160kDa和66kDa蛋白差异非常明显,吸正常血及感染1d后66kDa蛋白表达增加,感染6~8d稍减弱,用药1、2d稍增强,3d开始下降。而160kDa蛋白在吸正常血及感染1d后呈上调表达,以后减弱。 4.对NA和IB组血淋巴和中肠蛋白进行2-DE和考马斯亮蓝染色,然后利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱的肽质量指纹图谱从15个血淋巴差异蛋白中初步鉴定出一种SP。利用抗冈比亚按蚊SP22D和PPO抗体进行Western印迹发现在NA和IB组蚊存在SP22D和PPO蛋白,约氏疟原虫感染后斯氏按蚊血淋巴SP22D和PPO表达增强,至6d达到峰值,在NA处理卵囊黑化过程中表达逐渐下降,但是黑化后斯氏按蚊中肠PPO含量呈现上升趋势。2-DE和Western印迹提示雌斯氏按蚊成蚊血淋巴内存在PPO和SP22D基础性表达,PPO和SP22D在体时可能均是以二聚体形式存在。 WP=14 约氏疟原虫感染后,雌斯氏按蚊成蚊血淋巴内PPO和SP22D水平是上升的,约氏疟原虫卵囊黑化后二者呈现下降表达,而中肠内PPO却升高。2-DE及PMF发现,用药后中肠糖代谢、结构和细胞信息联系等蛋白表达水平下降。 5.利用PPO和SP兼并引物和RT-PCR技术,成功地从斯氏按蚊雌成蚊全蚊、血淋巴或中肠内克隆到差异表达PPO1、SP1 和SP2基因,三基因均呈现基础性表达,但是吸正常鼠血、约氏疟原虫感染血或用药诱导卵囊黑化后表达水平上表现不同程度的差异,吸正常鼠血、感染血或用药后SP1,PPO1和SP2表达均上调,尤其感染及用药后更明显。ISH进一步证实PPO1、SP1 和SP2均表达于血淋巴和中肠细胞内。 6.在约氏疟原虫感染及黑化期间,转录因子Relish也随斯氏按蚊食源的不同而发生基因转录水平的变化。吸正常小鼠血24h Relish转录呈轻微上调,吸感染血6h、12h、24h或48h的Relish表达均明显增加,吸感染血5d和6d的Relish表达逐渐下降而趋近吸糖水水平,然而,吸NA糖水12h或24h的Relish表达呈中等水平增加。 研究结果表明,PPO和SP两种蛋白酶是约氏疟原虫卵囊黑化通路中重要的成分,可能同时在参与卵囊黑化包裹反应中发挥了重要作用。从时相点分析,Relish转录因子很可能参与PPO级联的转录调控。NA导致约氏疟原虫和/或斯氏按蚊中肠上皮细胞的化学损伤可能是黑化的始动原因,可能抑制约氏疟原虫蛋白或/和斯氏按蚊中肠蛋白的合成,干扰了疟原虫的正常发育,致使疟原虫逃避按蚊免疫反应的能力受到减弱或者按蚊识别结构变化疟原虫的能力增强,血淋巴和/或中肠PPO级联成分便参与黑化过程。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李从军,龚建章;约氏疟原虫孢子增殖的影响因素观察[J];第二军医大学学报;1983年S1期
2 王艳艳;张健;徐文岳;段建华;黄复生;;蒿甲醚对约氏疟原虫在斯氏按蚊体内发育影响[J];成都医学院学报;2011年02期
3 王淑芬;时云林;郭保忠;高徐生;;疟疾病因性预防药筛选模型的研究 约氏鼠疟原虫-斯氏按蚊系统 Ⅰ.不同品系小鼠的敏感性[J];军事医学科学院院刊;1982年05期
4 王兴相,黄复生,张军,向超群;约氏疟原虫外期在大鼠及小鼠肝内的形态、退变及宿主细胞反应[J];第三军医大学学报;1985年03期
5 杨松,时超美,黄复生,吴玉章,张锡林;约氏疟原虫感染斯氏按蚊后血淋巴PPO的酶解激活[J];第三军医大学学报;2004年06期
6 杨松;黄复生;段建华;;斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究[J];中国人兽共患病杂志;2005年12期
7 杨松,黄复生,吴玉章,况明书,牟芝蓉,魏斌,;斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析[J];第三军医大学学报;2004年01期
8 任慧娴,王兴相,邓宝忠;营养对约氏疟原虫在斯氏按蚊体内孢子增殖的影响[J];第三军医大学学报;1985年02期
