收藏本站
《第三军医大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素的重组大肠杆菌ghost型疫苗的制备及鉴定

王宁  
【摘要】:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp) 是一种定植于胃内的革兰氏染色阴性、螺杆状或S 状的微需氧菌,可引发慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡等上消化道疾病,并与胃癌、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生有关。由于传统的抗生素疗法面临着价格高、耐药性等诸多问题,开发有效的Hp 疫苗成为防治Hp 感染的研究热点。目前研发的Hp 疫苗,多是采用基因工程获得HP 的有效抗原,再辅以佐剂,如福氏佐剂、CT、LT,脂质A,但这些佐剂都只是非特异地加强抗原的免疫效应。而传统的灭活疫苗虽有好的保护作用,但是现用的加热、照射、化学处理等灭活方法,常常引起抗原性的降低和改变。 “Bacterial ghost”作为一种新型疫苗或抗原递送系统,是通过控制PhiX174 噬菌体E 裂解基因在细菌中表达得以制备的,其实质是一种无细菌胞浆和核酸的空细菌外膜。据报道,E 裂解基因编码的蛋白在细菌胞壁上可形成穿膜隧道,通过此隧道胞浆成分全部渗出。因为这种形式保留了和活菌一样完整的细菌胞膜结构和相关抗原蛋白,故而能够携带外源抗原靶向黏附于体内黏膜组织并易于被相应抗原提呈细胞捕获。Hp 粘附于胃上皮细胞是其定植进而致病的前提,有效阻断Hp 粘附是防治Hp 感染的途径之一。现在认为幽门螺杆菌黏附素A(Hp adhesion A,HpaA)是Hp 的主要黏附因子,该蛋白为Hp 所特有的抗原成分,其氨基酸序列高度保守,且多数Hp 感染患者血清中能检测到HpaA 抗体,因此可作为理想的Hp 疫苗靶抗原。 本课题尝试用“Bacterial ghost”这一新型疫苗递送形式和内佐剂来传输HpaA 抗原,拟构建表达HpaA 的重组大肠杆菌ghost 疫苗,即先把HpaA 锚定表达于大肠杆菌的胞膜,然后诱导细菌裂解以制备表达HpaA 的重组大肠杆菌ghost。本研究中,在成功制备大肠杆菌ghost 的基础上,采用两种技术路线制备表达HpaA 的重组大肠杆菌ghost:一种为双质粒共表达法,即将含裂解基因盒的裂解质粒pHH43 和含hpaA 表达盒的表达质粒pBIOEX-E’-hpaA 同时转入大肠杆菌BL21,先IPTG 诱导HpaA 表达,再热诱导E 裂解蛋白表达以制备重组ghost;二为单质粒双表达法,即将裂解基因盒和hpaA 表达盒构建到同一质粒pET-28a 上,先IPTG 诱导表达HpaA 蛋白,再用热诱导表达E 裂解蛋白而获得重组ghost。主要研究内容简述如下:
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 谢波;重组双基因支气管败血波氏杆菌幽灵的研究[D];南昌大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 倪龙兴,史俊南,陈镔复;细菌胞外膜泡的电镜观察[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1994年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韦传宝;贾玉成;杜宇;;芋花叶病毒检测试剂盒的研制[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年04期
2 张运锋;黄光和;李希国;谭学林;;普通菜豆农艺性状相关性分析及主成分分析[J];安徽农学通报;2008年07期
3 尹荣焕;尹荣兰;杨玉英;潘树德;苏振山;白文林;;PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究[J];安徽农业科学;2006年02期
4 韩芬霞;;猪肝脏基因组DNA提取与纯化的研究[J];安徽农业科学;2006年16期
5 刘开华;王三保;邢淑婕;;食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测[J];安徽农业科学;2007年02期
6 刘爱荣;陈双臣;;农杆菌介导Ds转座因子的黄瓜遗传转化[J];安徽农业科学;2007年23期
7 张卫林;赵晶;李芬;;冰浴时间对氯化钙转化法转化效率的影响[J];安徽农业科学;2007年30期
8 江春雨;郭泽坤;;人泛素基因原核表达载体构建、表达及鉴定[J];安徽农业科学;2008年02期
9 陈丽梅;殷飞;李昆志;魏云林;林连兵;;耐受甲醛并能利用甲醇细菌的分离及其基因组文库的构建[J];安徽农业科学;2008年03期
10 黄剑飞;李健;刘淇;王群;;纳豆芽孢杆菌对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液粘附的研究[J];安徽农业科学;2008年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐义流;张绍铃;;梨活体花柱内花粉RNA的降解[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 陈秀蓉;杨成德;贾迎春;;西瓜细菌性果斑病菌的分离鉴定[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
