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《第三军医大学》 2004年
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Survivin在胶质瘤中的表达及其反义核酸对胶质瘤细胞增殖、分化和凋亡的影响

王志成  
【摘要】:目的: 探讨胶质瘤中survivin蛋白的表达及其临床意义以及survivin反义核酸对胶质瘤细胞survivin表达、细胞增殖、分化和凋亡的影响,为进一步深入研究survivin在胶质瘤发生发展中的作用提供资料。 方法: 1. 收集胶质瘤石蜡标本91例,其中Ⅰ级 26 例、Ⅱ级 54 例、Ⅲ-Ⅳ级 11 例。用免疫组化染色检测瘤组织中survivin和PCNA蛋白的表达情况; 用TUNEL技术检测细胞凋亡的变化。2. 应用分子生物学技术,构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP–SVVas,并用脂质体介导转染胶质瘤细胞株SHG-44细胞,经G418筛选阳性转染细胞克隆,检测其转染前后的细胞生长曲线、细胞周期以及细胞凋亡的改变,通过RT-PCR、免疫组化及western blot检测细胞中survivin mRNA和蛋白的表达及PCNA、GFAP蛋白的表达。 结果:1. 胶质瘤细胞中有survivin蛋白的表达,且随着肿瘤级别的增高,瘤细胞survivin蛋白的表达增强,Ⅰ~Ⅳ级胶质瘤细胞中survivin蛋白阳性表达的百分率分别为Ⅰ级30.8%、Ⅱ级57.4%、Ⅲ~Ⅳ级72.7%。2. 胶质瘤细胞中survivin蛋白的表达与凋亡指数呈负相关,与PCNA的标记指数呈正相关。3. 成功构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并用脂质体导入胶质瘤细胞株SHG-44细胞中,且有效表达,使SHG-44细胞中survivin mRNA和蛋白表达水平均降低。4. Survivin反义核酸转染SHG-44细胞,经G418筛选获得阳性克隆。与转染空质粒的SHG-44细胞和未转染的SHG-44细胞相比,上述稳定转染细胞的生长速度减慢,出现G0/G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少,PCNA标记指数降低、细胞凋亡指数增高和GFAP表达增强。 结论:1. 胶质瘤细胞中不仅有survivin蛋白的表达,且其表达程度与肿瘤的恶性程度有关。2.成功构建survivin反义核酸真核表达载体。3. 反义survivin可明显降低胶质瘤细胞survivin基因在转录和翻译水平的表达。4. 反义survivin抑制胶质瘤细胞株SHG-44细胞的增殖、促进其分化和凋亡。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R739.4

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