9 陈佩惠,卞英华,李凤舞,南华;感染疟原虫斯氏按蚊血淋巴元素组成的分析[J];寄生虫与医学昆虫学报;1994年03期
10 杨松,黄复生,况明书,段建华;斯氏按蚊血淋巴在约氏疟原虫卵囊黑化时差异表达蛋白的SDS-PAGE分析[J];第三军医大学学报;2003年08期
11 时超美,黄复生,段建华,况明书;斯氏按蚊血细胞对约氏疟原虫卵囊黑化的影响[J];中国人兽共患病杂志;2003年01期
12 杨松;黄复生;;斯氏按蚊转录因子Relish基因克隆、定位及不同食源条件下表达[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年05期
13 贺松琴 ,徐琼;感染约氏疟原虫斯氏按蚊体内的血液消化——蚊胃内酶活性检测[J];国外医学.寄生虫病分册;2000年06期
14 徐晓春,瞿逢伊,宋关鸿,徐建农;蚊媒感染疟原虫后应答性表达增高基因的富集和筛选[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2001年06期
15 徐晓春,瞿逢伊,宋关鸿,徐建农;斯氏按蚊泛素羧端水解酶对约氏疟原虫感染应答性表达增高(英文)[J];Entomologia Sinica;2002年03期
16 邱宗文,张锡林,徐文岳,王英;约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶的变化[J];第三军医大学学报;2004年06期
17 时超美,黄复生,况明书,段建华;斯氏按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化的关系[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年01期
18 王淑芬,时云林,郭保忠,高徐生;不同品系小鼠对约氏疟原虫-斯氏按蚊系统敏感性的观察[J];动物学杂志;1983年03期
19 刘燕明;孔德芳;王瑞芳;;约氏疟原虫蚊期生物学初步研究[J];首都医科大学学报;1983年02期
20 黄家章;;鼠疟原虫生物学的研究 Ⅰ.各纯系小鼠对约氏鼠疟原虫、斯氏按蚊系统敏感性的观察(二)[J];实验动物与比较医学;1981年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄复生;时超美;段建华;况明书;;斯氏按蚊血细胞对约氏疟原虫卵囊黑化的影响[A];昆虫学创新与发展——中国昆虫学会2002年学术年会论文集[C];2002年
2 杨松;黄复生;况明书;徐文岳;段建华;;斯氏按蚊血淋巴差异表达蛋白的SDS-PAGE分析[A];昆虫学创新与发展——中国昆虫学会2002年学术年会论文集[C];2002年
3 郭秀梅;王东;王恒;;约氏疟原虫疫苗候选抗原基因Pydyn的表达及其免疫保护性的研究[A];中国动物学会第七届全国青年寄生虫学工作者学术讨论会论文摘要集[C];2002年
4 闵浩巍;王建华;王国英;郑军;;玉米ZmTSO1-like基因参与植物脱落酸的信号调控[A];2011全国植物生物学研讨会论文集[C];2011年
5 高吉青;刘升发;韩伟;吴汉洲;王世媛;杨彩霞;洪凌仙;章军;周克夫;;胸腺素原(ProTα)作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的研究[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年
6 徐文岳;黄复生;张锡林;况明书;段建华;;大劣按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
7 罗健辉;刘玉章;王平美;;聚丙烯酰胺生产与粉体技术[A];2003年全国粉体设备—技术—产品信息交流会论文集[C];2003年
8 吴忆;冯辉;郑丽;刘军;马世红;曹雅明;;CD4~+CD25~+调节性T细胞在P.yoelii感染早期BALB/c和DBA/2小鼠的应答差异[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
