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《第三军医大学》 2005年
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利用寡核苷酸芯片检测耐药基因ampC的初步研究

蔡瑜娇  
【摘要】:抗生素的使用不当导致细菌耐药性的日益严重是临床抗感染治疗面临的世界性难题。解决这一问题的方法之一是根据感染细菌的耐药性有针对性地使用抗生素。目前对细菌耐药性的检测仍然依赖传统的药敏实验,其最大的缺点是诊断周期长,临床医生无法在感染早期对患者合理用药。通过基因芯片技术直接检测细菌耐药基因,可以快速、敏感地确定细菌的耐药性,为合理使用抗生素提供依据。革兰阴性杆菌是目前临床常见的致病菌,其治疗主要依赖β-内酰胺类抗生素。革兰阴性杆菌耐受β-内酰胺类抗生素主要由细菌产生的β-内酰胺酶引起。β-内酰胺酶种类繁多,其中较为重要的包括AmpC 酶、ESBLs 等。AmpC 酶属于Bush 分类中的I 类酶或Ambler C 类酶,其编码基因是ampC。我们发现,不同种属的细菌的ampC 基因序列显著不同。 目的分析临床革兰阴性杆菌中ampC 耐药结构基因的分布与耐药状况的关系;在此基础上建立起利用多重PCR 及寡核苷酸芯片技术检测ampC 耐药结构基因的方法。 方法 1、标本菌株收集来源于第三军医大学第一附属医院及儿童医院检验科2003 年10月至2004 年5 月临床分离的菌株。 2、用PCR 检测389 株革兰阴性杆菌中ampC 基因的分布。 3、应用头孢西丁三维实验的方法检测细菌产AmpC 酶的状况。 4、应用microscan walkaway-4.0 鉴定细菌的耐药性。 5、建立多重PCR 体系检测7 种不同种属细菌中的ampC 基因。 6、利用标记Cy3 的PCR 产物与寡核苷酸芯片杂交的技术建立检测ampC 基因的方法。结果 1、在389 株革兰阴性杆菌中,ampC 基因的阳性率为:51.7%。在不同种属的细菌中,ampC 基因的分布不一致:阴沟肠杆菌34 株(79.1%)、埃希氏菌属93 株(79.5%)、克雷伯氏菌属14 株(1.22%)、假单胞菌属41 株(61.2%)和不动杆菌属14 株(50.0%)。 2、在201 株ampC 基因阳性的菌株中,有34 株细菌产AmpC 酶,ampC 基因表达的总阳性率为:16.9%。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 何昕;多丽波;;AmpC β-内酰胺酶实验室检测方法及进展[J];中华医院感染学杂志;2011年21期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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2 蔡瑜娇,刘岚,刘昌林,刘昕,黄正根,高玉梅;儿童革兰阴性杆菌耐药状况及ampC基因的检测与分析[J];第三军医大学学报;2004年21期
3 蔡瑜娇,刘岚,刘昌林,刘昕,黄正根,高玉梅,袁科;革兰阴性杆菌耐药与产AmpC酶的检测及其与耐药的关系分析[J];第三军医大学学报;2005年04期
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前6条
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5 王燕;任华丽;李津娜;陶家驹;葛庚芝;邵宝生;董志云;肖玉燕;张韵琴;高丽芳;张玉华;路强;陈宝元;;天津地区近3年下呼吸道不动杆菌感染的临床和细菌耐药分析[A];第七次全国中西医结合呼吸病学术交流大会论文汇编(二)[C];2004年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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6 邓笑伟;嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性与整合子关系的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
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10 彭草云;芪银合剂治疗老年肺炎的临床观察及其体外抑菌实验研究[D];北京中医药大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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10 黄靖宇;耐氨基糖苷类铜绿假单胞菌的分子耐药机制研究[D];广州医学院;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 顾怡明,张杰,俞云松,周志慧,杜小玲;检测阴沟肠杆菌产AmpC酶的三种方法比较[J];检验医学;2005年01期
2 苏丹虹;肖庆忠;张钧;;双抑制剂扩散协同法检测AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶[J];现代检验医学杂志;2007年05期
3 夏丽萍,王扬,李艳玲,康健;三种检测AmpC β-内酰胺酶方法的比较及其临床应用[J];中国医科大学学报;2003年01期
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 周志慧,李兰娟,俞云松,马亦林;阴沟肠杆菌耐药及ampC基因表达状况研究[J];中华传染病杂志;2002年06期
【相似文献】
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1 王辉,刘颖梅,王清涛,孙宏莉,陈民钧;北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年05期