3 李智媛;屈淑平;崔崇士;;美洲南瓜AFLP反应体系的优化与建立[A];中国园艺学会南瓜分会西南地区南瓜产业化发展研讨会暨第三届会员代表大会论文集[C];2009年
4 李青;钟青萍;王丽;;海产品中副溶血弧菌的PCR快速检测方法的建立[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
5 谈安群;钟广炎;江东;闫虎斌;王淼;;用抑制性消减杂交法分离兴春椪柑干旱胁迫诱导表达的cDNA[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
6 魏兰兰;谷鸿喜;;16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
7 周兴;张居农;;蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[A];中国奶牛协会2007年会论文集(上册)[C];2007年
8 魏庆宽;李瑾;傅婷霞;柏雪莲;崔勇;王用斌;张佃波;王洪法;付斌;刘玉冰;宰德福;黄炳成;刘克义;韩广东;;抗弓形虫感染DNA疫苗的研究[A];山东预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
9 张天笑;王秀利;袁野;;DNA疫苗佐剂研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
10 杨忠义;曹永生;苏艳;刘晓利;李华惠;卢义宣;;中国栽培稻的籼稻和粳稻分类及方法(综述)[A];云南省作物学会2004—2006年优秀论文选集[C];2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑瑜;银杏核心种质构建初探[D];华中农业大学;2010年
2 曹晶;风疹病毒(RV)包膜糖蛋白E1特异基因片段的原核表达[D];南京医科大学;2009年
3 罗素娟;家蚕细胞周期依赖性蛋白激酶家族(CDK)的研究[D];浙江理工大学;2010年
4 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
5 刘静;家蚕BmycaCR基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
6 葛红秀;家蚕钙磷蛋白(BmCAPS)的原核表达及定位分析[D];浙江理工大学;2010年
7 梁莉惠;家蚕BmCH基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
8 梁晓艳;人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用[D];郑州大学;2010年
9 张舟;HIV-1 DNA疫苗及免疫途径优化[D];山东农业大学;2010年
10 朱美真;山东某地方品系鸡鸡胚中禽白血病病毒的分离及序列分析[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 袁森泉,林颖,Karen Register;支气管败血博代氏菌研究的新进展[J];国外畜牧学(猪与禽);2000年05期
2 张仁洪,王琴,沙莎;家兔鼻炎细菌性病因的研究概况[J];四川畜牧兽医学院学报;1996年01期
3 魏天文,傅林锋,宁磊,蒋仲芳,吴祥林;开放环境中家兔微生物和寄生虫携带状况调查[J];上海实验动物科学;1997年03期
4 徐立东,童宇峰,王金凤;金黄色葡萄球菌核酸酶C末端去9肽对酶蛋白溶液构象的影响[J];生物物理学报;2003年01期
5 佟承刚,鲍国连,韦强;家兔传染性鼻炎病原菌的分离及其致病作用的研究[J];中国畜禽传染病;1994年02期
6 朱召芹;噬菌体裂解系统及其相关蛋白的研究进展[J];中国预防医学杂志;2004年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 梅峰,周志华,凌娜佳;幽门螺杆菌的CagA和VacA的致病机制及其临床意义[J];免疫学杂志;2001年S1期
2 张学英,焦健,李岩,王江滨;48例消化性溃疡患者幽门螺杆菌的耐药性调查[J];微生物学杂志;2003年02期
3 黄雪萍;通过粘膜初免和全身加强免疫来增强对幽门螺杆菌抗原的粘膜和全身免疫应答[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2005年01期
4 袁素琴;李春香;李宝山;;幽门螺杆菌对健康的影响[J];家庭护士;2006年24期
5 ;幽门螺杆菌诱导宿主信号传导机理[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1998年05期
6 朱人敏;幽门螺杆菌的致病特性[J];铁道医学;1998年04期
7 秦西琳;幽门螺杆菌在儿科研究的新进展[J];华夏医学;1999年04期
8 廖文俊,陈湖,朱森林,陈洁,陈为,胡品津;表达幽门螺杆菌UreA和KatA双价抗原的鼠伤寒菌疫苗株的初步构建[J];中国人兽共患病杂志;2000年05期
9 ;我国儿童与成人感染幽门螺杆菌属同类型[J];山东中医药大学学报;2000年03期
10 代敏;幽门螺杆菌基因组结构特征研究进展[J];微生物学免疫学进展;2001年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈洪;;三联疗法治疗幽门螺杆菌致慢性荨麻疹4例[A];全国中西医结合变态反应第二次学术会议暨中国中西医结合学会变态反应专业委员会成立大会论文汇编[C];2004年