9 夏海江;杨永洁;孟维忠;唐峰;;聚丙烯酰胺在防治田间水土流失中的应用[A];中国水利学会一九九九年优秀论文集[C];1999年
10 赖林海;李杨;李嵬;万劢;刘晓磊;王玉荣;;聚乙烯-b-聚丙烯酰胺的制备与表征[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨松;斯氏按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系及信号调控机制研究[D];第三军医大学;2004年
2 张健;TEP1在抗疟药—硝喹诱导按蚊黑化反应中机理的研究[D];第三军医大学;2008年
3 周云霞;高分子量抗盐聚丙烯酰胺工业化生产技术研究[D];西南石油学院;2004年
4 王继春;蚊体内疟原虫雄配子体出丝机制的研究[D];中国医科大学;2003年
5 杨骛远;氢氧化铝—聚丙烯酰胺杂化材料的制备和稀溶液行为及其絮凝性能研究[D];浙江大学;2005年
6 陈远光;人大肠癌组织蛋白质组二维凝胶电泳技术的建立及应用[D];中南大学;2003年
7 王东;鼠疟红内期动力素蛋白亚单位、核酸疫苗与细胞颗粒疫苗免疫效果的比较研究[D];中国协和医科大学;2002年
8 王英;大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关蛋白的研究[D];第三军医大学;2006年
9 崔建国;辐射致癌相关蛋白质筛选及其表达研究[D];第二军医大学;2006年
10 刘瑞;ROS介导的以Nrf2为核心的抗氧化防御体系对肺纤维化的调控机制研究[D];第四军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王艳艳;影响约氏疟原虫在按蚊体内发育的因素及机制的初步研究[D];第三军医大学;2011年
2 陈继德;约氏疟原虫子孢子侵入相关基因分析及235kDa棒状体蛋白研究[D];第三军医大学;2006年
3 王真瑜;环介导等温扩增技术检测疟原虫方法的建立及其应用[D];东华大学;2012年
4 陈德坚;新型造纸助剂N—氯代聚丙烯酰胺的应用机理研究[D];福建师范大学;2002年
5 彭添兴;废纸脱墨废水处理中高分子絮凝剂的构效研究[D];福建师范大学;2004年
6 朱立平;反相悬浮聚合制备功能聚合物微球[D];天津大学;2004年
7 李建华;聚丙烯酰胺/苯酚/间苯二酚/甲醛有机交联体系交联机理及动力学研究[D];华南热带农业大学;2005年
8 雍丽珠;Hofmann反应法制备高电荷密度阳离子型/两性型聚电解质的研究[D];福建师范大学;2005年
9 岳波;纳米颗粒增强一次性使用葡萄糖传感器的制备与性能[D];四川大学;2005年
10 王东芝;毛细管电色谱聚合物整体柱的制备与应用基础研究[D];曲阜师范大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 马守贵;油田用聚丙烯酰胺大增[N];中国化工报;2009年
2 陈丹江;我国聚丙烯酰胺市场大有可为[N];中国化工报;2009年
3 王昕;全球聚丙烯酰胺行业复苏动力足[N];中国化工报;2010年
4 记者 王志田 通讯员 马宏多;中国石油聚丙烯酰胺集中采购节支近3亿元[N];中国石油报;2010年
5 通讯员 司丽华;国内最大聚丙烯酰胺装置投产[N];中国石油报;2003年
6 李玉芳;聚丙烯酰胺应用有潜力差距待缩小[N];中国化工报;2002年
7 通讯员 刘晶;大庆炼化研制成聚丙烯酰胺[N];中国石油报;2000年
8 王志田 通讯员 董辉;大庆炼化均聚型聚丙烯酰胺合格率稳步攀升[N];中国石油报;2004年
9 记者 高伟;大庆炼化聚丙烯酰胺合格率达100%[N];中国石油报;2001年
10 莹华;国产聚丙烯酰胺供应有缺口[N];中国矿业报;2001年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978