2 孙爱慧;邓晓慧;陈苏婉;郑风劲;刘小康;;质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的研究[J];四川生理科学杂志;2007年03期
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4 冯群岭;李西帆;顾宜;张建芳;;头孢噻肟/舒巴坦复方新药对产酶革兰阴性杆菌体外抑菌效应研究[J];现代检验医学杂志;2008年01期
5 潘芸;徐瑞龙;单小云;卜黎红;;高产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌质粒AmpC的检测[J];江西医学检验;2006年04期
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7 吴琼;张祎博;倪语星;;细菌β-内酰胺酶快速检测及分型试剂盒的应用评估[J];检验医学;2010年01期
8 赵虎,何铭君,张时良;基因扩增法快速检测阴沟肠杆菌Amp C β-内酰胺酶[J];第二军医大学学报;2004年12期
9 陈济超;李璐;邓锐;戴宁;高占成;;12株产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药基因检测[J];中国现代医学杂志;2008年17期
10 张丽梅;徐韫健;孙慧冰;李乃健;廖伟娇;;革兰阴性杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测[J];中国热带医学;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 回文广;赵廷昌;孙福在;张卉;王建荣;高孝强;田丽;;实时荧光定量PCR原理及其应用[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
4 王平;王辉;许文兵;朱元珏;;肺组织结核分枝杆菌巢式PCR快速检测[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
5 刘家云;徐修礼;张建芳;樊新;孙怡群;都晓柯;;铜绿假单胞菌产酶型别与抗菌药物的体外抗菌活性研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
6 张太翔;凌宗帅;徐彪;梁成珠;朱来华;孙军;王洪兵;;实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 吴驰;张红梅;詹能勇;邓永聪;单万水;余卫业;;荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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2 通言;ABI实时定量PCR仪获准与rRT—PCR Flu Panel联用[N];中国医药报;2008年
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9 ;社区获得性肺炎[N];农村医药报(汉);2008年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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5 陈智勇;胰腺癌相关基因mucin4的初步研究[D];第二军医大学;2005年
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7 马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
8 姜秀虹;肠杆菌科细菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的研究[D];吉林大学;2009年
9 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
10 夏乾峰;二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D];重庆医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡瑜娇;利用寡核苷酸芯片检测耐药基因ampC的初步研究[D];第三军医大学;2005年
2 涂婉;AmpC β-内酰胺酶向持续高产型转变的研究[D];复旦大学;2010年
3 李蓓菡;用PCR的方法检测长春地区革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因分布及类型[D];吉林大学;2008年
4 王稳;利用RT-PCR验证基于小鼠外显子芯片发现的脑缺血相关基因表达的研究[D];西北农林科技大学;2010年
5 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
6 郭世奎;实时荧光定量PCR技术对结直肠癌患者肠道微生态的研究[D];昆明医学院;2011年
7 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
8 王洪波;采用实时定量PCR方法对儿童肺炎支原体血症进行诊断的研究[D];吉林大学;2010年
9 胡伟昭;副溶血弧菌:分子分型与主要耐药基因双重PCR检测[D];浙江大学;2010年
10 许遐;牡蛎包拉米虫检测及鉴定体系的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
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