2 田雨;高文;王蔚虹;张孝平;胡伏莲;;阿司匹林对幽门螺杆菌外膜蛋白表达变化的初步研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
3 李淑德;李兆申;纪徐淮;许国铭;;幽门螺杆菌胃上皮细胞IL-8转录信号传导机制[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
4 冯百岁;姚雪华;赵国强;;幽门螺杆菌CagA绿色荧光蛋白真核表达载体的构建[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
5 邵伟;刘成国;方富昌;周燕;黄海东;;胃镜清洗消毒对幽门螺杆菌的杀灭作用观察[A];中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C];2007年
6 胡品津;萧树东;张万岱;胡伏莲;;中华医学会全国第三届幽门螺杆菌学术会议纪要[A];中国中西医结合学会第十四次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2002年
7 陈洪;;三联疗法治疗幽门螺杆菌致慢性荨麻疹4例[A];中华医学会第二次全国变态反应学术会议论文汇编[C];2004年
8 叶嗣颖;李耿;田拥军;张正茂;崔斌;宋启发;熊萍;;幽门螺杆菌对甲硝唑耐药性及多重相关基因DNA和氨基酸序列分析[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
9 刘海燕;方平楚;陶然;俞建国;陈晶;;浙江省胃癌高发区幽门螺杆菌cag PAI的分布[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
10 孟灵梅;闫秀娥;张冬红;张静;周丽雅;林三仁;丁士刚;;幽门螺杆菌在中国胃癌高低发区儿童和成人中的流行现况[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 于菲;三招除幽门螺杆菌[N];医药养生保健报;2009年
2 李鑫;幽门螺杆菌——胃内的隐形杀手[N];中国医药报;2010年
3 任海军;西蓝花嫩芽抑制幽门螺杆菌[N];中国中医药报;2009年
4 文/徐天景(副主任医师);可恶的幽门螺杆菌[N];上海中医药报;2002年
5 武和平;幽门螺杆菌是如何传播的[N];文汇报;2003年
6 记者李天舒;幽门螺杆菌被西兰花“打败”[N];健康报;2009年
7 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;拯救幽门螺杆菌![N];医药经济报;2003年
8 李增烈;幽门螺杆菌劣迹斑斑[N];大众卫生报;2004年
9 记者 卢文洁 通讯员 朱素颖 王薇;大人婴儿同睡 易感染幽门螺杆菌[N];广州日报;2004年
10 山西中医学院教授 李殊响;幽门螺杆菌不仅害胃还伤身[N];健康报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘爽;幽门螺杆菌σ~(54)调节稳定期细菌存活及硫代蒜素抗菌的机制研究[D];山东大学;2010年
2 赵英会;IFN-γ对幽门螺杆菌和胃黏膜细胞作用及其机制的初步探讨[D];山东大学;2011年
3 王广;幽门螺杆菌热休克蛋白60与冠状动脉粥样硬化关系的研究[D];吉林大学;2010年
4 袁文臻;抗幽门螺杆菌治疗对纠正H.pylori阳性患者缺铁性贫血的系统评价[D];兰州大学;2010年
5 宋春芳;幽门螺杆菌相关性胃疾病凋亡特性及其调控机制的研究[D];中国医科大学;2003年
6 张新;幽门螺杆菌干扰胃黏膜上皮核转录因子SOX2/Hath1表达机制的初步研究[D];第三军医大学;2011年
7 郝庆;幽门螺杆菌对克拉霉素耐药的分子基础[D];中国医科大学;2002年
8 邵春红;幽门螺杆菌响应环境胁迫的蛋白质组学研究[D];山东大学;2008年
9 陈晓华;拮抗幽门螺杆菌益生菌的筛选及其干预机制的研究[D];江南大学;2011年
10 马剑颖;脾胃湿热证与幽门螺杆菌感染及热休克蛋白70表达的关系[D];广州中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王宁;表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素的重组大肠杆菌ghost型疫苗的制备及鉴定[D];第三军医大学;2005年
2 江月萍;PCR-RFLP方法鉴定慢性胃炎、胃癌幽门螺杆菌基因分型[D];青岛大学;2001年
3 李惠影;抗幽门螺杆菌治疗消化性溃疡的临床研究[D];吉林大学;2005年
4 邵春红;幽门螺杆菌适应性蛋白的初步研究[D];山东大学;2005年
5 万荣;幽门螺杆菌耐药性及其临床意义[D];江西医学院;2000年
6 陆志瑛;1500例上消化道疾病患者幽门螺杆菌耐药率分析[D];浙江大学;2008年
7 刘淼;幽门螺杆菌vacA基因毒性片段与hpaA基因的原核表达及初步应用[D];重庆医科大学;2003年
8 江花;溃宁口服液抑杀幽门螺杆菌的实验研究[D];成都中医药大学;2003年
9 吴小茜;幽门螺杆菌oipA DNA疫苗的免疫保护作用研究[D];福建医科大学;2005年
10 谢萍;CagA阳性幽门螺杆菌与胃十二指肠疾病[D];江西医学院;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026